Поиск антигена

Извлечение антигена -это негриментативная предварительная обработка для иммуноокрашивания для уменьшения или устранения химических модификаций, вызванных фиксацией формалина, посредством высокого температурного нагрева или сильного щелочного раствора (не нагревающего).

Фон

В медицине большинство хирургически удаленных образцов тканей фиксируются в формалине (4% формальдегиде ) и встраиваются в парафин для сохранения морфологии для обзора патологами, использующими пятна и микроскопию для постановки диагноза. Тем не менее, формальдегид может вызывать химические модификации, которые снижают обнаруживаемость белков ( антигены ) при иммуногистохимии . Метод извлечения антигена-это негментативная предварительная обработка для иммуноокрашивания для уменьшения или устранения этих химических модификаций, вызванных формалином, посредством высокого температурного нагрева или сильного щелочного раствора (не нагревает). ^{[ 1 ]} Этот процесс восстанавливает антигены, маскируемые фиксацией формалина. В результате он позволяет успешно применять иммуногистохимию на фиксированных парафиновых встроенных парафиновых срезов. Без извлечения антигена большинство иммунооткрытей на фиксированных в формалине парафиновых срезов ткани не показывают окрашивания.

Поиск антигена был разработан доктором Шан-Ронг Ши в 1990 году и опубликован в 1991 году. ^{[ 2 ]} Методы извлечения антигена (AR) оказали глубокое влияние на медицинские исследования и диагностическую патологию, что позволило более точно и надежному окрашиванию образцов тканей и повышению точности диагностики различных заболеваний, включая рак. Поиск антигена считается вехой в истории иммуногистохимии. ^{[ 3 ]} Два основных метода извлечения антигена-это AR, вызванная тепловой ^{[ 2 ]} и не нагревающий щелочный AR. ^{[ 4 ]} Оба метода получили США патенты.

Извлечение антигена, вызванное теплом

Извлечение антигена, индуцированного тепловым, является наиболее широко используемой предварительной обработкой при иммуногистохимии для срезов с фиксированными парафином в формалине. Требуется кипящий депаррафинизированный формалин, фиксированные парафиновые срезы, встроенные в воду, либо в воде, либо в различных буферных растворах. Из-за ограниченного применения не нагревающего AR и распространенности AR-индуцированного тепла термин «поиск антигена» (AR) чаще всего используется для обозначения вызванного теплом AR.

Биохимические исследования химической реакции между белком и формалином Fraenkel-Conrat и коллегами в 1940-х годах показали, что перекрестные связи между формалином и белком могут быть изменены с помощью высокотемпературного нагрева или сильной щелочной обработки. Это наблюдение сформировало основу для развития AR. ^{[ 1 ]} Механизм поиска антигена неясен. Он полагал, что он обращает перекрестные связи и позволяет восстановить вторичную третичную структуру эпитопа. ^{[ 5 ]}

Извлечение антигена, вызванное теплом, можно выполнить с помощью микроволновых печей, скороварки, пароварки с овощами, автоклавов или водяных ванн.

Наиболее важными факторами для эффективности извлечения антигена, индуцированного теплом, являются время и температура условий нагрева. Химический состав и значение pH раствора буферного раствора также способствуют эффективности извлечения антигена, вызванного теплом. ^{[ 1 ]} Таким образом, протокол AR-иммуногистохимии должен быть оптимизирован для каждого типа ткани, метода фиксации и антигена с использованием «тестовой батареи», чтобы максимизировать восстановление антигена в фиксированных парафиновых участках. ^{[ 1 ]}

Не нагревающий щелочный, индуцированный антиген

Не нагревающий щелочный индуцированный антиген-поиск требует погружения слайдов в сильный щелочный раствор (гидроксид натрия и метанол). Первоначально он был разработан для иммуноокрашивания на фиксированных формалиновых, регулярно декальцифицированных, встроенных на целлоидиновом человеческом человеческом височной кости. ^{[ 4 ]} Принцип этого метода также основан на изучении Fraenkel - Conrat и коллег, как описано выше. ^{[ 1 ]} Из-за ограниченного применения не нагревающего AR этот метод не известен.

Ферментное пищеварение

Ущечивание ферментов, также называемая протеазой, индуцированным протеазой, поиск эпитопов некоторыми авторами, представляет собой старую методику, используемое в иммуногистохимии для фиксированных в формалинских участках, встроенных в парафиновые срезы перед появлением AR. ^{[ 6 ]}^{[ 7 ]} При расщеплении ферментов ферменты, такие как протеиназа К, трипсин и пепсин, используются для восстановления связывания антител с его эпитопом. Предполагаемый механизм действия - это расщепление пептидов, которые маскируют эпитоп, тем самым восстанавливая антигенность.

Недостатки пищеварения ферментов включают низкую частоту успеха для восстановления иммунореактивности и потенциального разрушения морфологии тканей и интересующего антигена. После развития AR пищеварение ферментов редко использовалось в иммуногистохимии для фиксированных формалиновых встроенных парафиновых срезов тканей.

Хотя расщепление ферментов и извлечение антигена нацелена на ту же проблему в иммуногистохимии, эти два метода отличаются как в способе действия, так и в эффективности, что гарантирует отдельную номенклатуру. ^{[ 8 ]}

Замороженный сечение извлечение эпитопа

Замороженное сечение эпитопное извлечение относится к двум методам поиска антигена, разработанными специально для фиксированных альдегид-фиксированных срезов замороженных тканей криостата или культивируемых клеток; Додецилсульфат натрия и методы нагревания. ^{[ 9 ]}

Метод додецилсульфата натрия требует 5 -минутной предварительной обработки с использованием 1% додецилсульфата натрия и может вызывать увеличение интенсивности окрашивания путем иммуногистохимии, а также иммунофлуоресценции. ^{[ 10 ]}

Нагревание EN Bloc принимает блок ткани, фиксающиеся в параформальдегиде, нагревает их в растворах поиска, а затем замораживает их, используя сухой лед. Нагревание уже используется в поиске антигена и, как было доказано, является широко эффективным, но были показано, что предыдущие методы нагрева убивали замороженные срезы. Этот метод доказал, что повышает иммунореактивность для широкого спектра антигенов и в некоторых случаях снижает окрашивание фонового окрашивания. ^{[ 11 ]}

Ссылки

^ Jump up to: ^а ^{беременный} ^в ^{дюймовый} ^и Ши, Шан-Ронг; Кот, Ричард Дж.; Тейлор, Клайв Р. (март 1997 г.). «Иммуногистохимия из поиска антигена: прошлое, настоящее и будущее» . Журнал гистохимии и цитохимии . 45 (3): 327–343. doi : 10.1177/002215549704500301 . ISSN 0022-1554 . PMID 9071315 .
^ Jump up to: ^а ^{беременный} Ши, ср; Ключ, я; Калра, К.Л. (июнь 1991 г.). «Извлечение антигена в фиксированных формалиновых тканях с парафином: метод усиления иммуногистохимического окрашивания на основе нагрева в микроволновой печи срезов тканей» . Журнал гистохимии и цитохимии . 39 (6): 741–748. doi : 10.1177/39.6.1709656 . ISSN 0022-1554 .
^ Jagirdar, Jaishree (2008-03-01). «Иммуногистохимия: тогда и сейчас» . Архив патологии и лабораторной медицины . 132 (3): 323–325. doi : 10.5858/2008-132-323-itan . ISSN 1543-2165 . PMID 18318576 .
^ Jump up to: ^а ^{беременный} Ши, ср; Coté, c; Калра, Кл; Тейлор, Кр; Тандон, А.К. (июнь 1992 г.). «Методика извлечения антигенов в фиксированных формалиновых, регулярно декальцифицированных, врученных целлоидином человеческой височной срезы для иммуногистохимии» . Журнал гистохимии и цитохимии . 40 (6): 787–792. doi : 10.1177/40.6.1588025 . ISSN 0022-1554 . PMID 1588025 .
^ «Методы поиска антигена» . Системы исследований и разработок . Получено 20 марта 2019 года .
^ Хуан, Sn; Minassian, H.; Больше, JD (октябрь 1976 г.). «Применение иммунофлуоресцентного окрашивания на парафиновые срезы улучшилось с помощью пищеварения трипсина» . Лабораторное расследование . 35 (4): 383–390. ISSN 0023-6837 . PMID 62099 .
^ Battifora, H.; Копински М. (август 1986). «Влияние расщепления протеазы и продолжительность фиксации на иммуноокрашивание кератинов. Сравнение фиксации формалина и этанола» . Журнал гистохимии и цитохимии . 34 (8): 1095–1100. doi : 10.1177/34.8.2426335 . ISSN 0022-1554 . PMID 2426335 .
^ Ши, Шан-Ронг; Ши, Ян; Тейлор, Клайв Р.; Гу, Цзян (ноябрь 2019). «Новые измерения техники извлечения антигена: 28 лет развития, практики и расширения» . Прикладная иммуногистохимия и молекулярная морфология . 27 (10): 715–721. doi : 10.1097/pai.0000000000000778 . ISSN 1541-2016 . PMID 31107695 .
^ «Методы поиска антигена, методы, протоколы» . www.ihcworld.com . Архивировано из оригинала 2007-11-01 . Получено 2021-05-03 .
^ Браун, Д. (1996). «Извлечение антигена в срезах ткани криостата и культивируемых клетках при обработке додецилсульфатом натрия (SDS)». Гистохимия и клеточная биология . 105 (4): 261–267. doi : 10.1007/bf01463929 . PMID 9072183 . S2CID 495553 .
^ Ино, Хидетоши (2003). «Извлечение антигена путем нагрева en bloc для предварительно фиксированного замороженного материала». Журнал гистохимии и цитохимии . 51 (8): 995–1003. doi : 10.1177/002215540305100803 . PMID 12871981 .

[:0-1] Jump up to: ^а ^{беременный} ^в ^{дюймовый} ^и Ши, Шан-Ронг; Кот, Ричард Дж.; Тейлор, Клайв Р. (март 1997 г.). «Иммуногистохимия из поиска антигена: прошлое, настоящее и будущее» . Журнал гистохимии и цитохимии . 45 (3): 327–343. doi : 10.1177/002215549704500301 . ISSN 0022-1554 . PMID 9071315 .

[:1-2] Jump up to: ^а ^{беременный} Ши, ср; Ключ, я; Калра, К.Л. (июнь 1991 г.). «Извлечение антигена в фиксированных формалиновых тканях с парафином: метод усиления иммуногистохимического окрашивания на основе нагрева в микроволновой печи срезов тканей» . Журнал гистохимии и цитохимии . 39 (6): 741–748. doi : 10.1177/39.6.1709656 . ISSN 0022-1554 .

[3] Jagirdar, Jaishree (2008-03-01). «Иммуногистохимия: тогда и сейчас» . Архив патологии и лабораторной медицины . 132 (3): 323–325. doi : 10.5858/2008-132-323-itan . ISSN 1543-2165 . PMID 18318576 .

[:2-4] Jump up to: ^а ^{беременный} Ши, ср; Coté, c; Калра, Кл; Тейлор, Кр; Тандон, А.К. (июнь 1992 г.). «Методика извлечения антигенов в фиксированных формалиновых, регулярно декальцифицированных, врученных целлоидином человеческой височной срезы для иммуногистохимии» . Журнал гистохимии и цитохимии . 40 (6): 787–792. doi : 10.1177/40.6.1588025 . ISSN 0022-1554 . PMID 1588025 .

[5] «Методы поиска антигена» . Системы исследований и разработок . Получено 20 марта 2019 года .

[6] Хуан, Sn; Minassian, H.; Больше, JD (октябрь 1976 г.). «Применение иммунофлуоресцентного окрашивания на парафиновые срезы улучшилось с помощью пищеварения трипсина» . Лабораторное расследование . 35 (4): 383–390. ISSN 0023-6837 . PMID 62099 .

[7] Battifora, H.; Копински М. (август 1986). «Влияние расщепления протеазы и продолжительность фиксации на иммуноокрашивание кератинов. Сравнение фиксации формалина и этанола» . Журнал гистохимии и цитохимии . 34 (8): 1095–1100. doi : 10.1177/34.8.2426335 . ISSN 0022-1554 . PMID 2426335 .

[8] Ши, Шан-Ронг; Ши, Ян; Тейлор, Клайв Р.; Гу, Цзян (ноябрь 2019). «Новые измерения техники извлечения антигена: 28 лет развития, практики и расширения» . Прикладная иммуногистохимия и молекулярная морфология . 27 (10): 715–721. doi : 10.1097/pai.0000000000000778 . ISSN 1541-2016 . PMID 31107695 .

[9] «Методы поиска антигена, методы, протоколы» . www.ihcworld.com . Архивировано из оригинала 2007-11-01 . Получено 2021-05-03 .

[10] Браун, Д. (1996). «Извлечение антигена в срезах ткани криостата и культивируемых клетках при обработке додецилсульфатом натрия (SDS)». Гистохимия и клеточная биология . 105 (4): 261–267. doi : 10.1007/bf01463929 . PMID 9072183 . S2CID 495553 .

[11] Ино, Хидетоши (2003). «Извлечение антигена путем нагрева en bloc для предварительно фиксированного замороженного материала». Журнал гистохимии и цитохимии . 51 (8): 995–1003. doi : 10.1177/002215540305100803 . PMID 12871981 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]