Jump to content

Ник перевод

Ник перевод [ 1 ] (или трансляция головы ), разработанная в 1977 году Питером Ригби и Полом Бергом, представляет собой метод мечения в молекулярной биологии , в котором ДНК-полимераза I используется для замены некоторых нуклеотидов последовательности ДНК их мечеными аналогами, создавая меченую последовательность ДНК. который можно использовать в качестве зонда при флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) или методах блоттинга . Его также можно использовать для радиомечения . [ 2 ]

Этот процесс называется трансляцией разрывов, поскольку обрабатываемая ДНК обрабатывается ДНКазой для образования одноцепочечных «разрывов». За этим следует замена в разорванных сайтах ДНК-полимеразой I , которая удлиняет 3'-гидроксильный конец , удаляя нуклеотиды за счет 5'-3'-экзонуклеазной активности и заменяя их dNTP . Чтобы радиоактивно пометить фрагмент ДНК для использования в качестве зонда в процедурах блоттинга, один из включенных в реакцию нуклеотидов метят радиоактивным изотопом в положении альфа- фосфата. Аналогичным образом вместо этого можно присоединить флуорофор для флуоресцентного мечения или антиген для иммунодетекции. Когда ДНК-полимераза I в конечном итоге отделяется от ДНК, она оставляет еще один разрыв в фосфатном остове. Ник «перешел» на некоторое расстояние в зависимости от процессивности полимеразы. Этот разрыв может быть запечатан ДНК-лигазой , или ее 3'-гидроксильная группа может служить матрицей для дальнейшей активности ДНК-полимеразы I. Запатентованные смеси ферментов коммерчески доступны для выполнения всех этапов процедуры за одну инкубацию.

Трансляция ника может вызвать двухцепочечный разрыв ДНК, если ДНК-полимераза I встретит еще один разрыв на противоположной цепи, что приведет к образованию двух более коротких фрагментов. Это не влияет на эффективность меченого зонда при гибридизации in-situ.

  1. ^ Ригби П.В., Дикманн М., Роудс К., Берг П. (июнь 1977 г.). «Маркировка дезоксирибонуклеиновой кислоты с высокой специфической активностью in vitro путем трансляции никеля с помощью ДНК-полимеразы I». Дж. Мол. Биол . 113 (1): 237–51. дои : 10.1016/0022-2836(77)90052-3 . ПМИД   881736 .
  2. ^ Мэтью К.Г. (1985). «Радиомечение ДНК путем перевода ника». Нуклеиновые кислоты . Методы Мол. Биол. Том. 2. С. 257–61. дои : 10.1385/0-89603-064-4:257 . ISBN  0-89603-064-4 . ПМИД   21374202 .


Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: c8025e2afc8d755be62d3fc96134d74c__1639743720
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/c8/4c/c8025e2afc8d755be62d3fc96134d74c.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Nick translation - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)