Счетчик вирусов
Счетчик вирусов — это инструмент для быстрого количественного определения вирусов в жидких образцах. Это специализированный проточный цитометр , который использует высокочувствительное флуоресцентное обнаружение для прямого измерения концентрации вирусных частиц за долю времени, необходимого для традиционного анализа бляшек.
Раннее развитие
[ редактировать ]Счетчик вирусов был разработан в 2001 году в Университете Колорадо в Боулдере . [1] Прибор Single Nanometric Particle Enumerator (SNaPE) был основан на принципе обнаружения флуоресценции агрегатов одиночных окрашенных нуклеиновых кислот путем оценки респираторных вирусов. [2] Результаты количественного определения прибора коррелируют с ожидаемой концентрацией вируса, и значения будут значительно выше, чем значения, полученные стандартными методами определения титра бляшек. [3] обычно используется для количественного определения вируса . Измеренные концентрации по величине были аналогичны результатам количественной ПЦР , причем оба значения были существенно выше значений титра бляшек.
В 2004 году счетчик вирусов добавил к инструменту SNaPE второй канал обнаружения, что существенно улучшило анализ данных и повысило специфичность. [4] Принцип обнаружения был основан на окрашивании белков и нуклеиновых кислот флуоресцентными красителями в жидком образце. Когда окрашенные частицы проходили через область зонда и взаимодействовали с лазером, излучения обнаруживались и записывались для анализа. Эта двухканальная система разработала концепцию измерения интактных вирионов путем обнаружения совместно локализованных белков и нуклеиновых кислот. [5] Результаты бакуловируса, проанализированные с помощью этой двухканальной системы счетчика вирусов, были ниже по величине, чем результаты SNaPE, были более схожими по величине и коррелировали с результатами инфекционного анализа. [6]
Коммерциализация
[ редактировать ]Коммерческая версия счетчика вирусов разработана компанией InDevR . В 2012 году InDevR передала инструмент противодействия вирусам ViroCyt LCC. В пресс-релизе от 15 января 2013 г. говорилось: «ViroCyt будет отвечать за расширение коммерческого рынка технологии противодействия вирусам, разработанной InDevR». [7] Sartorius Stedim Biotech приобрела ViroCyt за 16 миллионов долларов в 2016 году. [8] Отдел вирусной аналитики компании Sartorius Stedium разработал счетчик вирусов коммерчески доступный нового поколения.
Приложения
[ редактировать ]Прибор является представителем следующего поколения «персональных» проточных цитометров, предназначенных исключительно для количественного определения общего количества вирусных частиц. Подобно концентрации вируса, определяемой с помощью трансмиссионной электронной микроскопии, счетчик вирусов обеспечивает измерение общего количества вирусных частиц/мл. Было успешно продемонстрировано, что счетчик вирусов позволяет легко количественно определить широкий спектр вирусов, включая, помимо прочего: грипп , вирус денге , бакуловирус , респираторно-синцитиальный вирус , парагрипп , краснуху , цитомегаловирус и вирус простого герпеса .
Возможность быстрого количественного определения вирусов оказывает большое влияние на:
- Исследования, разработка и производство вакцин
- Противовирусные исследования
- Исследование вирусных векторов и экспрессия белков
- Оптимизация биопроцессов
- Характеристика вирусного антигена
- Стандартная характеристика вирусной диагностики
- на основе вирусов генной терапии Исследования
Реагенты
[ редактировать ]Компания Sartorius Stedium разработала несколько реагентов для счетчика вирусов с момента его приобретения в 2016 году. Эти реагенты включают Combodye, реагент с двойным окрашиванием для оболочечных вирусов, и Virotag, специфические флуоресцентно меченные реагенты с высоким сродством. [9]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Феррис, ММ; Маурер, Т.Т.; Роулен, КЛ (2006). «Обнаружение и подсчет одиночных нанометрических частиц: конфокальная оптическая конструкция для флуоресцентной проточной цитометрии». Обзор научных инструментов . 73 (6): 2404–2410. дои : 10.1063/1.1476714 .
- ^ Феррис, ММ; Маккейб, Миссури; Доан, LG; Роулен, КЛ (2002). «Быстрый подсчет респираторных вирусов». Аналитическая химия . 74 (8): 2863–2871. дои : 10.1021/ac011183q . ПМИД 11985317 .
- ^ Феррис, ММ; Стоффель, КЛ; Маурер, Т.Т.; Роулен, КЛ (2002). «Количественное взаимное сравнение трансмиссионной электронной микроскопии, проточной цитометрии и эпифлуоресцентной микроскопии для анализа нанометрических частиц» . Аналитическая биохимия . 304 (2): 249–256. дои : 10.1006/abio.2002.5616 . ПМИД 12009703 .
- ^ Стоффель, КЛ; Роулен, КЛ; Роулен, КЛ (2005). «Проектирование и характеристики компактного двухканального счетчика вирусов» . Цитометрия . 65 (А): 140–147. doi : 10.1002/cyto.a.20145 . ПМИД 15830378 .
- ^ Стоффель, КЛ; Роулен, КЛ (2005). «Анализ данных для двухканального счетчика вирусов». Аналитическая химия . 77 (7): 2243–2246. дои : 10.1021/ac048626l . ПМИД 15801759 .
- ^ Стоффель, КЛ; Финч, Р.; Кристенсен, К.; Эдвардс, Д.; Роулен, КЛ (2005). «Двухканальный счетчик вирусов». Американская биотехнологическая лаборатория . 37 (22): 24–25.
- ^ Ринальди, Лаура. «Страница 404» . ИнДевР . Проверено 02 октября 2020 г.
{{cite web}}: Cite использует общий заголовок ( справка ) - ^ «Sartorius приобретает ViroCyt за 16 миллионов долларов» . GEN – Новости генной инженерии и биотехнологии . 15 июля 2016 г. Проверено 02 октября 2020 г.
- ^ «Комбинированные реагенты Dye® и ViroTag®» . Сарториус . Проверено 3 октября 2020 г.