Дальнезападный блот

Дальний -вестерн-блоттинг , или дальний-вестерн-блоттинг , представляет собой молекулярно-биологический метод, основанный на технике вестерн-блоттинга для обнаружения белок-белкового взаимодействия in vitro . ^[1]^[2] В то время как вестерн- блоттинг использует зонд с антителом для обнаружения интересующего белка, дальне-вестерн-блоттинг использует зонд, не содержащий антител, который может связывать интересующий белок. Таким образом, тогда как вестерн-блоттинг используется для обнаружения определенных белков, дальне-вестерн-блоттинг используется для обнаружения межбелковых взаимодействий.

Метод

При обычном вестерн-блоттинге гель-электрофорез для отделения белков от образца используется ; эти белки затем переносятся на мембрану на этапе «блоттинга». Затем при вестерн-блоттинге специфические белки идентифицируют с помощью зонда антитела .

В дальневестерн-блоттинге используются белки, не являющиеся антителами, для исследования интересующего белка на блоте. Таким способом можно идентифицировать партнеров по связыванию зондового (или блоттированного) белка. Белок-зонд часто получают в E. coli с использованием вектора экспрессионного клонирования .

Затем белок-зонд можно визуализировать обычными методами — его можно пометить радиоактивным изотопом; он может иметь специфический аффинный тег, такой как His или FLAG , для которого существуют антитела; или может существовать белок-специфическое антитело (к белку-зонду).

Поскольку клеточные экстракты обычно полностью денатурируются путем кипячения в детергенте перед гель-электрофорезом , этот подход наиболее полезен для обнаружения взаимодействий, которые не требуют нативной свернутой структуры интересующего белка.

Ссылки

^ Холл, Рэнди А. (2004). «Изучение белок-белковых взаимодействий с помощью наложения блоттинга или дальнего вестерн-блоттинга». Белково-белковые взаимодействия . Методы молекулярной биологии. Том. 261. стр. 167–174. CiteSeerX 10.1.1.380.553 . дои : 10.1385/1-59259-762-9:167 . ISBN 978-1-59259-762-8 . ПМИД 15064457 .
^ Мачида, Казуя; Майер, Брюс Дж. (2009). «Обнаружение белок-белковых взаимодействий методом далеко-вестерн-блоттинга». Блоттинг и обнаружение белков . Методы молекулярной биологии. Том. 536. стр. 313–329. дои : 10.1007/978-1-59745-542-8_34 . ISBN 978-1-934115-73-2 . ISSN 1064-3745 . ПМИД 19378071 .

Внешние ссылки

Дальневосточный + блоттинг в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)
Обзор на piercenet.com
Обзор на utoronto.ca

Эта по молекулярной биологии статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

[Hall2004-1] Холл, Рэнди А. (2004). «Изучение белок-белковых взаимодействий с помощью наложения блоттинга или дальнего вестерн-блоттинга». Белково-белковые взаимодействия . Методы молекулярной биологии. Том. 261. стр. 167–174. CiteSeerX 10.1.1.380.553 . дои : 10.1385/1-59259-762-9:167 . ISBN 978-1-59259-762-8 . ПМИД 15064457 .

[MachidaMayer2009-2] Мачида, Казуя; Майер, Брюс Дж. (2009). «Обнаружение белок-белковых взаимодействий методом далеко-вестерн-блоттинга». Блоттинг и обнаружение белков . Методы молекулярной биологии. Том. 536. стр. 313–329. дои : 10.1007/978-1-59745-542-8_34 . ISBN 978-1-934115-73-2 . ISSN 1064-3745 . ПМИД 19378071 .

[1]

[2]