Кубитовый флуорометр

Флуориметр Qubit — лабораторный прибор, разработанный и распространяемый компанией Invitrogen , которая сейчас является частью Thermo Fisher . Он используется для определения ДНК . , РНК и белка количественного ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 4 ]}

Метод

Qubit Метод флуорометра заключается в использовании флуоресцентных красителей для определения концентрации нуклеиновых кислот или белков в образце. Специализированные флуоресцентные красители специфически связываются с интересующими веществами. света длине В этом методе используется спектрофотометр для измерения естественного поглощения при волны 260 нм (для ДНК и РНК) или 280 нм (для белков). ^{[ 5 ]}^{[ 6 ]}^{[ 7 ]}^{[ 8 ]}

Флуоресцентные красители

Анализы Qubit (ранее известные как Quant-iT) ранее были разработаны и произведены компанией Molecular Probes (теперь часть Life Technologies ). Каждый краситель специализирован для одного типа молекул (ДНК, РНК или белка). Эти красители демонстрируют чрезвычайно низкую флуоресценцию , пока не связаны с целевой молекулой. При связывании с ДНК молекулы красителя принимают более жесткую форму и увеличивают флуоресценцию на несколько порядков, скорее всего, за счет интеркаляции между основаниями. ^{[ 9 ]}^{[ 10 ]}

Флуориметр Qubit, устройство, предназначенное для измерения сигналов флуоресценции образцов, работает путем корреляции этих сигналов с известными концентрациями зондов. Этот процесс позволяет преобразовывать данные флуоресценции в количественные измерения концентрации. Устройство использует эту установленную зависимость для точного определения концентрации образца.

Конкретным примером этой технологии является флуориметр Qubit 2.0, который часто используется в сочетании с «набором для анализа dsDNA BR». Этот набор, как и другие наборы системы количественного анализа Qubit, включает красители. Эти красители чувствительны к различным биомолекулам и их концентрациям. В этом контексте «ds» означает двухцепочечную ДНК, а «ss» означает одноцепочечную ДНК, указывая на конкретные типы ДНК, которые могут обнаружить красители.

Реагент/Анализ	Диапазон анализа	Диапазон начальной концентрации образца
Анализ Qubit dsDNA HS	0,2–100 из	10 пг/мкл–100 нг/мкл
Анализ Qubit dsDNA BR	2–1000 из	100 пг/мкл–1 мкг/мкл
Кубитный анализ оцДНК	1-200 из	50 пг/мкл-200 нг/мкл
Кубитный анализ РНК	5–100 из	250 пг/мкл–100 нг/мкл
Кубитный анализ РНК BR	20–1000 из	1 нг/мк-1 мкг/мкл
Кубитный анализ белка*	0,25–5 мкг	12,5 мкг/мл–5 мг/мл

Версии

Второе поколение, Qubit 2.0, было выпущено в 2010 году, а третье поколение — Qubit 3.0 — в 2014 году. Новейшей версией является Qubit 4 4-го поколения, представленный в 2017 году.

Ссылки

^ Акар Э. и др. (2009). «Исследования по оптимизации и проверке набора MentypeR Argus X-8 для случаев установления отцовства». Forensic Sci Int Genet Suppl . 2 : 47–48. дои : 10.1016/j.fsigss.2009.08.189 .
^ Бакос Дж. и др. (2009). «Обогащенная окружающая среда влияет на гормональный статус и нейротрофический фактор гиппокампа мозга в зависимости от пола». Нейронаука . 164 (2): 788–797. doi : 10.1016/j.neuroscience.2009.08.054 . ПМИД 19723563 . S2CID 23809910 .
^ Халайхель Н. и др. (2009). «Новый анализ на основе ПЦР в реальном времени для диагностики Renibacterium Salmoninarum у радужной форели (Oncorhynchus mykiss) и сравнение с другими методами». J Микробиологические методы . 76 (1): 75–80. дои : 10.1016/j.mimet.2008.09.014 . ПМИД 18938198 .
^ Хамза И.А. и др. (2009). «Обнаружение и количественное определение бокавируса человека в речной воде» . Джей Ген Вирол . 90 (Часть 11): 2634–2637. дои : 10.1099/vir.0.013557-0 . ПМИД 19656966 .
^ Манчестер, КЛ (1996). «Применение УФ-методов для измерения концентраций белков и нуклеиновых кислот» . БиоТехники . 20 (6): 968–970. дои : 10.2144/96206bm05 . ПМИД 8780864 .
^ Глазель, Дж. А. (1995). «Достоверность чистоты нуклеиновых кислот, контролируемая по коэффициенту поглощения 260/280 нм». БиоТехники . 18 (1): 62–63. ПМИД 7702855 .
^ Хуберман, Дж. А. (1995). «Важность измерения поглощения нуклеиновых кислот при 240 нм, а также при 260 и 280 нм». БиоТехники . 18 (4): 636. PMID 7598897 .
^ Манчестер, КЛ (1995). «Значение отношений A260/A280 для измерения чистоты нуклеиновых кислот». БиоТехники . 19 (2): 208–210. ПМИД 8527139 .
^ Макнайт, Р.Э., Глисон, А.Б., Киз, Дж.А., Сахаби, С. (2006). «Исследование режима связывания и аффинности ДНК-связывающих агентов с использованием анализа раскручивания ДНК топоизомеразы I». Письма по биоорганической и медицинской химии . 17 (4): 1013–1017. дои : 10.1016/j.bmcl.2006.11.038 . ПМИД 17157016 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Швейцер, К.; Скайано, JC (2003). «Селективное связывание и локальная фотофизика флуоресцентного цианинового красителя PicoGreen в двухцепочечной и одноцепочечной ДНК». Физическая химия Химическая физика . 5 (21): 4911–4917. Бибкод : 2003PCCP....5.4911S . дои : 10.1039/b305921a .

Внешние ссылки

[Acar-1] Акар Э. и др. (2009). «Исследования по оптимизации и проверке набора MentypeR Argus X-8 для случаев установления отцовства». Forensic Sci Int Genet Suppl . 2 : 47–48. дои : 10.1016/j.fsigss.2009.08.189 .

[Bakos-2] Бакос Дж. и др. (2009). «Обогащенная окружающая среда влияет на гормональный статус и нейротрофический фактор гиппокампа мозга в зависимости от пола». Нейронаука . 164 (2): 788–797. doi : 10.1016/j.neuroscience.2009.08.054 . ПМИД 19723563 . S2CID 23809910 .

[Halaihel-3] Халайхель Н. и др. (2009). «Новый анализ на основе ПЦР в реальном времени для диагностики Renibacterium Salmoninarum у радужной форели (Oncorhynchus mykiss) и сравнение с другими методами». J Микробиологические методы . 76 (1): 75–80. дои : 10.1016/j.mimet.2008.09.014 . ПМИД 18938198 .

[Hamza-4] Хамза И.А. и др. (2009). «Обнаружение и количественное определение бокавируса человека в речной воде» . Джей Ген Вирол . 90 (Часть 11): 2634–2637. дои : 10.1099/vir.0.013557-0 . ПМИД 19656966 .

[Manchester,_K.L.-5] Манчестер, КЛ (1996). «Применение УФ-методов для измерения концентраций белков и нуклеиновых кислот» . БиоТехники . 20 (6): 968–970. дои : 10.2144/96206bm05 . ПМИД 8780864 .

[Glasel-6] Глазель, Дж. А. (1995). «Достоверность чистоты нуклеиновых кислот, контролируемая по коэффициенту поглощения 260/280 нм». БиоТехники . 18 (1): 62–63. ПМИД 7702855 .

[Huberman-7] Хуберман, Дж. А. (1995). «Важность измерения поглощения нуклеиновых кислот при 240 нм, а также при 260 и 280 нм». БиоТехники . 18 (4): 636. PMID 7598897 .

[Manchester-8] Манчестер, КЛ (1995). «Значение отношений A260/A280 для измерения чистоты нуклеиновых кислот». БиоТехники . 19 (2): 208–210. ПМИД 8527139 .

[McKnight-9] Макнайт, Р.Э., Глисон, А.Б., Киз, Дж.А., Сахаби, С. (2006). «Исследование режима связывания и аффинности ДНК-связывающих агентов с использованием анализа раскручивания ДНК топоизомеразы I». Письма по биоорганической и медицинской химии . 17 (4): 1013–1017. дои : 10.1016/j.bmcl.2006.11.038 . ПМИД 17157016 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[Schweitzer-10] Швейцер, К.; Скайано, JC (2003). «Селективное связывание и локальная фотофизика флуоресцентного цианинового красителя PicoGreen в двухцепочечной и одноцепочечной ДНК». Физическая химия Химическая физика . 5 (21): 4911–4917. Бибкод : 2003PCCP....5.4911S . дои : 10.1039/b305921a .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]