Однобазовое расширение
Одноосновательное удлинение (SBE) — это метод определения идентичности нуклеотидного основания в определенном положении нуклеиновой кислоты . Метод используется для выявления однонуклеотидного полиморфизма (SNP).
В этом методе олигонуклеотидный праймер гибридизуется с комплементарной областью нуклеиновой кислоты с образованием дуплекса, при этом концевой 3'-конец праймера непосредственно прилегает к идентифицированному нуклеотидному основанию. С помощью ДНК-полимеразы олигонуклеотидный праймер ферментативно удлиняется на одно основание в присутствии всех четырех нуклеотидных терминаторов; нуклеотидный терминатор, комплементарный основанию в запрашиваемой матрице, включается и идентифицируется. Наличие всех четырех терминаторов подавляет неправильное включение некомплементарных нуклеотидов. Для определения идентичности включенного терминатора можно использовать множество подходов, включая флуоресцентное мечение, массовое мечение для масс-спектрометрии, изотопное мечение, мечение основания гаптеном и хромогенное обнаружение с помощью конъюгата антигаптенового антитела с ферментом (например, с помощью формат ELISA).
Метод был изобретен Филипом Гоэлетом, Майклом Кнаппом, Ричардом Дугласом и Стивеном Андерсоном во время работы в компании Molecular Tool. Этот подход был разработан для высокопроизводительного генотипирования SNP и первоначально назывался «Генетический битовый анализ» (GBA). Illumina, Inc. использует этот метод в своей технологии Infinium ( http://www.illumina.com/technology/beadarray-technology/infinium-hd-assay.html ) для измерения уровней метилирования ДНК в геноме человека.
Ссылки
[ редактировать ]- Филип Гоэлет, Майкл Р. Кнапп, Стивен Андерсон (1999), патент США № 5888819. Вашингтон, округ Колумбия: Ведомство США по патентам и товарным знакам.