Компенсация (цитометрия)

В цитометрии . компенсация коррекция перекрытия сигналов между каналами спектров излучения разных флуорохромов — математическая ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}

Фотоны , испускаемые флуорохромами, имеют разную энергию и длину волны, а поскольку в проточных цитометрах используются фотоумножители (ФЭУ) для преобразования фотонов в электроны , детектор может регистрировать сигнал от более чем одного флуорохрома. Это создает перекрытие сигнала (перекрытие), которое не может быть устранено оптической системой и должно корректироваться электронным способом. Компенсацию можно выполнить с помощью различного программного обеспечения для проточной цитометрии, такого как Flowjo, Flowlogic, Kaluza и т. д. Первая компенсация данных была выполнена в 1977 году Майклом Локеном и др. во время двухцветного эксперимента, в котором мышиные спленоциты окрашивались флуоресцеином и родамином . ^{[ 3 ]}

перелив

Когда одна ячейка маркируется двумя или более флуорохромами, добавленная яркость одного флуорохрома к другому создает значительный фоновый шум и влияет на силу сигнала. Это называется переливом. Физическое перекрытие между различными спектрами излучения флуорохромов может активировать разные рецепторы, отличные от тех, которые предназначены для данной длины волны. Возможность исправить это обусловлено тем фактом, что перекрытие является линейной функцией, поэтому измеренный сигнал можно усреднить и, таким образом, скорректировать. Эта коррекция называется компенсацией.

Компенсация необходима для того, чтобы иметь возможность различать популяции клеток. Это делается путем измерения спектрального перекрытия различных флуорохромов и использования измеренных значений для создания матрицы. Затем матрица инвертируется и дает фактические значения компенсации. Затем проточный цитометр использует эти значения для корректировки перекрытия в каждом детекторе для каждого цвета. ^{[ 4 ]}

Ссылки

^ Редерер, М. (1 ноября 2001 г.). «Спектральная компенсация для проточной цитометрии: артефакты визуализации, ограничения и предостережения» . Цитометрия . 45 (3): 194–205. doi : 10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c . ISSN 0196-4763 . ПМИД 11746088 .
^ Бэгвелл, CB; Адамс, Э.Г. (20 марта 1993 г.). «Компенсация спектрального перекрытия флуоресценции для любого количества параметров проточной цитометрии». Анналы Нью-Йоркской академии наук . 677 : 167–184. дои : 10.1111/j.1749-6632.1993.tb38775.x . ISSN 0077-8923 . ПМИД 8494206 .
^ Локен, MR; Паркс, ДР; Герценберг, Луизиана (июль 1977 г.). «Двухцветная иммунофлуоресценция с использованием сортировщика клеток, активируемого флуоресценцией» . Журнал гистохимии и цитохимии . 25 (7): 899–907. дои : 10.1177/25.7.330738 . ISSN 0022-1554 . ПМИД 330738 .
^ Редерер, М. (1 ноября 2001 г.). «Спектральная компенсация для проточной цитометрии: артефакты визуализации, ограничения и предостережения» . Цитометрия . 45 (3): 194–205. doi : 10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c . ISSN 0196-4763 . ПМИД 11746088 .

Внешние ссылки

[1] Редерер, М. (1 ноября 2001 г.). «Спектральная компенсация для проточной цитометрии: артефакты визуализации, ограничения и предостережения» . Цитометрия . 45 (3): 194–205. doi : 10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c . ISSN 0196-4763 . ПМИД 11746088 .

[2] Бэгвелл, CB; Адамс, Э.Г. (20 марта 1993 г.). «Компенсация спектрального перекрытия флуоресценции для любого количества параметров проточной цитометрии». Анналы Нью-Йоркской академии наук . 677 : 167–184. дои : 10.1111/j.1749-6632.1993.tb38775.x . ISSN 0077-8923 . ПМИД 8494206 .

[3] Локен, MR; Паркс, ДР; Герценберг, Луизиана (июль 1977 г.). «Двухцветная иммунофлуоресценция с использованием сортировщика клеток, активируемого флуоресценцией» . Журнал гистохимии и цитохимии . 25 (7): 899–907. дои : 10.1177/25.7.330738 . ISSN 0022-1554 . ПМИД 330738 .

[4] Редерер, М. (1 ноября 2001 г.). «Спектральная компенсация для проточной цитометрии: артефакты визуализации, ограничения и предостережения» . Цитометрия . 45 (3): 194–205. doi : 10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c . ISSN 0196-4763 . ПМИД 11746088 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]