Первичные и вторичные антитела
Первичные и вторичные антитела представляют собой две группы антител , которые классифицируются в зависимости от того, связываются ли они с антигенами или белками напрямую или нацелены на другое (первичное) антитело, которое, в свою очередь, связано с антигеном или белком .
Начальный
[ редактировать ]Первичные антитела могут быть очень полезны для обнаружения биомаркеров таких заболеваний, как рак, диабет, болезнь Паркинсона и Альцгеймера, и они используются для изучения абсорбции, распределения, метаболизма и выведения (ADME) и множественной лекарственной устойчивости (MDR). ) терапевтических средств.
вторичный
[ редактировать ]Вторичные антитела обеспечивают обнаружение и усиление сигнала, а также расширяют возможности антитела за счет конъюгации с белками. [1] Вторичные антитела особенно эффективны при иммуномечении . Вторичные антитела связываются с первичными антителами, которые непосредственно связываются с целевым антигеном(ами). первичного антитела При иммуномечении домен Fab связывается с антигеном и открывает свой домен Fc для вторичного антитела. Затем домен Fab вторичного антитела связывается с доменом Fc первичного антитела. Поскольку домен Fc является постоянным в пределах одного и того же класса животных, для связывания со многими типами первичных антител требуется только один тип вторичных антител. Это снижает стоимость за счет маркировки только одного типа вторичных антител вместо маркировки различных типов первичных антител. Вторичные антитела помогают повысить чувствительность и усиление сигнала благодаря связыванию нескольких вторичных антител с первичным антителом. [2]
Вторичные антитела из цельной молекулы иммуноглобулина являются наиболее часто используемым форматом, но их можно подвергнуть ферментативной обработке, чтобы обеспечить уточнение анализа. Фрагменты F(ab') 2 генерируются расщеплением пепсином для удаления большей части фрагмента Fc, что позволяет избежать распознавания рецепторами Fc на живых клетках или белком A или белком G. [3] При расщеплении папаином образуются Fab-фрагменты, которые удаляют весь Fc-фрагмент, включая шарнирную область, с получением двух моновалентных Fab-фрагментов. Их можно использовать для блокирования эндогенных иммуноглобулинов на клетках, тканях или других поверхностях, а также для блокирования экспонированных иммуноглобулинов в многочисленных экспериментах по мечению с использованием первичных антител одного и того же вида. [4]
Приложения
[ редактировать ]Вторичные антитела могут быть конъюгированы с такими ферментами, как пероксидаза хрена (HRP) или щелочная фосфатаза (AP); или флуоресцентные красители, такие как изотиоцианат флуоресцеина (FITC), родамина производные , красители Alexa Fluor ; или другие молекулы, которые будут использоваться в различных приложениях. Вторичные антитела используются во многих биохимических анализах. [5] включая:
- ИФА , включая множество тестов на ВИЧ
- Вестерн-блоттинг
- Иммуноокрашивание
- Иммуногистохимия
- Иммуноцитохимия
Ссылки
[ редактировать ]- ^ https://ptglab.com/news/blog/ Secondary-antibody-selection / Руководство по выбору вторичных антител .
- ^ «Вторичные антитела как зонды» . www.thermofisher.com . Проверено 31 мая 2017 г.
- ^ «F(ab')₂ Фрагмент вторичных антител - Jackson ImmunoResearch» . www.jacksonimmuno.com . Проверено 29 января 2021 г.
- ^ «Вторичные антитела к Fab-фрагментам - иммунные исследования Джексона» . www.jacksonimmuno.com . Проверено 29 января 2021 г.
- ^ «Вторичный обзор антител на основе официальных публикаций» . вторичное-антитело.com . Архивировано из оригинала 17 апреля 2008 г. Проверено 16 апреля 2008 г.