Иммобилизованный градиент pH
В химии кислотно -основных реакций гели иммобилизованным градиентом pH ( IPG ) с представляют собой матрицу акриламидного геля, сополимеризованную с градиентом pH , что приводит к полностью стабильным градиентам, за исключением самых щелочных (> 12) значений pH. Иммобилизованный градиент pH получается путем непрерывного изменения соотношения иммобилинов . Иммобилин , представляет собой слабую кислоту или основание определяемое значением pK. [ 2 ] Иммобилизованные градиенты pH (IPG) получают путем смешивания двух видов смеси акриламида: одного с иммобилином, обладающим кислотным буферным свойством, а другого - с основным буферным свойством. [ 3 ] Концентрации буферов в двух растворах определяют диапазон и форму создаваемого градиента pH. Оба раствора содержат мономеры акриламида и катализаторы. Во время полимеризации акриламидная часть буферов сополимеризуется с мономерами акриламида и бисакриламида с образованием полиакриламидного геля. Эти полимеризованные гели имеют подложку на пластиковой основе, что упрощает обращение и улучшает характеристики IPG. Затем гель промывают для удаления катализаторов и неполимеризованных мономеров , которые мешают изоэлектрическому разделению. IPG повышенная воспроизводимость [ 4 ] [ 5 ] изоэлектрофокусирования электрофореза и 2D- гель- . Другими преимуществами являются повышенное разрешение, [ 6 ] воспроизводимое разделение щелочных белков [ 7 ] и повышенная нагрузочная способность (до 10 мг). [ 8 ]
Этот альтернативный метод устраняет проблемы нестабильности градиента и плохой емкости образца, связанные с градиентом pH амфолита- носителя . [ 9 ] Доступны коммерческие готовые гели IPG.
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Гёрг, Анжелика; Вайс, Уолтер; Данн, Майкл Дж. (1 декабря 2004 г.). «Современная технология двумерного электрофореза для протеомики». Протеомика . 4 (12): 3665–3685. дои : 10.1002/pmic.200401031 . ISSN 1615-9853 . ПМИД 15543535 .
- ^ Барнс и др., Электрофорез на практике: Руководство по теории и практике. Страница 44. VCH Publishers Inc, 1993 (США).
- ^ Гёрг, Анжелика; Вайс, Уолтер; Данн, Майкл Дж. (1 декабря 2004 г.). «Современная технология двумерного электрофореза для протеомики». Протеомика . 4 (12): 3665–3685. дои : 10.1002/pmic.200401031 . ISSN 1615-9853 . ПМИД 15543535 .
- ^ Корбетт, Дж. М.; Данн, MJ; Пош, А.; Гёрг, А. (1 сентября 1994 г.). «Позиционная воспроизводимость белковых пятен в двумерном электрофорезе в полиакриламидном геле с использованием изоэлектрической фокусировки иммобилизованного градиента pH в первом измерении: межлабораторное сравнение». Электрофорез . 15 (8–9): 1205–1211. дои : 10.1002/elps.11501501182 . ISSN 0173-0835 . ПМИД 7532129 .
- ^ Бломберг, А.; Бломберг, Л.; Норбек, Дж.; Фей, С.Дж.; Ларсен, премьер-министр; Ларсен, М.; Ропсторф, П.; Деганд, Х.; Баутри, М. (1 октября 1995 г.). «Межлабораторная воспроизводимость моделей дрожжевых белков, проанализированная с помощью двумерного гель-электрофореза в иммобилизованном градиенте pH». Электрофорез . 16 (10): 1935–1945. дои : 10.1002/elps.11501601320 . ISSN 0173-0835 . ПМИД 8586069 .
- ^ Вильдгрубер, Р.; Хардер, А.; Обермайер, К.; Богут, Г.; Вайс, В.; Фей, С.Дж.; Ларсен, премьер-министр; Гёрг, А. (1 июля 2000 г.). «На пути к более высокому разрешению: двумерный электрофорез белков Saccharomyces cerevisiae с использованием перекрывающихся узких иммобилизованных градиентов pH». Электрофорез . 21 (13): 2610–2616. doi : 10.1002/1522-2683(20000701)21:13<2610::AID-ELPS2610>3.0.CO;2-H . ISSN 0173-0835 . ПМИД 10949137 .
- ^ Вильдгрубер, Роберт; Рейл, Герольд; Дрюс, Оливер; Парлар, Харун; Гёрг, Анжелика (1 июня 2002 г.). «Интернет-двумерная база данных белков Saccharomyces cerevisiae с использованием иммобилизованных градиентов pH от pH 6 до pH 12 и времяпролетной масс-спектрометрии с матричной лазерной десорбцией / ионизацией». Протеомика . 2 (6): 727–732. doi : 10.1002/1615-9861(200206)2:6<727::AID-PROT727>3.0.CO;2-2 . ISSN 1615-9853 . ПМИД 12112855 .
- ^ Горг, А.; Постел, В.; Фридрих, К.; Куик, Р.; Стралер-младший; Ханаш, С.М. (1 сентября 1991 г.). «Температурно-зависимая изменчивость положения пятен в двумерных полипептидных структурах». Электрофорез . 12 (9): 653–658. дои : 10.1002/elps.1150120910 . ISSN 0173-0835 . ПМИД 1752246 .
- ^ Уилкинс и др., Исследования протеома: новые рубежи функциональной геномики. Стр. 14. Springer, 1997 (Германия)