КолЭ1

ColE1 — плазмида , обнаруженная у бактерий . Его название происходит от того факта, что он несет ген колицина E1 ( ген cea ). Он также кодирует иммунитет к этому продукту с помощью гена imm . Кроме того, плазмида имеет ряд генов подвижности ( mob ). Его размер и наличие единственного сайта узнавания EcoRI позволили рассматривать его как кандидата -вектора . ^{[ 1 ]}

Репликация

Репликация ColE1 начинается в источнике . На 555 п.н. выше этой точки РНК-полимераза инициирует транскрипцию RNAII, которая действует как препраймер и начинает синтез лидерной цепи . Транскрипт сворачивается во вторичную структуру, которая стабилизирует взаимодействие между возникающей РНК и исходной ДНК. Этот гибрид подвергается атаке РНКазы H , которая расщепляет цепь РНК, обнажая 3'-гидроксильную группу. позволяет удлинить ведущую цепь ДНК-полимеразой I. Это Синтез отстающей цепи позже инициируется примазой, кодируемой клеткой-хозяином. Репликация полностью осуществляется белками-хозяевами (РНК-полимеразой, ДНК-полимеразой I и РНКазой H), так что ингибирование трансляции остановит рост клеток, но не репликацию ColE1. Поскольку трансляция белка Rop также будет ингибироваться, в этих клетках будет получено более высокое, чем обычно, количество копий.

Контроль номера копирования

RNAI является контртранскриптом участка RNAII и поэтому связывается с его 5'-концом. Это изменяет сворачивание RNAII, так что гибрид ДНК-РНК не стабилизируется и расщепления не происходит. Это гарантирует, что при большом количестве копий репликация замедляется из-за увеличения концентрации RNAI. Rop — вторичный репрессор репликации, стабилизирует гибрид RNAI-RNAII. Rop может быть особенно важен для предотвращения неконтролируемой репликации при медленных темпах роста.

Согласно оригинальной публикации, ColE1 имеет количество копий 25–30. ^{[ 2 ]}

Ссылки

^ Хершфилд, В.; и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярный носитель для клонирования и амплификации ДНК» . Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59. Бибкод : 1974PNAS...71.3455H . дои : 10.1073/pnas.71.9.3455 . ПМК 433792 . ПМИД 4610576 .
^ Хершфилд, В.; и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярный носитель для клонирования и амплификации ДНК» . Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59. Бибкод : 1974PNAS...71.3455H . дои : 10.1073/pnas.71.9.3455 . ПМК 433792 . ПМИД 4610576 .

[1] Хершфилд, В.; и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярный носитель для клонирования и амплификации ДНК» . Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59. Бибкод : 1974PNAS...71.3455H . дои : 10.1073/pnas.71.9.3455 . ПМК 433792 . ПМИД 4610576 .

[2] Хершфилд, В.; и др. (1974). «Плазмида ColE1 как молекулярный носитель для клонирования и амплификации ДНК» . Труды Национальной академии наук . 71 (9): 3455–59. Бибкод : 1974PNAS...71.3455H . дои : 10.1073/pnas.71.9.3455 . ПМК 433792 . ПМИД 4610576 .

[ 1 ]

[ 2 ]