Приверженная культура
Адгезивные клеточные культуры — это тип клеточной культуры , которая требует, чтобы клетки были прикреплены к поверхности, чтобы произошел рост. [1] Большинство клеток, полученных от позвоночных (за исключением гемопоэтических клеток ), можно культивировать, и для них требуется двумерный монослой, который облегчает адгезию и распространение клеток. [2] Образцы клеток можно брать из тканевых эксплантов или клеточных суспензионных культур. Прикрепившиеся клеточные культуры с избытком питательной среды, содержащей питательные вещества , будут продолжать расти, пока не покроют доступную площадь поверхности. [3] Протеазы, такие как трипсин, чаще всего используются для разрушения адгезии клеток к колбе. В качестве альтернативы можно использовать скребки для механического разрушения адгезии, если введение протеаз может повредить клеточные культуры. [4] [5] В отличие от суспензионных культур , другого основного типа клеточных культур, прикрепившиеся культуры требуют регулярного пассирования, выполняемого с использованием механической или ферментативной диссоциации. [1] Культуру можно визуализировать с помощью инвертированного микроскопа, однако рост прикрепившихся культур зависит от доступной площади поверхности. По этой причине культуры прикрепленных клеток обычно не используются для получения высокого выхода клеток, вместо этого предпочтительным является использование суспензионных культур. [4]
Методы и обслуживание
[ редактировать ]Изолирующие клетки
[ редактировать ]Первичные клетки, используемые для адгезивных культур, должны быть выделены и обработаны от субъекта или могут быть перенесены из ранее существовавших клеточных линий. Прикрепленные клетки сначала необходимо перенести на монослой, прикрепленный к поверхности, и классифицируются по их морфологическим различиям. [6] Фибробластоподобные адгезивные клетки имеют линейную и вытянутую форму и мигрируют при прикреплении к монослою. Эпителиоподобные прикрепляющиеся клетки имеют более широкую и многоугольную форму и не мигрируют при прикреплении к монослою. Как только клетки должным образом изолированы от их источника и перенесены в среду, пассирование можно проводить клеток.
Поддержание адгезивных клеточных культур для лабораторий
[ редактировать ]При пассаже культур прикрепившихся клеток отработанную среду необходимо неоднократно откачивать пипеткой и заменять свежей средой. [7] Культуральный сосуд также можно многократно постукивать, что следует сочетать с механическими или ферментативными методами для облегчения отделения клеток. Культуральный сосуд также можно центрифугировать, образуя надосадочную жидкость , которую можно экстрагировать с помощью пипетки. Клетки необходимо кормить 2–3 раза в неделю и культивировать при соответствующей температуре, влажности, освещенности и pH, чтобы обеспечить оптимальную пролиферацию клеток .
Пассирование (субкультивирование) клеток
[ редактировать ]Хотя приверженные культуры имеют сходство с суспензионными культурами , существует множество ключевых различий в том, как их культивируют и пассируют. Для пассажа прикрепившейся культуры отработанную среду сначала выкачивают пипеткой из колбы, содержащей клетки в качестве отходного продукта. [8] Клетки прикрепляются к среде, которая не была удалена в культуральном сосуде, после чего для отделения клеток необходима серия промывок и инкубации. На этапе промывки сбалансированный солевой раствор выливают в сторону, противоположную клеточной культуре, а затем культуральный сосуд встряхивают перед сливом сбалансированного солевого раствора. На этапе инкубации к культуральному сосуду применяется тепло, вызывающее денатурацию белка и постепенное отделение клеток от среды. Как и в случае с суспензионными культурами, общее количество клеток можно рассчитать с помощью гемоцитометра и трипанового синего.
Коммерческие приложения и ограничения
[ редактировать ]Прикрепленные культуры чаще всего используются для цитологии и для сбора клеточных продуктов в небольших масштабах. Поскольку их рост ограничен 2D, трудно использовать прикрепленные культуры для изучения структуры и функции клеток in vivo. [4] Проводятся исследования по выращиванию культур прикрепленных клеток с использованием 3D- микроносителей , чтобы избежать этого ограничения и использовать культуры прикрепленных клеток для тестирования лекарств. [9]
Коммерческое применение адгезивных культур включает:
- Производство адгезивных клеток, которые создают представляющие интерес белки, используемые для разработки вакцин. [10]
- Адгезивные клетки используются в сочетании с вирусными векторами для клеточной и генной терапии. [11]
- Доставка микро- и нанотехнологий к прикрепленным клеткам in vitro. [12]
- Корректировка морфологии адгезивных клеток для скрининга раковых клеток. [13]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а б «Культура адгезивных клеток – биотехнологии | Pall Corporation» . www.pall.com . Проверено 27 ноября 2022 г.
- ^ «Прикрепленная клеточная культура против суспензионной клеточной культуры - США» . www.thermofisher.com . Проверено 27 ноября 2022 г.
- ^ admin.facellitate (08.06.2022). «Методы культивирования клеток in vitro: адгезивная культура против суспензионной культуры» . faCellitate . Проверено 27 ноября 2022 г.
- ^ Jump up to: а б с «Методы культивирования клеток in vitro: адгезивная культура против суспензионной культуры» . FaCellitate . 27 ноября 2022 г. . Проверено 27 ноября 2022 г.
- ^ «Субкультура адгезивных клеточных линий» . Миллипор Сигма . 29 ноября 2022 г. . Проверено 29 ноября 2022 г.
- ^ «Типы клеток и характеристики культуры» . www.ptglab.com . Проверено 2 декабря 2022 г.
- ^ «Поддержание клеток | Молекулярная биология» . Проверено 2 декабря 2022 г.
- ^ «Субкультивирование адгезивных клеток - США» . www.thermofisher.com . Проверено 2 декабря 2022 г.
- ^ Ву, Чуэ-Ю; Стокляйн, Дэниел; Коммаджосула, Адитья; Лин, Джонатан; Оусли, Киган; Ганапатисубраманиан, Баскар; Ди Карло, Дино (2018). «Формованные 3D-микроносители для культуры и анализа прикрепленных клеток» . Микросистемы и наноинженерия . 4:21 . дои : 10.1038/s41378-018-0020-7 . ISSN 2055-7434 . ПМК 6220171 . ПМИД 31057909 .
- ^ Ltd, Эско Микро Пте. «Биореакторы с адгезивными клеточными культурами | Esco VacciXcell» . escovaccixcell.com . Проверено 2 декабря 2022 г.
- ^ «Приверженные или суспензионные платформы: каково ближайшее будущее производства вирусных векторов?» . БиоИнсайтс . Проверено 2 декабря 2022 г.
- ^ Канг, Вонмо; Макнотон, Ребекка Л.; Эспиноза, Орасио Д. (август 2016 г.). «Микро- и нанотехнологии доставки в адгезивные клетки» . Тенденции в биотехнологии . 34 (8): 665–678. дои : 10.1016/j.tibtech.2016.05.003 . ISSN 0167-7799 . ПМЦ 4958582 . ПМИД 27287927 .
- ^ Прасад, Ашок; Ализаде, Элахе (01 апреля 2019 г.). «Форма и функция клеток: интерпретация и контроль формы прикрепившихся клеток» . Тенденции в биотехнологии . 37 (4): 347–357. дои : 10.1016/j.tibtech.2018.09.007 . ISSN 0167-7799 . ПМИД 30316557 . S2CID 52981105 .