Тест на нейтрализацию уменьшения налета
Тест нейтрализации с уменьшением количества бляшек используется для количественной оценки титра нейтрализующих антител к вирусу. [ 1 ] [ 2 ]
Образец сыворотки или раствор тестируемого антитела разводят и смешивают с вирусной суспензией. Его инкубируют, чтобы антитела могли вступить в реакцию с вирусом. Его выливают на сливающийся монослой клеток-хозяев. Поверхность клеточного слоя покрыта слоем агара или карбоксиметилцеллюлозы, чтобы предотвратить беспорядочное распространение вируса. Концентрацию бляшкообразующих единиц можно оценить по количеству бляшек (областей инфицированных клеток), образовавшихся через несколько дней. В зависимости от вируса единицы, образующие бляшки, измеряются с помощью микроскопического наблюдения, флуоресцентных антител или специфических красителей, которые реагируют с инфицированными клетками. [ 3 ]
Концентрация сыворотки, позволяющая уменьшить количество бляшек на 50% по сравнению с вирусом, не содержащим сыворотки, позволяет определить, сколько антител присутствует или насколько они эффективны. Это измерение обозначается как значение PRNT 50 .
В настоящее время он считается «золотым стандартом» обнаружения и измерения антител, способных нейтрализовать вирусы, вызывающие многие заболевания. [ 4 ] [ 5 ] Он имеет более высокую чувствительность , чем другие тесты, такие как гемагглютинация и многие коммерческие иммуноферментные анализы, без ущерба для специфичности . Более того, он более специфичен, чем другие серологические методы диагностики некоторых арбовирусов.
Однако этот тест является относительно громоздким и трудоемким (несколько дней) по сравнению с наборами ОВОС, которые дают быстрые результаты (обычно от нескольких минут до одного). несколько часов). [ нужна ссылка ]
Проблема этого анализа, которая недавно была выявлена, заключается в том, что способность антител к нейтрализации зависит от состояния созревания вириона и типа клеток, используемых в анализе. [ 6 ] Следовательно, если для анализа используется неправильная клеточная линия, может показаться, что антитела обладают способностью к нейтрализации, хотя на самом деле это не так, или наоборот, они могут показаться неэффективными, хотя на самом деле обладают способностью к нейтрализации. [ нужна ссылка ]
См. также
[ редактировать ]- ИФА – метод обнаружения антигена с использованием антитела и фермента.
- Иммунный комплекс - образованная молекула, связывающая антигены с антителами.
- Количественное определение вируса с использованием анализа бляшек
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Шмидт, Нью-Джерси; Деннис, Дж; Леннетт, Э.Г. (июль 1976 г.). «Тест нейтрализации уменьшения бляшек на цитомегаловирус человека, основанный на повышенном поглощении нейтрального красного цвета инфицированными вирусом клетками» . Журнал клинической микробиологии . 4 (1): 61–66. doi : 10.1128/jcm.4.1.61-66.1976 . ISSN 0095-1137 . ПМЦ 274391 . ПМИД 182716 .
- ^ Класс, П.Дж. (9 сентября 2014 г.). «Нейтрализация инфекционности вирусов антителами: старые проблемы в новых перспективах» . Достижения биологии . 2014 : 1–24. дои : 10.1155/2014/157895 . ПМЦ 4835181 . ПМИД 27099867 .
- ^ Шмидт, Нью-Джерси; Дж. Деннис; Э. Х. Леннетт (июль 1976 г.). «Тест нейтрализации уменьшения бляшек на цитомегаловирус человека, основанный на повышенном поглощении нейтрального красного цвета инфицированными вирусом клетками» (PDF) . Журнал клинической микробиологии . 4 (1): 61–66. doi : 10.1128/jcm.4.1.61-66.1976 . ISSN 0095-1137 . ПМЦ 274391 . ПМИД 182716 .
- ^ Томас, Стивен Дж.; Ананда Нисалак; Кэтрин Б. Андерсон; Дэниел Х. Либрати; Сирипен Калаянарудж; Дэвид В. Вон; Роберт Путнак; Роберт В. Гиббонс; Ричард Джарман; Тимоти П. Энди (ноябрь 2009 г.). «Тест нейтрализации снижения бляшек денге (PRNT) при первичных и вторичных инфекциях вируса денге: как изменения в условиях анализа влияют на эффективность» . Американский журнал тропической медицины и гигиены . 81 (5): 825–833. дои : 10.4269/ajtmh.2009.08-0625 . ISSN 0002-9637 . ПМЦ 2835862 . ПМИД 19861618 .
- ^ Ратнам, С; В Гадаг; Р Вест; Дж. Беррис; Э. Оутс; Ф. Стед; Н. Буильян (1 апреля 1995 г.). «Сравнение коммерческих наборов для иммуноферментного анализа с тестом на нейтрализацию уменьшения количества бляшек для обнаружения антител к вирусу кори» . Дж. Клин. Микробиол . 33 (4): 811–815. doi : 10.1128/JCM.33.4.811-815.1995 . ПМК 228046 . ПМИД 7790442 .
- ^ Мукерджи, С.; Дауд, Калифорния; Манхарт, CJ; Леджервуд, Дж. Э.; Дурбин, AP; Уайтхед, СС; Пирсон, TC (2014). «Механизм и значение клеточной нейтрализации флавивирусов» . Журнал вирусологии . 88 (13): 7210–7220. дои : 10.1128/JVI.03690-13 . ISSN 0022-538X . ПМК 4054442 . ПМИД 24741083 .