Гибрид с уменьшенным радиацией
Гибрид с уменьшенной радиацией — это процедура определения расположения генетических маркеров относительно друг друга. Относительное расположение этих маркеров можно объединить в физическую карту или генетическую карту . Радиационный гибридный метод начинается как еще один способ амплификации и очистки ДНК , первый шаг в любом проекте секвенирования; радиация используется для разрыва ДНК на части, и эти части включаются в гибридную клетку; гибрид можно выращивать в больших количествах. Затем можно проверить наличие различных генетических маркеров с помощью ПЦР и анализа сцепления, чтобы определить расстояние между маркерами. То есть, если два генетических маркера находятся рядом друг с другом, вероятность того, что они будут разделены разрушающей ДНК радиацией, меньше. Этот метод аналогичен традиционному анализу сцепления, где мы полагаемся на генетическую рекомбинацию для расчета расстояния между двумя генетическими маркерами.
Процедура
[ редактировать ]В процедуре используются две клеточные линии, ни одна из которых не может выжить в токсичной среде. но содержат гены, которые могут противостоять токсину, если он содержится в одной и той же клетке. Исследуемая линия клеток подвергается облучению, вызывающему разрывы в ДНК. Эти клетки сливаются с другой клеточной линией, образуя гибрид. Если гибрид будет включать в себя гены обеих клеток, он сможет выжить в токсичной среде.
Выжившие клетки можно выращивать в больших количествах, амплифицируя таким образом ДНК, включенную в облученную клеточную линию. Можно подготовить образец ДНК из линии гибридных клеток и использовать ПЦР для амплификации двух специфических генетических маркеров. Прогнав продукты ПЦР на гель, можно определить, присутствуют ли оба маркера в клеточной линии. Если оба маркера обычно находятся в гибриде, можно заключить, что они находятся рядом друг с другом.
Ссылки
[ редактировать ]- Мастерс, Джон Р.В. (2000). «Перенос генов с помощью облучения». Культура клеток животных: практический подход . Издательство Оксфордского университета. стр. 252–255. ISBN 0-19-963796-2 .