Первичные и вторичные антитела
Первичные и вторичные антитела представляют собой две группы антител , которые классифицируются на основе того, связываются ли они с антигенами или белками непосредственно или нацелены на другое (первичное) антитело, которое, в свою очередь, связано с антигеном или белком .
Начальный
[ редактировать ]Первичное антитело может быть очень полезным для обнаружения биомаркеров для таких заболеваний, как рак, диабет, болезнь Паркинсона и Альцгеймера, и они используются для изучения поглощения, распределения, метаболизма и экскреции (ADME) и мульти-капля ) терапевтических агентов.
Второстепенный
[ редактировать ]Вторичные антитела обеспечивают обнаружение и амплификацию сигнала, а также расширение полезности антитела посредством конъюгации к белкам. [ 1 ] Вторичные антитела особенно эффективны при иммунолубировании . Вторичные антитела связываются с первичными антителами, которые непосредственно связаны с антигеном -мишенем. первичного антитела При иммунолебильной зоне FAB -домен связывается с антигеном и подвергает его домену FC вторичным антителам. Затем фальшивый домен вторичного антитела связывается с доменом FC первичного антитела. Поскольку домен FC является постоянным в одном и том же классе животных, для связывания со многими типами первичных антител требуется только один тип вторичного антитела. Это снижает стоимость за счет маркировки только одного типа вторичного антитела, а не маркировки различных типов первичных антител. Вторичные антитела помогают повысить чувствительность и амплификацию сигнала из -за множественных вторичных антител, связывающихся с первичным антителом. [ 2 ]
Вторичные антитела молекулы целых иммуноглобулинов являются наиболее часто используемым форматом, но они могут быть ферментативно обработаны, чтобы обеспечить уточнение анализа. F (AB ') 2 фрагменты генерируются пищеварением пепсина для удаления большей части фрагмента FC, это позволяет избежать распознавания рецепторами FC на живых клетках или до белка A или белка G. [ 3 ] Пищеварение папаина генерирует фрагменты FAB, которые удаляют весь фрагмент FC, включая область шарнира, давая две одновалентные фальшивые фрагменты. Их можно использовать для блокировки эндогенных иммуноглобулинов на клетках, тканях или других поверхностях, а также для блокировки подверженных воздействию иммуноглобулинов в множественных экспериментах по маркировке с использованием первичных антител от одного и того же вида. [ 4 ]
Приложения
[ редактировать ]Вторичные антитела могут быть конъюгированы с ферментами, такими как пероксидаза хрена (HRP) или щелочная фосфатаза (AP); или флуоресцентные красители , такие как изотиоцианат флуоресцеина (FITC), родамина производные , красители Alexa Fluor ; или другие молекулы, которые будут использоваться в различных приложениях. Вторичные антитела используются во многих биохимических анализах [ 5 ] включая:
- ELISA , в том числе много тестов на ВИЧ
- Вестерн -блот
- Иммуноокрашивание
- Иммуногистохимия
- Иммуноцитохимия
Ссылки
[ редактировать ]- ^ https://ptglab.com/news/blog/secondary-antibody-selection/ Руководство по выбору вторичного антитела
- ^ «Вторичные антитела как зонды» . www.thermofisher.com . Получено 2017-05-31 .
- ^ «F (ab ') ₂ Фрагмент вторичные антитела - Jackson Immunoresearch» . www.jacksonimmuno.com . Получено 2021-01-29 .
- ^ «Fab Fragment вторичные антитела - Jackson Immunoresearch» . www.jacksonimmuno.com . Получено 2021-01-29 .
- ^ «Вторичный обзор антител на основе формальных публикаций» . вторичный-Антител.com . Архивировано из оригинала 2008-04-17 . Получено 2008-04-16 .