Фенол-хлороформная экстракция

Фенол-хлороформная экстракция — это метод жидкостно-жидкостной экстракции в молекулярной биологии, используемый для отделения нуклеиновых кислот от белков и липидов . ^[1]

Процесс

Водные образцы, лизированные клетки или гомогенизированную ткань смешивают с равными объемами смеси фенола и хлороформа . Эту смесь затем центрифугируют. Поскольку смесь фенола и хлороформа не смешивается с водой, центрифуга приведет к образованию двух отдельных фаз: верхней водной фазы и нижней органической фазы. Водная фаза поднимается вверх, поскольку она менее плотная, чем органическая фаза, содержащая фенол:хлороформ. Эта разница в плотности является причиной того, что фенол, плотность которого лишь немного выше плотности воды, необходимо смешивать с хлороформом, чтобы получить смесь с гораздо более высокой плотностью, чем вода.

Гидрофобные липиды перейдут в нижнюю органическую фазу, а белки останутся на границе раздела между двумя фазами, тогда как нуклеиновые кислоты (а также другие примеси, такие как соли, сахара и т. д.) останутся в верхней водной фазе. Затем верхнюю водную фазу можно отобрать пипеткой. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать пипетирования какой-либо органической фазы или материала на границе раздела фаз . Эту процедуру часто выполняют несколько раз, чтобы повысить чистоту ДНК. ^[2] Эта процедура дает большую двухцепочечную ДНК, которую можно использовать в ПЦР или ПДРФ .

Если смесь кислая, ДНК выпадет в осадок в органической фазе, а РНК останется в водной фазе. Это связано с тем, что ДНК легче нейтрализуется, чем РНК.

Есть некоторые недостатки этого метода в судебно-медицинской экспертизе. Это отнимает много времени и использует опасные реагенты. Кроме того, поскольку это двухэтапный процесс, включающий перенос реагентов между пробирками, он подвергается большему риску загрязнения . ^[3]

См. также

Ссылки

^ Чан, ПК С.; Чан, ДП; К, К.Ф.; Ю, МОЙ; Чунг, Дж.Л.; Ченг, А.Ф. (2001). «Оценка методов экстракции из тканей, залитых парафином, для ПЦР-амплификации человеческой и вирусной ДНК» . Журнал клинической патологии . 54 (5): 401–403. дои : 10.1136/jcp.54.5.401 . ПМЦ 1731425 . ПМИД 11328843 .
^ Сэмбрук, Джозеф; Рассел, Дэвид В. (2001). «Обычно используемые методы молекулярного клонирования» . Молекулярное клонирование . 3 .
^ Ли, Ричард (2015). Судебная биология . Бока-Ратон: CRC Press, Taylor & Francisco Group. стр. 115–117. ISBN 9781439889701 .

Эта по молекулярной биологии статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

[1] Чан, ПК С.; Чан, ДП; К, К.Ф.; Ю, МОЙ; Чунг, Дж.Л.; Ченг, А.Ф. (2001). «Оценка методов экстракции из тканей, залитых парафином, для ПЦР-амплификации человеческой и вирусной ДНК» . Журнал клинической патологии . 54 (5): 401–403. дои : 10.1136/jcp.54.5.401 . ПМЦ 1731425 . ПМИД 11328843 .

[2] Сэмбрук, Джозеф; Рассел, Дэвид В. (2001). «Обычно используемые методы молекулярного клонирования» . Молекулярное клонирование . 3 .

[3] Ли, Ричард (2015). Судебная биология . Бока-Ратон: CRC Press, Taylor & Francisco Group. стр. 115–117. ISBN 9781439889701 .

[1]

[2]

[3]