Гидролиз диацетата флуоресцеина

диацетата флуоресцеина ( FDA ) Анализы гидролиза можно использовать для измерения ферментативной активности микробов в образце. Яркое желто-зеленое свечение является наиболее сильным, когда ферментативная активность наибольшая. Это можно определить количественно с помощью спектрофлуориметра или спектрофотометра .

Приложения

Гидролиз FDA часто используется для измерения активности в образцах почвы и компоста; однако это может не дать точных показаний, если микробы с фазами более низкой активности, такие как эстеразы, сначала расщепляют флуоресцеин .

Он также используется в сочетании с йодидом пропидия (PI) для определения жизнеспособности эукариотических клеток. Живые клетки будут активно превращать нефлуоресцентный FDA в зеленое флуоресцентное соединение флуоресцеин, что является признаком жизнеспособности; в то время как ядра клеток с нарушенной мембраной будут флюоресцировать красным, что является признаком гибели клеток. В настоящее время окрашивание FDA/PI является стандартной оценкой жизнеспособности островков поджелудочной железы человека и их пригодности для трансплантации, когда показатель жизнеспособности превышает 70%.

Подготовка

Маточный раствор FDA готовят путем растворения 5 мг диацетата флуоресцеина в 1 мл ацетона . и сахарозу можно добавлять для тестирования жизнеспособности живых клеток. Пятно FDA необходимо хранить в темноте при температуре 4°C, иначе оно испортится.

Ссылки

3. «Анализ гидролиза диацетата флуоресцеина» http://www.eeescience.utoledo.edu/Faculty/Sigler/Von_Sigler/LEPR_Protocols_files/FDA%20assay.pdf.

• Министерство сельского хозяйства США (USDA): анализ гидролитической активности диацетата флуоресцеина для образцов почвы
• Диацетат флуоресцеина: потенциальный биологический индикатор засушливых почв