Анализ фосфоаминокислот
Анализ фосфоаминокислот , или PAA, представляет собой экспериментальный метод, используемый в молекулярной биологии для определения того, какая аминокислота или кислоты фосфорилируются в белке.
Техника
[ редактировать ]Белок сначала фосфорилируется с помощью 32 P-меченный АТФ, обычно с помощью киназного анализа in vitro . Большая часть аминокислот в белке затем гидролизуются, обычно с использованием сильной кислоты, такой как соляная кислота . Эти аминокислоты затем разделяются с помощью двумерной тонкослойной хроматографии вместе со стандартами аминокислот для трех аминокислот, которые фосфорилируются у эукариот: серина , треонина и тирозина . Эти стандарты аминокислот можно визуализировать на подложке для ТСХ путем воздействия нингидрина , который окрашивает аминокислоты в видимый фиолетовый цвет при нагревании до ~ 100 ° C. Радиоактивные аминокислоты можно обнаружить с помощью авторадиографии, а наложение двух изображений покажет, какие аминокислоты фосфорилируются.
Ссылки
[ редактировать ]- Ротберг П.Г., Харрис Т.Дж.Р., Номото А. и Виммер Е. (1978) O4-(5'-уридилил)тирозин представляет собой связь между связанным с геномом белком и РНК полиовируса. Учеб. Натл. акад. наук. США 75 , 4868-4872.
- Экхарт В., Хатчинсон М.А. и Хантер Т. (1979)Активность фосфорилирования тирозина в иммунопреципитатах Т-антигена полиомы. Камера 18 , 925-933.