Ник перевод

Ник перевод ^{[ 1 ]} (или трансляция головы ), разработанная в 1977 году Питером Ригби и Полом Бергом, представляет собой метод мечения в молекулярной биологии , в котором ДНК-полимераза I используется для замены некоторых нуклеотидов последовательности ДНК их мечеными аналогами, создавая меченую последовательность ДНК. который можно использовать в качестве зонда при флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) или методах блоттинга . Его также можно использовать для радиомечения . ^{[ 2 ]}

Этот процесс называется трансляцией разрывов, поскольку обрабатываемая ДНК обрабатывается ДНКазой для образования одноцепочечных «разрывов». За этим следует замена в разорванных сайтах ДНК-полимеразой I , которая удлиняет 3'-гидроксильный конец , удаляя нуклеотиды за счет 5'-3'-экзонуклеазной активности и заменяя их dNTP . Чтобы радиоактивно пометить фрагмент ДНК для использования в качестве зонда в процедурах блоттинга, один из включенных в реакцию нуклеотидов метят радиоактивным изотопом в положении альфа- фосфата. Аналогичным образом вместо этого можно присоединить флуорофор для флуоресцентного мечения или антиген для иммунодетекции. Когда ДНК-полимераза I в конечном итоге отделяется от ДНК, она оставляет еще один разрыв в фосфатном остове. Ник «перешел» на некоторое расстояние в зависимости от процессивности полимеразы. Этот разрыв может быть запечатан ДНК-лигазой , или ее 3'-гидроксильная группа может служить матрицей для дальнейшей активности ДНК-полимеразы I. Запатентованные смеси ферментов коммерчески доступны для выполнения всех этапов процедуры за одну инкубацию.

Трансляция ника может вызвать двухцепочечный разрыв ДНК, если ДНК-полимераза I встретит еще один разрыв на противоположной цепи, что приведет к образованию двух более коротких фрагментов. Это не влияет на эффективность меченого зонда при гибридизации in-situ.

Ссылки

^ Ригби П.В., Дикманн М., Роудс К., Берг П. (июнь 1977 г.). «Маркировка дезоксирибонуклеиновой кислоты с высокой специфической активностью in vitro путем трансляции никеля с помощью ДНК-полимеразы I». Дж. Мол. Биол . 113 (1): 237–51. дои : 10.1016/0022-2836(77)90052-3 . ПМИД 881736 .
^ Мэтью К.Г. (1985). «Радиомечение ДНК путем перевода ника». Нуклеиновые кислоты . Методы Мол. Биол. Том. 2. С. 257–61. дои : 10.1385/0-89603-064-4:257 . ISBN 0-89603-064-4 . ПМИД 21374202 .

Эта о генетике статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

[1] Ригби П.В., Дикманн М., Роудс К., Берг П. (июнь 1977 г.). «Маркировка дезоксирибонуклеиновой кислоты с высокой специфической активностью in vitro путем трансляции никеля с помощью ДНК-полимеразы I». Дж. Мол. Биол . 113 (1): 237–51. дои : 10.1016/0022-2836(77)90052-3 . ПМИД 881736 .

[2] Мэтью К.Г. (1985). «Радиомечение ДНК путем перевода ника». Нуклеиновые кислоты . Методы Мол. Биол. Том. 2. С. 257–61. дои : 10.1385/0-89603-064-4:257 . ISBN 0-89603-064-4 . ПМИД 21374202 .

[ 1 ]

[ 2 ]