Цитоцентрифуга
Цитоцентрифуга , иногда называемая цитоспиновой , [1] представляет собой специализированную центрифугу, используемую для концентрации клеток в образцах жидкости на предметном стекле микроскопа для их окрашивания и исследования. [2] Цитоцентрифуги используются в различных областях клинической лаборатории , таких как цитопатология , гематология и микробиология , а также в биологических исследованиях. Этот метод можно использовать на различных типах образцов, включая тонкоигольные аспираты , спинномозговую жидкость , серозную и синовиальную жидкость и мочу . [3]
Процедура
[ редактировать ]Для приготовления цитоцентрифужных мазков к передней части предметного стекла прикрепляют воронку. Поверхность узла воронки, контактирующая с предметным стеклом, покрыта фильтровальной бумагой для поглощения лишней жидкости. В воронку помещают несколько капель жидкости. Сборку помещают в цитоцентрифугу, которая работает при небольшой силе (600–800 g), чтобы сохранить клеточную структуру. [4] Центробежная сила выталкивает жидкость через отверстие воронки и концентрирует клетки на небольшом участке предметного стекла. Процесс центрифугирования концентрирует клетки примерно в двадцать раз. [5] и создает монослой толщиной в одну клетку, что позволяет оценить клеточную морфологию. Затем предметное стекло можно зафиксировать и окрасить. [6] [7]
Приложения
[ редактировать ]
Некоторые применения цитоцентрифуг включают:
- Выполнение дифференциального подсчета клеток в жидкостях организма, таких как серозная , синовиальная и спинномозговая жидкость. [4]
- Цитопатологическое исследование жидких образцов, таких как жидкости организма и тонкоигольные аспираты. [3] [8]
- Окрашивание образцов жидкости по Граму для идентификации микроорганизмов [9]
Ограничения
[ редактировать ]Процесс цитоцентрифугирования может привести к искажению клеток. Клетки, расположенные в центре мазка, могут выглядеть сжатыми по сравнению с клетками на периферии. В ядрах клеток могут образовываться искусственные расщелины, доли или отверстия. [4] цитоплазма может выглядеть вакуолизированной или иметь неправильные выступы. Цитоплазматические гранулы могут быть вытеснены на периферию клетки. Если количество ячеек велико, ячейки могут быть искажены из-за скученности; поэтому образцы с высоким количеством клеток разбавляют перед приготовлением мазка. [10]
История
[ редактировать ]Исследование клеток в жидкостях организма исторически проводилось с использованием гемоцитометра — камеры, предназначенной для микроскопического подсчета клеток. [11] Этот метод был ограничен плохой распознаванием типов клеток (клетки можно было классифицировать только как мононуклеарные или полиморфно-ядерные) и низким количеством клеток, присутствующих в неконцентрированных жидкостях организма. Более того, этот метод не позволил обеспечить постоянную запись образца. [10] В статье 1966 года Уотсон П. описал первую цитоцентрифугу, назвав ее «аппаратом для концентрирования клеток в суспензии на предметном стекле микроскопа». [12] Устройство продавалось в коммерческих целях в 1970-х годах, а в 1983 году оно было запатентовано компанией Shandon (ныне Thermo Scientific ). По состоянию на 2012 год на рынке существует множество марок цитоцентрифуг. [8]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Макманус Л., Митчелл Р. (1 августа 2014 г.). Патобиология болезней человека: динамическая энциклопедия механизмов заболеваний . Эльзевир Наука. п. 3365. ИСБН 978-0-12-386457-4 .
- ^ Турджен М.Л. (23 марта 2015 г.). Клиническая лабораторная наука Линне и Рингсруд: концепции, процедуры и клиническое применение (7-е изд.). Эльзевир Мосби. п. 146. ИСБН 978-0-323-22545-8 .
- ^ Перейти обратно: а б Стоукс Б.О. (2004). «Принципы цитоцентрифугирования» . Лабораторная медицина . 35 (7): 434–437. дои : 10.1309/FTT59GWKDWH69FB0 . ISSN 0007-5027 .
- ^ Перейти обратно: а б с Брунзель Н.А. (5 ноября 2016 г.). «Глава 17: Анализ жидкостей организма» . Основы анализа мочи и жидкостей организма . Elsevier Науки о здоровье. стр. 356–58. ISBN 978-0-323-39636-3 .
- ^ Галаган К.А. (2006). Цветной атлас телесных жидкостей: иллюстрированное практическое руководство, основанное на проверке квалификации . Колледж американских патологов . стр. 13–14. ISBN 978-0-930304-91-1 .
- ^ Шамбаяти Б (17 февраля 2011 г.). Цитопатология . ОУП Оксфорд. п. 24. ISBN 978-0-19-953392-3 .
- ^ Кеохан Э.М., Смит Л., Валенга Дж.М. (19 февраля 2015 г.). Гематология Родака: клинические принципы и приложения . Elsevier Науки о здоровье. стр. 270–1. ISBN 978-0-323-32716-9 .
- ^ Перейти обратно: а б Гилл Дж. (19 октября 2012 г.). «Глава 6: Цитоцентрифугирование» . Цитопрепарат: принципы и практика . Springer Science & Business Media. стр. 73–84. ISBN 978-1-4614-4932-4 .
- ^ Махон ЧР, Леман, округ Колумбия, Мануселис Г (25 марта 2014 г.). Учебник диагностической микробиологии — Электронная книга . Elsevier Науки о здоровье. п. 129. ИСБН 978-0-323-29262-7 .
- ^ Перейти обратно: а б Харменинг Д. (2009). «Глава 30: Исследование жидкостей организма: качественный, количественный и морфологический анализ». Клиническая гематология и основы гемостаза (5-е изд.). Компания Ф.А. Дэвиса. стр. 720–757. ISBN 978-0-8036-1732-2 .
- ^ Вембади А., Менахери А., Касайме М.А. (2019). «Клеточная цитометрия: обзор и перспективы биотехнологических достижений» . Границы биоинженерии и биотехнологии . 7 : 147. дои : 10.3389/fbioe.2019.00147 . ПМК 6591278 . ПМИД 31275933 .
- ^ Уотсон П. (сентябрь 1966 г.). «Центрифуга для предметных стекол: аппарат для концентрирования клеток в суспензии на предметном стекле микроскопа» . Журнал лабораторной и клинической медицины . 68 (3): 494–501. ПМИД 5922759 .