DH5-альфа-клетка
Клетки DH5-Alpha — это клетки E. coli , созданные американским биологом Дугласом Ханаханом для максимизации эффективности трансформации . Они определяются тремя [ 1 ] мутации: RecA1, endA1, которые способствуют вставке плазмиды, и lacZΔM15, который обеспечивает сине-белый скрининг . Клетки компетентны и часто используются для трансформации хлоридом кальция для вставки желаемой плазмиды. Исследование четырех методов трансформации и шести штаммов бактерий показало, что наиболее эффективным оказался штамм DH5 методом Ханахана . [ 2 ]
Мутации
[ редактировать ]- Мутация RecA1 представляет собой одноточечную мутацию, которая заменяет глицин 160 полипептида RecA на остаток аспарагиновой кислоты. [ 3 ] с целью отключения активности рекомбиназ и инактивации гомологичной рекомбинации .
- Мутация endA1 инактивирует внутриклеточную эндонуклеазу, предотвращая ее разрушение встроенной плазмиды. [ 4 ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Вертц Дж. «Штамм – DH5α» . Центр генетического фонда Coli (CGSC) . Йельский университет . Проверено 23 мая 2017 г.
- ^ Чан В.Т., Верма К.С., Лейн Д.П., Ган С.К. (декабрь 2013 г.). «Сравнение и оптимизация методов и факторов, влияющих на трансформацию кишечной палочки » . Отчеты по биологическим наукам . 33 (6). дои : 10.1042/BSR20130098 . ПМЦ 3860579 . ПМИД 24229075 .
- ^ Брайант, Франция (июнь 1988 г.). «Создание мутантного белка RecA с дефицитом рекомбиназы, который сохраняет одноцепочечную ДНК-зависимую АТФазную активность» (PDF) . Журнал биологической химии . 263 (18): 8716–8723. дои : 10.1016/S0021-9258(18)68364-4 . ПМИД 2967815 .
- ^ Тейлор Р.Г., Уокер, округ Колумбия, Макиннес Р.Р. (апрель 1993 г.). « Штаммы-хозяева E. coli существенно влияют на качество мелкомасштабных препаратов плазмидной ДНК, используемых для секвенирования» . Исследования нуклеиновых кислот . 21 (7): 1677–1678. дои : 10.1093/нар/21.7.1677 . ПМК 309390 . ПМИД 8479929 .