Асимметричная ПЦР

Асимметричная ПЦР — это разновидность ПЦР, используемая для преимущественной амплификации одной цепи исходной ДНК в большей степени, чем другой. ^[1] Этот метод находит применение в некоторых типах секвенирования и гибридизации наличие только одной из двух комплементарных цепей . , где требуется ^[2]

Методология

Асимметричная ПЦР отличается от обычной ПЦР избыточным количеством праймеров для выбранной цепи. Из-за медленной (арифметической) амплификации на более поздних стадиях реакции (после того, как лимитирующий праймер был израсходован) требуются дополнительные циклы ПЦР. ^[3]

В модификации этого процесса, известной как линейная послеэкспоненциальная ПЦР (LATE-PCR) , используется ограничивающий праймер с более высокой температурой плавления , чем у избыточного праймера, для поддержания эффективности реакции, поскольку предельная концентрация праймера снижается в середине реакции. ^[4]

Приложения

Асимметричную ПЦР можно использовать для образования одноцепочечной ДНК из двухцепочечной ДНК, которую затем используют для секвенирования ДНК в методе мутагенеза . ^{[ нужна ссылка ]} Одноцепочечная ДНК также важна для генерации аптамеров . ^[1]

Ссылки

^ Перейти обратно: ^а ^б Цитартан, Маримуту; и др. (декабрь 2011 г.). «Асимметричная ПЦР для получения оцДНК хорошего качества для производства ДНК-аптамеров» (PDF) . Сонгкланакарин Дж. Наук. Технол . 34 (2): 125–131. Архивировано из оригинала (PDF) 11 января 2020 г. Проверено 18 ноября 2017 г.
^ Вудделл, штат Калифорния; Берджесс, Р.Р. (1996). «Использование асимметричной ПЦР для создания длинных праймеров и одноцепочечной ДНК для включения аналогов сшивки в определенные участки ДНК-зонда» . Геном Рез . 6 (9): 886–892. дои : 10.1101/гр.6.9.886 . ПМИД 8889557 .
^ Хейат, Мохаммед; и др. (14 января 2017 г.). «Основные стратегии оптимизации условий асимметричной ПЦР как надежного метода создания большого количества аптамеров оцДНК». Биотехнология и прикладная биохимия . 64 (4): 541–548. дои : 10.1002/bab.1507 . ПМИД 27222205 . S2CID 21792777 .
^ Санчес, Дж. Аквилес; и др. (4 декабря 2003 г.). «Линейная после экспоненциальной (LATE) – ПЦР: усовершенствованный метод асимметричной ПЦР и его использование в количественном анализе в реальном времени» . Труды Национальной академии наук . 101 (7): 1933–1938. дои : 10.1073/pnas.0305476101 . ПМК 357030 . ПМИД 14769930 .

[A-1] Перейти обратно: ^а ^б Цитартан, Маримуту; и др. (декабрь 2011 г.). «Асимметричная ПЦР для получения оцДНК хорошего качества для производства ДНК-аптамеров» (PDF) . Сонгкланакарин Дж. Наук. Технол . 34 (2): 125–131. Архивировано из оригинала (PDF) 11 января 2020 г. Проверено 18 ноября 2017 г.

[2] Вудделл, штат Калифорния; Берджесс, Р.Р. (1996). «Использование асимметричной ПЦР для создания длинных праймеров и одноцепочечной ДНК для включения аналогов сшивки в определенные участки ДНК-зонда» . Геном Рез . 6 (9): 886–892. дои : 10.1101/гр.6.9.886 . ПМИД 8889557 .

[3] Хейат, Мохаммед; и др. (14 января 2017 г.). «Основные стратегии оптимизации условий асимметричной ПЦР как надежного метода создания большого количества аптамеров оцДНК». Биотехнология и прикладная биохимия . 64 (4): 541–548. дои : 10.1002/bab.1507 . ПМИД 27222205 . S2CID 21792777 .

[4] Санчес, Дж. Аквилес; и др. (4 декабря 2003 г.). «Линейная после экспоненциальной (LATE) – ПЦР: усовершенствованный метод асимметричной ПЦР и его использование в количественном анализе в реальном времени» . Труды Национальной академии наук . 101 (7): 1933–1938. дои : 10.1073/pnas.0305476101 . ПМК 357030 . ПМИД 14769930 .

[1]

[2]

[3]

[4]