лестница ДНК
Лестничная структура ДНК - это особенность, которую можно наблюдать, когда фрагменты ДНК, возникающие в результате фрагментации ДНК апоптоза, визуализируются после разделения с помощью гель-электрофореза, впервые описанного в 1980 году Эндрю Уилли в медицинской школе Эдинбургского университета. [1] Фрагменты ДНК также можно выделить в клетках, подвергшихся некрозу, когда эти фрагменты ДНК после разделения подвергают гель-электрофорезу, в результате чего образуется характерная лестничная структура.
Деградация ДНК
[ редактировать ]Лестничная структура ДНК является отличительной особенностью ДНК, разрушаемой под действием активируемой каспазой ДНКазы (CAD), что является ключевым событием во время апоптоза . CAD расщепляет геномную ДНК в межнуклеосомных линкерных которых кратна 180–185 парам оснований . областях, в результате чего образуются фрагменты ДНК, длина [2] Разделение фрагментов электрофорезом в агарозном геле и последующая визуализация, например, окрашиванием бромидом этидия , приводит к образованию характерной «лестничной» структуры. Простой метод селективной экстракции фрагментированной ДНК из апоптотических клеток без присутствия участков ДНК с высокой молекулярной массой, создающих лестничную структуру, использует предварительную обработку клеток этанолом . [3]
Апоптоз и некроз
[ редактировать ]Хотя большинство морфологических особенностей апоптотических клеток кратковременны, лестница ДНК может использоваться в качестве метода считывания конечного состояния и, следовательно, стала надежным методом отличить апоптоз от некроза . [4] Лестничное распределение ДНК также можно использовать, чтобы увидеть, подверглись ли клетки апоптозу в присутствии вируса. [5] Это полезно, поскольку может помочь определить воздействие вируса на клетку.
Лестничный анализ ДНК можно использовать только для обнаружения апоптоза на более поздних стадиях апоптоза. Это связано с фрагментацией ДНК, происходящей на более поздней стадии процесса апоптоза. [2] Лестничный анализ ДНК используется для проверки апоптоза многих клеток и не является точным при тестировании только нескольких клеток, совершивших апоптоз. [2] Чтобы повысить точность тестирования на апоптоз, наряду с лестничным анализом ДНК используются и другие анализы, такие как TEM и TUNEL. [2] Благодаря недавним усовершенствованиям в построении лестницы ДНК, лестница ДНК стала более надежным и разумным методом для использования при обнаружении апоптоза. [6] Также важно отметить, что лестничное соединение ДНК происходит по-разному в зависимости от типа клетки, поэтому в процессе лестничного построения ДНК могут быть небольшие изменения в зависимости от исследуемой клетки. [7]
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Крессель, М.; Гроскурт, П. (1 декабря 1994 г.). «Различие апоптотической и некротической гибели клеток путем маркировки фрагментированной ДНК in situ». Исследования клеток и тканей . 278 (3): 549–556. дои : 10.1007/s004410050244 . ISSN 0302-766X . ПМИД 7850865 .
- ^ Jump up to: а б с д Элмор, Сьюзен (1 января 2007 г.). «Апоптоз: обзор запрограммированной гибели клеток» . Токсикологическая патология . 35 (4): 495–516. дои : 10.1080/01926230701320337 . ISSN 0192-6233 . ПМК 2117903 . ПМИД 17562483 .
- ^ Гонг, Дж.; Траганос, Ф.; Дажинкевич, З. (1994). «Селективная процедура экстракции ДНК из апоптотических клеток, применимая для гель-электрофореза и проточной цитометрии». Аналитическая биохимия . 218 (2): 314–9. дои : 10.1006/abio.1994.1184 . ПМИД 8074286 .
- ^ Ивата М., Майерсон Д., Торок-Сторб Б., Загер Р.А. (декабрь 1994 г.). «Оценка лестницы ДНК почечных канальцев в ответ на кислородное голодание и окислительное повреждение» . Журнал Американского общества нефрологов . 5 (6): 1307–1313. дои : 10.1681/ASN.V561307 . ISSN 1046-6673 . ПМИД 7893995 .
- ^ Шривастава, Викрам; Равалл, Света; Виджаян, В.К.; Кханна, Мадху (1 мая 2009 г.). «Апоптоз, индуцированный вирусом гриппа А: ингибирование лестничной структуры ДНК и активности каспазы-3 за счет добавок цинка в культивируемых клетках HeLa». Индийский журнал медицинских исследований . 129 (5): 579–586. ISSN 0971-5916 . ПМИД 19675388 .
- ^ Рахбар Саадат, Ялда; Саиди, Назлы; Зунуни Вахед, Сепиде; Барзегари, Абольфазл; Барар, Джале (01 января 2015 г.). «Обновление лестничного анализа ДНК для обнаружения апоптоза» . Биовоздействия . 5 (1): 25–28. дои : 10.15171/bi.2015.01 . ISSN 2228-5652 . ПМК 4401164 . ПМИД 25901294 .
- ^ Цзян, Ай-Лян; Ченг, Янвэй; Ли, Цзянью; Чжан, Вэй (31 июля 2008 г.). «Цинк-зависимая ядерная эндонуклеаза отвечает за лестницу ДНК во время индуцированной солью запрограммированной гибели клеток в клетках кончиков корней риса». Журнал физиологии растений . 165 (11): 1134–1141. дои : 10.1016/j.jplph.2007.12.008 . ISSN 1618-1328 . ПМИД 18295371 .