Импульсный анализ

В биохимии и молекулярной биологии импульсно-погоняющий анализ — это метод изучения клеточного процесса, происходящего с течением времени, путем последовательного воздействия на клетки меченого соединения (импульс), а затем того же соединения в немеченой форме (погоня). ^[1]

Механизм

Выбранная клетка или группа клеток сначала подвергается воздействию меченого соединения (импульса), которое должно быть включено в изучаемую молекулу или систему (см. также « Импульсная маркировка »). Затем соединение проходит метаболические пути и используется в синтезе изучаемого продукта. Например, радиоактивно меченная форма лейцина ( ³H-лейцин) может поставляться группе бета-клеток поджелудочной железы , которые затем используют эту аминокислоту в синтезе инсулина .

Вскоре после введения меченого соединения (обычно около 5 минут, но фактическое время зависит от исследуемого объекта) в окружающую среду попадает избыток того же, но немеченого вещества (погоня). Следуя предыдущему примеру, производство инсулина продолжится, но он больше не будет содержать радиоактивный лейцин, введенный в фазу пульса, и не будет виден с помощью методов радиоактивного обнаружения. Однако движение меченого инсулина, вырабатываемого во время импульсного периода, все же можно было отслеживать внутри клетки. ^[2]

Использование

Этот метод полезен для определения активности определенных клеток в течение длительного периода времени. Метод использовался для изучения протеинкиназы С , убиквитина и многих других белков. Метод также использовался для доказательства существования и функции фрагментов Оказаки . Джордж Паладе использовал импульсную погоню за радиоактивными аминокислотами, чтобы выяснить секреторный путь . ^[3]^[4]

Ссылки

^ Такахаши М., Оно Ю. (2003). «Импульсный анализ протеинкиназы С». Протоколы протеинкиназы C. Методы Мол. Биол. Том. 233. стр. 163–70. дои : 10.1385/1-59259-397-6:163 . ISBN 978-1-59259-397-2 . ПМИД 12840506 .
^ Фергюсон П.Л., Кумбс Д.Х. (март 2000 г.). «Импульсный анализ сборки хвоста бактериофага Т4 in vivo». Дж. Мол. Биол . 297 (1): 99–117. дои : 10.1006/jmbi.2000.3551 . ПМИД 10704310 .
^ Хойт М.А., Зич Дж., Такеучи Дж., Чжан М., Говертс С., Коффино П. (апрель 2006 г.). «Глицин-аланиновые повторы нарушают правильное развертывание субстрата протеасомой» . ЭМБО Дж . 25 (8): 1720–9. дои : 10.1038/sj.emboj.7601058 . ПМК 1440830 . ПМИД 16601692 . Рисунки и таблицы, показывающие анализ импульсно-чейзингового анализа. {{cite journal}}: Внешняя ссылка в |quote= ( помощь )
^ Альбертс, Б. (март 2002 г.). Молекулярная биология клетки, четвертое издание . ISBN 978-0-8153-3218-3 .

Эта по молекулярной биологии статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

[1] Такахаши М., Оно Ю. (2003). «Импульсный анализ протеинкиназы С». Протоколы протеинкиназы C. Методы Мол. Биол. Том. 233. стр. 163–70. дои : 10.1385/1-59259-397-6:163 . ISBN 978-1-59259-397-2 . ПМИД 12840506 .

[2] Фергюсон П.Л., Кумбс Д.Х. (март 2000 г.). «Импульсный анализ сборки хвоста бактериофага Т4 in vivo». Дж. Мол. Биол . 297 (1): 99–117. дои : 10.1006/jmbi.2000.3551 . ПМИД 10704310 .

[3] Хойт М.А., Зич Дж., Такеучи Дж., Чжан М., Говертс С., Коффино П. (апрель 2006 г.). «Глицин-аланиновые повторы нарушают правильное развертывание субстрата протеасомой» . ЭМБО Дж . 25 (8): 1720–9. дои : 10.1038/sj.emboj.7601058 . ПМК 1440830 . ПМИД 16601692 . Рисунки и таблицы, показывающие анализ импульсно-чейзингового анализа. {{cite journal}}: Внешняя ссылка в |quote= ( помощь )

[4] Альбертс, Б. (март 2002 г.). Молекулярная биология клетки, четвертое издание . ISBN 978-0-8153-3218-3 .

[1]

[2]

[3]

[4]