Транскрипционная амплификация

Транскрипционно-опосредованная амплификация ( ТМА ) представляет собой изотермическую (выполняемую при постоянной температуре) однотрубочную нуклеиновых кислот систему амплификации с использованием двух ферментов : РНК-полимеразы и обратной транскриптазы .

«Амплификация» означает создание гораздо большего количества копий цепи нуклеиновой кислоты, чем присутствовало вначале, чтобы ее можно было легко обнаружить или протестировать. Быстрая амплификация целевой РНК/ДНК позволяет лаборатории одновременно обнаруживать несколько патогенных организмов в одной пробирке. Технология ТМА позволяет клинической лаборатории проводить анализы нуклеиновых кислот (NAT) для скрининга крови с меньшим количеством этапов, меньшим временем обработки и более быстрыми результатами.Его используют в молекулярной биологии , судебной медицине и медицине для быстрой идентификации и диагностики патогенных организмов. В отличие от аналогичных методов, таких как полимеразная цепная реакция и лигазная цепная реакция , этот метод включает транскрипцию РНК (с помощью РНК-полимеразы ) и синтез ДНК (с помощью обратной транскриптазы РНК ) для получения ампликона (источника или продукта амплификации) из целевой нуклеиновой кислоты. кислота. Этот метод можно использовать для воздействия как на РНК, так и на ДНК.

Транскрипционная амплификация имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методами амплификации, в том числе:

• ТМА изотермический ; Вместо термоциклера используется водяная баня или термоблок.
• ТМА производит ампликон РНК, а не ампликон ДНК. Поскольку РНК более лабильна в лабораторных условиях, это снижает вероятность переноса загрязнения.
• ТМА производит 100–1000 копий за цикл (PCR и LCR экспоненциально удваиваются каждый цикл). Это приводит к увеличению количества копий ДНК (или РНК) в 10 миллиардов раз примерно за 15–30 минут.

РНК -> ДНК -> РНК

Ссылки

• Дэниел Л. Касиан, Тимоти Дж. Фульц: Методы амплификации последовательности нуклеиновой кислоты. В: Достижения биотехнологии , 1995, 13.3, С. 569–569.

Откуда: http://www.gen-probe.com