Jump to content

Фенол-хлороформная экстракция

Фенол-хлороформная экстракция — это метод жидкостно-жидкостной экстракции в молекулярной биологии, используемый для отделения нуклеиновых кислот от белков и липидов . [1]

Водные образцы, лизированные клетки или гомогенизированную ткань смешивают с равными объемами смеси фенола и хлороформа . Эту смесь затем центрифугируют. Поскольку смесь фенола и хлороформа не смешивается с водой, центрифуга приведет к образованию двух отдельных фаз: верхней водной фазы и нижней органической фазы. Водная фаза поднимается вверх, поскольку она менее плотная, чем органическая фаза, содержащая фенол:хлороформ. Эта разница в плотности является причиной того, что фенол, плотность которого лишь немного выше плотности воды, необходимо смешивать с хлороформом, чтобы получить смесь с гораздо более высокой плотностью, чем вода.

Гидрофобные липиды перейдут в нижнюю органическую фазу, а белки останутся на границе раздела между двумя фазами, тогда как нуклеиновые кислоты (а также другие примеси, такие как соли, сахара и т. д.) останутся в верхней водной фазе. Затем верхнюю водную фазу можно отобрать пипеткой. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать пипетирования какой-либо органической фазы или материала на границе раздела фаз . Эту процедуру часто выполняют несколько раз, чтобы повысить чистоту ДНК. [2] Эта процедура дает большую двухцепочечную ДНК, которую можно использовать в ПЦР или ПДРФ .

Если смесь кислая, ДНК выпадет в осадок в органической фазе, а РНК останется в водной фазе. Это связано с тем, что ДНК легче нейтрализуется, чем РНК.

Есть некоторые недостатки этого метода в судебно-медицинской экспертизе. Это отнимает много времени и использует опасные реагенты. Кроме того, поскольку это двухэтапный процесс, включающий перенос реагентов между пробирками, он подвергается большему риску загрязнения . [3]

См. также

[ редактировать ]
  1. ^ Чан, ПК С.; Чан, ДП; К, К.Ф.; Ю, МОЙ; Чунг, Дж.Л.; Ченг, А.Ф. (2001). «Оценка методов экстракции из тканей, залитых парафином, для ПЦР-амплификации человеческой и вирусной ДНК» . Журнал клинической патологии . 54 (5): 401–403. дои : 10.1136/jcp.54.5.401 . ПМЦ   1731425 . ПМИД   11328843 .
  2. ^ Сэмбрук, Джозеф; Рассел, Дэвид В. (2001). «Обычно используемые методы молекулярного клонирования» . Молекулярное клонирование . 3 .
  3. ^ Ли, Ричард (2015). Судебная биология . Бока-Ратон: CRC Press, Taylor & Francisco Group. стр. 115–117. ISBN  9781439889701 .


Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: d36dcdbbe9072186fe06450f9418ca00__1704663420
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/d3/00/d36dcdbbe9072186fe06450f9418ca00.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Phenol–chloroform extraction - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)