Сверхкритическая угловая флуоресцентная микроскопия

Флуоресцентная микроскопия под критическим углом ( SAF ) — это метод обнаружения и характеристики флуоресцентных веществ (белков, биомолекул, фармацевтических препаратов и т. д.) и их поведения вблизи или даже адсорбированных или связанных на поверхностях. Метод позволяет наблюдать молекулы на расстоянии менее 100–0 нанометров от поверхности даже при наличии вокруг высоких концентраций флуоресцентных частиц. Используя асферическую линзу для возбуждения образца лазерным светом, флуоресценция, излучаемая образцом, избирательно собирается выше критического угла полного внутреннего отражения и направляется параболической оптикой на детектор. Метод был изобретен в 1998 году в лабораториях Стефана Зегера в Регенсбургском университете (Германия), а затем в Цюрихском университете (Швейцария).

Полярные графики направления флуоресценции (диполя) на границе раздела воды и стекла.

Принцип SAF-микроскопии

Принцип работы СНФ-микроскопии заключается в следующем: флуоресцентный образец не излучает флуоресценцию изотропно, когда приближается к поверхности, но примерно 70% излучаемой флуоресценции направляется в твердую фазу. Здесь основная часть входит в твердое тело выше критического угла. ^{[ 1 ]} Когда эмиттер расположен всего в 200 нм над поверхностью, флуоресцентный свет, попадающий в твердое тело выше критического угла, резко уменьшается. Следовательно, СНФ-микроскопия идеально подходит для различения молекул и частиц на поверхности или вблизи нее, а также всех остальных образцов, присутствующих в объеме. ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}

Типичная установка SAF

Типичная установка SAF состоит из лазерной линии (обычно 450–633 нм), которая отражается в асферическую линзу дихроичным зеркалом. Линза фокусирует лазерный луч в образце, вызывая флуоресценцию частиц. Затем флуоресцентный свет проходит через параболическую линзу и достигает детектора, обычно фотоумножителя или лавинного фотодиода . Также возможно расположить элементы SAF в виде массивов и отобразить выходные данные на ПЗС-матрице, что позволяет обнаруживать несколько аналитов. ^{[ 4 ]}

Избранные публикации

^ Дж. Эндерляйн, Т. Рукштуль, С. Сигер: Высокоэффективное оптическое обнаружение флуоресценции, генерируемой поверхностью. Прил. Опция 38 (4) 724-32 (1999)
^ Т. Ракштуль, М. Ранкл, С. Сигер: Высокочувствительное биосенсорство с использованием прибора сверхкритической угловой флуоресценции (SAF), Biosensors&Bioelectronics 18 (9) 1193-1199 (2003).
^ Т. Ракштуль, С. Сигер: Объемы обнаружения аттолитров с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения, Optic Letters 29, 569-571 (2004)
^ Хилл, Д; Макдоннелл Б; Сердечный С; Басабе-Десмонт Л; Синий Р; Трнавский М; МакАтамни С; О'Кеннеди Р; Маккрейт Б. (11 мая 2011 г.). «Новая одноразовая платформа для биочипов, использующая флуоресценцию под сверхкритическим углом для улучшения сбора флуоресценции». Биомедицинские микроустройства . 13 (4): 759–67. дои : 10.1007/s10544-011-9546-2 . ПМИД 21559870 . S2CID 22221110 .

Эта статья об химии незавершена . аналитической Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

[1] Дж. Эндерляйн, Т. Рукштуль, С. Сигер: Высокоэффективное оптическое обнаружение флуоресценции, генерируемой поверхностью. Прил. Опция 38 (4) 724-32 (1999)

[2] Т. Ракштуль, М. Ранкл, С. Сигер: Высокочувствительное биосенсорство с использованием прибора сверхкритической угловой флуоресценции (SAF), Biosensors&Bioelectronics 18 (9) 1193-1199 (2003).

[3] Т. Ракштуль, С. Сигер: Объемы обнаружения аттолитров с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения, Optic Letters 29, 569-571 (2004)

[4] Хилл, Д; Макдоннелл Б; Сердечный С; Басабе-Десмонт Л; Синий Р; Трнавский М; МакАтамни С; О'Кеннеди Р; Маккрейт Б. (11 мая 2011 г.). «Новая одноразовая платформа для биочипов, использующая флуоресценцию под сверхкритическим углом для улучшения сбора флуоресценции». Биомедицинские микроустройства . 13 (4): 759–67. дои : 10.1007/s10544-011-9546-2 . ПМИД 21559870 . S2CID 22221110 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]