Генная ловушка
Перехват генов — это высокопроизводительный подход, который используется для введения инсерционных мутаций в геном организма.
Метод
[ редактировать ]Ловушка осуществляется с помощью векторов-ловушек генов, основным элементом которых является кассета захвата генов, состоящая из беспромоторного репортерного гена и/или селектируемого генетического маркера , фланкированного вышестоящим 3'-сайтом сплайсинга (акцептор сплайсинга; SA) и нижележащей последовательностью терминации транскрипции ( полиаденилирование) . последовательность полиА).
При вставке в интрон экспрессируемого гена кассета генной ловушки транскрибируется с эндогенного промотора этого гена в форме слитого транскрипта, в котором экзон(ы) выше сайта вставки сплайсирован в рамке с репортером. селектируемый маркерный ген. Поскольку транскрипция преждевременно завершается во вставленном сайте полиаденилирования, процессированный слитый транскрипт кодирует укороченную и нефункциональную версию клеточного белка и репортерного/селектируемого маркера. Таким образом, генные ловушки одновременно инактивируют и сообщают об экспрессии захваченного гена в месте вставки, а также обеспечивают ДНК- метку (метку последовательности генной ловушки, GTST) для быстрой идентификации разрушенного гена . [1] [2]
Доступ
[ редактировать ]Международный консорциум генных ловушек централизует данные и поставляет модифицированные клеточные линии. [3]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Кобеллис, Г; Николаус, Г; и др. (2005). «Мечение генов сайтами обмена кассетами» . Нуклеиновые кислоты Рез . 33 (4): е44. дои : 10.1093/nar/gni045 . ПМЦ 552971 . ПМИД 15741177 .
- ^ Де-Зольт, С; Шнутген, Ф; и др. (2006). «Высокопроизводительный захват генов секреторного пути в эмбриональных стволовых клетках мыши» . Нуклеиновые кислоты Рез . 34 (3): 25. doi : 10.1093/nar/gnj026 . ПМЦ 1369290 . ПМИД 16478711 .
- ^ «IGTC, Международный консорциум генных ловушек» . www.genetrap.org . Проверено 11 февраля 2018 г.
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- Госслер А., Джойнер А.Л., Россант Дж., Скарнес У.К. (апрель 1989 г.). «Мышиные эмбриональные стволовые клетки и репортерные конструкции для обнаружения генов, регулируемых развитием». Наука . 244 (4903): 463–5. дои : 10.1126/science.2497519 . ПМИД 2497519 .
- фон Мельхнер Х., Рули Х.Э. (август 1989 г.). «Идентификация клеточных промоторов с использованием ловушки промотора ретровируса» . Журнал вирусологии . 63 (8): 3227–33. дои : 10.1128/JVI.63.8.3227-3233.1989 . ПМК 250892 . ПМИД 2545900 .
- Фридрих Г., Сориано П. (сентябрь 1991 г.). «Ловушки промотора в эмбриональных стволовых клетках: генетический скрининг для выявления и мутации генов развития у мышей» . Гены и развитие . 5 (9): 1513–23. дои : 10.1101/gad.5.9.1513 . ПМИД 1653172 .
- Замбровиц Б.П., Фридрих Г.А., Бакстон ЕС, Лиллеберг С.Л., Лицо С, Сэндс А.Т. (апрель 1998 г.). «Нарушение и идентификация последовательности 2000 генов в эмбриональных стволовых клетках мыши». Природа . 392 (6676): 608–11. дои : 10.1038/33423 . ПМИД 9560157 . S2CID 4329895 .
- Уайлс М.В., Ваути Ф., Отте Дж., Фюхтбауэр Э.М., Руис П., Фюхтбауэр А., Арнольд Х.Х., Лерах Х., Мец Т., фон Мельхнер Х., Вурст В. (январь 2000 г.). «Создание библиотеки тегов последовательностей генных ловушек для создания мутантных мышей из эмбриональных стволовых клеток». Природная генетика . 24 (1): 13–4. дои : 10.1038/71622 . ПМИД 10615117 . S2CID 29505338 .
- Стэнфорд В.Л., Кон Дж.Б., Кордес С.П. (октябрь 2001 г.). «Мутагенез с генными ловушками: прошлое, настоящее и за его пределами». Обзоры природы Генетика . 2 (10): 756–68. дои : 10.1038/35093548 . ПМИД 11584292 . S2CID 11468334 .
- Скарнес В.К., фон Мельхнер Х., Вурст В., Хикс Г., Норд А.С., Кокс Т., Янг С.Г., Руис П., Сориано П., Тессье-Лавин М., Конклин Б.Р., Стэнфорд В.Л., Россант Дж. (июнь 2004 г.). «Общественный ресурс генной ловушки для функциональной геномики мышей» . Природная генетика . 36 (6): 543–4. дои : 10.1038/ng0604-543 . ПМК 2716026 . ПМИД 15167922 .
- Хансен Дж., Флосс Т., Ван Слоун П., Фюхтбауэр Э.М., Ваути Ф., Арнольд Х.Х., Шнютген Ф., Вурст В., фон Мельхнер Х., Руис П. (август 2003 г.). «Крупномасштабный подход к генно-ориентированному мутагенезу для функционального анализа генома мыши» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 100 (17): 9918–22. дои : 10.1073/pnas.1633296100 . ЧВК 187885 . ПМИД 12904583 .
- Замбровиц Б.П., Абуин А., Рамирес-Солис Р., Рихтер Л.Дж., Пигготт Дж., БелтрандельРио Х. и др. (ноябрь 2003 г.). «Дефицит киназы Wnk1 снижает кровяное давление у мышей: скрининг генов-ловушек для выявления потенциальных целей для терапевтического вмешательства» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 100 (24): 14109–14. дои : 10.1073/pnas.2336103100 . ПМЦ 283554 . ПМИД 14610273 .
- Шнютген Ф., Де-Зольт С., Ван Слоун П., Холлац М., Флосс Т., Хансен Дж., Альтшмид Дж., Зайзенбергер С., Гизелинк Н.Б., Руис П., Шамбон П., Вурст В., фон Мельхнер Х. (май 2005 г.). «Полногеномное производство многоцелевых аллелей для функционального анализа генома мыши» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 102 (20): 7221–6. дои : 10.1073/pnas.0502273102 . ПМЦ 1129123 . ПМИД 15870191 .
- Спрингер PS (июль 2000 г.). «Генные ловушки: инструменты развития растений и геномики» . Растительная клетка . 12 (7): 1007–20. дои : 10.2307/3871251 . JSTOR 3871251 . ПМК 149045 . ПМИД 10899970 .
Внешние ссылки
[ редактировать ]