Вторичный сюжет (кинетика)

В кинетике ферментов вторичный график использует точку пересечения или наклон нескольких графиков Лайнуивера-Берка для поиска дополнительных кинетических констант.

Например, если набор кривых v по [S] от фермента с механизмом пинг-понга (различный субстрат A, фиксированный субстрат B) нанести на график Лайнуивера-Бёрка , будет получен набор параллельных линий.

Следующее уравнение Михаэлиса-Ментен связывает начальную скорость реакции v ₀ с концентрациями субстрата [A] и [B]:

${\begin{aligned}{\frac {1}{v_{0}}}&={\frac {K_{M}^{A}}{v_{\max }{[}A{]}}}+{\frac {K_{M}^{B}}{v_{\max }{[}B{]}}}+{\frac {1}{v_{\max }}}\end{aligned}}$

Пересечение оси Y этого уравнения равно следующему:

${\begin{aligned}{\mbox{y-intercept}}={\frac {K_{M}^{B}}{v_{\max }{[}B{]}}}+{\frac {1}{v_{\max }}}\end{aligned}}$

Пересечение y определяется при нескольких различных фиксированных концентрациях субстрата B (и варьирующемся субстрате A). Затем значения пересечения оси y наносят на график в зависимости от 1/[B] для определения константы Михаэлиса для субстрата B. $K_{M}^{B}$, как показано на рисунке справа. Уклон равен $K_{M}^{B}$ разделенный на $v_{\max }$ и перехват равен 1 по $v_{\max }$.

Вторичный график ферментной системы пероксидазы хрена и о -фенилендиамина (с перекисью водорода в качестве второго субстрата)

Вторичный график в исследованиях ингибирования

Вторичный график также можно использовать для определения конкретной константы ингибирования K _I .

Для конкурентного ингибитора фермента кажущаяся константа Михаэлиса равна:

${\begin{aligned}{\mbox{apparent }}K_{m}=K_{m}\times \left(1+{\frac {[I]}{K_{I}}}\right)\end{aligned}}$

Таким образом, наклон графика Лайнуивера-Бёрка равен:

${\begin{aligned}{\mbox{slope}}={\frac {K_{m}}{v_{\max }}}\times \left(1+{\frac {[I]}{K_{I}}}\right)\end{aligned}}$

Если создать вторичный график, состоящий из значений наклона нескольких графиков Лайнуивера-Берка с различной концентрацией ингибитора [I], можно найти константу конкурентного ингибирования. Наклон вторичного участка, разделенного точкой пересечения, равен 1/K _I . Этот метод позволяет найти константу K _I , даже если значения константы Михаэлиса и v _max неизвестны.