Гибридома кролика

Гибридома кролика представляет собой гибридную клеточную линию , образованную путем слияния кроличьих В-клеток, продуцирующих антитела , с раковыми В-клетками ( миеломными ).

История

Иммунная система кролика была документально подтверждена как средство для разработки антител с более высоким сродством и более разнообразным распознаванием многих молекул, включая фосфопептиды, углеводы и иммуногены, которые в противном случае не были бы иммуногенны у мышей. ^{[ 1 ]} Однако до недавнего времени тип антител, доступных у кроликов, ограничивался поликлональными антителами . в 1970-х годах было предпринято несколько попыток получить кроличьи моноклональные антитела После разработки технологии мышиных гибридом . ^{[ 2 ]} Были проведены исследования гетерогибридом мыши и кролика с целью получения кроличьих моноклональных антител. ^{[ 1 ]}^{[ 3 ]} Однако эти гетерогибридомы в конечном итоге было трудно клонировать, а клоны, как правило, нестабильны и не секретировали антитела в течение длительного периода времени.

Первоначальный партнер по слиянию

В 1995 году Кэтрин Найт и ее коллеги из Чикагского университета Лойолы преуспели в разработке двойного трансгенного кролика, сверхэкспрессирующего онкогены v-abl и c-myc под контролем энхансеров тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина. У кролика образовалась миеломоподобная опухоль, что позволило выделить клеточную линию плазмоцитомы, названную 240E-1. Слияние клеток 240E-1 с лимфоцитами кролика давало гибридомы, которые последовательно секретировали моноклональные антитела кролика. ^{[ 4 ]} Однако, как и в случае с ранними линиями миеломы мышей, разработанными в 1970-х годах, стабильность вызывала беспокойство. Ряд лабораторий, получивших линию клеток 240E-1 из лаборатории доктора Найта, сообщили о проблемах со стабильностью линии слитых клеток 240E-1. ^{[ 5 ]}

Улучшенный партнер по слиянию

В 1996 году Вейминь Чжу и Роберт Питела из Калифорнийского университета в Сан-Франциско (UCSF) получили 240E-1 из лаборатории доктора Найта и попытались разработать улучшенную гибридому кролика. ^{[ 4 ]} Улучшение характеристик 240E-1 было достигнуто за счет повторного субклонирования, отбора на высокую эффективность слияния, устойчивого роста и морфологических характеристик, таких как яркий внешний вид под фазово-контрастным микроскопом . Отобранные субклоны были дополнительно протестированы на их способность продуцировать стабильную гибридому и секрецию моноклональных антител. После нескольких раундов субклонирования и процессов отбора была идентифицирована новая клеточная линия под названием 240E-W, которая показала лучшую эффективность и стабильность слияния. Клеточная линия 240E-W с тех пор получила дальнейшее развитие и оптимизацию для производства кроличьих моноклональных антител для исследовательских и коммерческих целей.

Процесс

Процесс образования гибридомы у кролика сначала включает получение В-клеток от иммунизированного кролика. Существует множество протоколов иммунизации кроликов, в частности, для получения поликлональных антител. ^{[ 6 ]}^{[ 7 ]}^{[ 8 ]} После иммунизации В-клетки сливают с линией клеток-кандидата-партнера слияния кролика с образованием гибридом. Полученные антитела из гибридом проверяются на наличие антигена, который соответствует интересующим критериям, с помощью диагностических тестов, таких как ELISA , вестерн-блоттинг , иммуногистохимия и FACS. Полученные гибриддомы можно субклонировать для обеспечения моноклональных характеристик.

Гуманизация кроличьих антител

Митчелл Хо и Айра Пастан из Национального института рака (Бетезда, США) выделили группу кроличьих моноклональных антител (например, YP218, YP223), которые распознают редкие эпитопы мезотелина , включая слабоиммуногенные участки вблизи С-конца, для терапии рака. ^{[ 9 ]} Лаборатория доктора Хо проанализировала сложные структуры кроличьих антител с их антигенами из банка данных белков и идентифицировала остатки, контактирующие с антигеном, на кроличьем Fv на расстоянии 6 ангстремов от его антигена. ^{[ 10 ]} Они назвали «HV4» и «LV4» — петли некомплементарной области (CDR), которые структурно близки к антигену и расположены в каркасе 3 тяжелой цепи и легкой цепи кролика соответственно. На основе компьютерного структурного моделирования Хо и Чжан разработали стратегию гуманизации путем прививки объединенных CDR Kabat/IMGT/Paratome в последовательность каркаса зародышевой линии человека. Иммунотоксины, состоящие из гуманизированных кроличьих Fv (например, hYP218), слитых с клинически используемым токсином, показали более сильную цитотоксичность против опухолевых клеток, чем иммунотоксины, полученные из их исходных кроличьих Fv. Т-клетки CAR на основе антитела hYP218 также демонстрируют эффективное ингибирование роста опухоли у мышей. ^{[ 11 ]} Этот метод (т.е. прививка комбинированных кроличьих CDR Kabat/IMGT/Paratome к стабильному каркасу зародышевой линии человека) был предложен в качестве общего подхода к гуманизации кроличьих антител. ^{[ 10 ]}

Ссылки

^ Jump up to: ^а ^б Рэйбоулд Т.Дж., Такахаши М. (июнь 1988 г.). «Производство стабильных гибридом кролика и мыши, секретирующих кроличьи моноклональные антитела определенной специфичности». Наука . 240 (4860): 1788–90. Бибкод : 1988Sci...240.1788R . дои : 10.1126/science.3289119 . ПМИД 3289119 .
^ Коллинз Дж. Дж., Блэк П.Х., Стросберг А.Д., Хабер Э., Блох К.Дж. (февраль 1974 г.). «Трансформация обезьяньим вирусом 40 клеток селезенки гипериммунного кролика: доказательства синтеза иммуноглобулина трансформированными клетками» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 71 (2): 260–2. Бибкод : 1974PNAS...71..260C . дои : 10.1073/pnas.71.2.260 . JSTOR 62751 . ПМЦ 387981 . ПМИД 4150020 .
^ Куо MC, Согн Дж.А., Макс Э.Э., Киндт Т.Дж. (апрель 1985 г.). «Гибридомы кролика и мыши, секретирующие интактный кроличий иммуноглобулин». Молекулярная иммунология . 22 (4): 351–9. дои : 10.1016/0161-5890(85)90119-1 . ПМИД 4033662 .
^ Jump up to: ^а ^б Шпикер-Полет Х., Сетупати П., Ям ПК, Найт К.Л. (сентябрь 1995 г.). «Моноклональные антитела кролика: создание партнера по слиянию для получения гибридом кролика-кролика» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 92 (20): 9348–52. Бибкод : 1995PNAS...92.9348S . дои : 10.1073/pnas.92.20.9348 . ПМК 40982 . ПМИД 7568130 .
^ Лигуори М.Ю., Хофф-Велк Дж.А., Острув Д.Х. (июнь 2001 г.). «Рекомбинантный человеческий интерлейкин-6 усиливает секрецию иммуноглобулина гибридомы кролика-кролика». Гибридома . 20 (3): 189–98. дои : 10.1089/027245701750293529 . ПМИД 11461668 .
^ Ховард Г.К., Касер М.Р., ред. (2007). Изготовление и использование антител: практическое пособие . ЦРК Пресс. ISBN 9780849335280 .
^ Харлоу Э, Лейн Д (1988). Антитела: Лабораторное руководство . Лаборатория Колд-Спринг-Харбор. ISBN 978-1-936113-81-1 .
^ Колиган Дж.Э., Круисбек А.М. и др., ред. (1994). Современные протоколы в иммунологии . Грин и Уайли.
^ Чжан Ю.Ф., Фунг И., Гао В., Кава С., Хасан Р., Пастан И., Хо М. (май 2015 г.). «Новые моноклональные антитела с высоким сродством распознают неперекрывающиеся эпитопы мезотелина для мониторинга и лечения мезотелиомы» . Научные отчеты . 5 : 9928. Бибкод : 2015NatSR...5E9928Z . дои : 10.1038/srep09928 . ПМЦ 4440525 . ПМИД 25996440 . Материал был скопирован из этого источника, который доступен по международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 .
^ Jump up to: ^а ^б Чжан Ю.Ф., Хо М. (апрель 2017 г.). «Гуманизация кроличьих моноклональных антител посредством прививки комбинированных областей, определяющих комплементарность Kabat/IMGT/Paratome: обоснование и примеры» . МАБ . 9 (3): 419–429. дои : 10.1080/19420862.2017.1289302 . ПМЦ 5384799 . ПМИД 28165915 . В данной статье использован текст из этого источника, находящегося в свободном доступе .
^ Чжан Z, Цзян Д., Ян Х., Хэ З., Лю Х, Цинь В. и др. (июнь 2019 г.). «Модифицированные CAR Т-клетки, нацеленные на проксимальный к мембране эпитоп мезотелина, усиливают противоопухолевую функцию против большой солидной опухоли» . Смерть клеток и болезни . 10 (7): 476. doi : 10.1038/s41419-019-1711-1 . ПМК 6572851 . ПМИД 31209210 .

Внешние ссылки

Шпикер-Полет Х., Сетупати П., Ям ПК, Найт К.Л. (сентябрь 1995 г.). «Моноклональные антитела кролика: создание партнера по слиянию для получения гибридом кролика-кролика» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 92 (20): 9348–52. Бибкод : 1995PNAS...92.9348S . дои : 10.1073/pnas.92.20.9348 . JSTOR 2368468 . ПМК 40982 . ПМИД 7568130 .
Нотенбум Р.Х., Чоу К.Т., Гуд П.В., Дубиски С., Синадер Б., Кёлер Г. (октябрь 1980 г.). «Выделение и характеристика гибридомы мышь-кролик». Журнал иммуногенетики . 7 (5): 359–68. дои : 10.1111/j.1744-313X.1980.tb00729.x . ПМИД 7430676 . S2CID 39872636 .
Росси С., Лаурино Л., Фурланетто А., Чинеллато С., Орвието Е., Канал Ф. и др. (август 2005 г.). «Моноклональные антитела кролика: сравнительное исследование новой категории иммунореагентов и соответствующих мышиных моноклональных антител» . Американский журнал клинической патологии . 124 (2): 295–302. doi : 10.1309/NR8H-N08G-DPVE-MU08 . ПМИД 16040303 .

Внешние ссылки

[two-1] Jump up to: ^а ^б Рэйбоулд Т.Дж., Такахаши М. (июнь 1988 г.). «Производство стабильных гибридом кролика и мыши, секретирующих кроличьи моноклональные антитела определенной специфичности». Наука . 240 (4860): 1788–90. Бибкод : 1988Sci...240.1788R . дои : 10.1126/science.3289119 . ПМИД 3289119 .

[one-2] Коллинз Дж. Дж., Блэк П.Х., Стросберг А.Д., Хабер Э., Блох К.Дж. (февраль 1974 г.). «Трансформация обезьяньим вирусом 40 клеток селезенки гипериммунного кролика: доказательства синтеза иммуноглобулина трансформированными клетками» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 71 (2): 260–2. Бибкод : 1974PNAS...71..260C . дои : 10.1073/pnas.71.2.260 . JSTOR 62751 . ПМЦ 387981 . ПМИД 4150020 .

[three-3] Куо MC, Согн Дж.А., Макс Э.Э., Киндт Т.Дж. (апрель 1985 г.). «Гибридомы кролика и мыши, секретирующие интактный кроличий иммуноглобулин». Молекулярная иммунология . 22 (4): 351–9. дои : 10.1016/0161-5890(85)90119-1 . ПМИД 4033662 .

[four-4] Jump up to: ^а ^б Шпикер-Полет Х., Сетупати П., Ям ПК, Найт К.Л. (сентябрь 1995 г.). «Моноклональные антитела кролика: создание партнера по слиянию для получения гибридом кролика-кролика» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 92 (20): 9348–52. Бибкод : 1995PNAS...92.9348S . дои : 10.1073/pnas.92.20.9348 . ПМК 40982 . ПМИД 7568130 .

[five-5] Лигуори М.Ю., Хофф-Велк Дж.А., Острув Д.Х. (июнь 2001 г.). «Рекомбинантный человеческий интерлейкин-6 усиливает секрецию иммуноглобулина гибридомы кролика-кролика». Гибридома . 20 (3): 189–98. дои : 10.1089/027245701750293529 . ПМИД 11461668 .

[six-6] Ховард Г.К., Касер М.Р., ред. (2007). Изготовление и использование антител: практическое пособие . ЦРК Пресс. ISBN 9780849335280 .

[seven-7] Харлоу Э, Лейн Д (1988). Антитела: Лабораторное руководство . Лаборатория Колд-Спринг-Харбор. ISBN 978-1-936113-81-1 .

[eight-8] Колиган Дж.Э., Круисбек А.М. и др., ред. (1994). Современные протоколы в иммунологии . Грин и Уайли.

[9] Чжан Ю.Ф., Фунг И., Гао В., Кава С., Хасан Р., Пастан И., Хо М. (май 2015 г.). «Новые моноклональные антитела с высоким сродством распознают неперекрывающиеся эпитопы мезотелина для мониторинга и лечения мезотелиомы» . Научные отчеты . 5 : 9928. Бибкод : 2015NatSR...5E9928Z . дои : 10.1038/srep09928 . ПМЦ 4440525 . ПМИД 25996440 . Материал был скопирован из этого источника, который доступен по международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 .

[Zhang_Ho_2017-10] Jump up to: ^а ^б Чжан Ю.Ф., Хо М. (апрель 2017 г.). «Гуманизация кроличьих моноклональных антител посредством прививки комбинированных областей, определяющих комплементарность Kabat/IMGT/Paratome: обоснование и примеры» . МАБ . 9 (3): 419–429. дои : 10.1080/19420862.2017.1289302 . ПМЦ 5384799 . ПМИД 28165915 . В данной статье использован текст из этого источника, находящегося в свободном доступе .

[11] Чжан Z, Цзян Д., Ян Х., Хэ З., Лю Х, Цинь В. и др. (июнь 2019 г.). «Модифицированные CAR Т-клетки, нацеленные на проксимальный к мембране эпитоп мезотелина, усиливают противоопухолевую функцию против большой солидной опухоли» . Смерть клеток и болезни . 10 (7): 476. doi : 10.1038/s41419-019-1711-1 . ПМК 6572851 . ПМИД 31209210 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]