Решение Буэна
Раствор Буэна , или раствор Буэна , представляет собой сложный фиксатор, используемый в гистологии . [ 1 ] Он был изобретен французским биологом Полем Буэном и состоит из пикриновой кислоты , уксусной кислоты и формальдегида в водном растворе. [ 2 ] Жидкость Буэна особенно полезна для фиксации биоптатов желудочно-кишечного тракта , поскольку этот фиксатор обеспечивает более четкое и лучшее ядер окрашивание , чем 10% формалин с нейтральным буфером. Он не является хорошим фиксатором, когда ультраструктуру необходимо сохранить ткани для электронной микроскопии . Однако он является хорошим фиксатором, когда необходимо сохранить структуру ткани с мягкой и нежной текстурой. Уксусная кислота в этом фиксаторе лизирует эритроциты и растворяет небольшие отложения железа и кальция в тканях. Вариант, в котором уксусная кислота заменена муравьиной, может быть использован как для фиксации тканей, так и для декальцинации. [ 3 ] Эффекты трех химических веществ в растворе Буэна уравновешивают друг друга. Формалин делает цитоплазму базофильной, но этот эффект уравновешивается действием пикриновой кислоты. Это приводит к превосходному ядерному и цитоплазматическому окрашиванию H&E . Тканеукрепляющий эффект формалина уравновешивается фиксацией мягких тканей пикриновой и уксусной кислот. Эффект уксусной кислоты на отек тканей уравновешивается эффектом пикриновой кислоты на сокращение тканей. [ 4 ]
Гидратированные срезы фиксированной формальдегидом ткани обычно предварительно обрабатывают раствором Буэна для получения правильных результатов при окраске трихромом на контрастные цвета коллагеновых и цитоплазматических (мышечных) волокон. Трихромные методы были разработаны для тканей, фиксированных в кислых смесях, содержащих сулему, которые сейчас используются лишь в небольших масштабах.) Для такой коррекции трихромного окрашивания необходим только компонент пикриновой кислоты раствора Буэна. [ 5 ]
При использовании раствора Буэна может возникнуть несколько потенциальных проблем. Из-за наличия формалина в растворе при просмотре срезов тканей под микроскопом может присутствовать пигмент формалин. Влажную ткань следует фиксировать в растворе Буэна менее чем на 24 часа. Избыток пикриновой кислоты следует вымывать из ткани несколькими спиртовыми и водными растворами, иначе качество окрашивания со временем может ухудшиться. Влажную ткань, зафиксированную раствором Буэна, следует хранить в спиртово-водном растворе, а не в растворе Буэна. Поскольку раствор Буэна содержит формальдегид, пикриновую кислоту и уксусную кислоту, следует принять соответствующие меры предосторожности в отношении этих веществ и соблюдать правила. В частности, следует отметить, что пикриновая кислота может быть взрывоопасной, чувствительной к трению и ударам, в сухом состоянии и при контакте с некоторыми металлами может образовывать нестабильные пикраты металлов.
Под названием «жидкость Буэна» этот фиксатор также широко применяется для морских беспозвоночных. [ 6 ] Его готовят следующим образом: пикриновая кислота, насыщенный водный раствор – 75 мл; формалин, 40% водный раствор – 25 мл; кислота уксусная ледяная – 5 мл. [ 7 ]
Вариации
[ редактировать ]Гендерное решение
[ редактировать ]Жандровый раствор — алкогольный вариант раствора Буэна. При приготовлении этого раствора вместо водного раствора, насыщенного пикриновой кислотой, используют спиртовой раствор, насыщенный пикриновой кислотой. Это решение полезно, когда гликоген и другие углеводы необходимо сохранить в тканях. Его готовят путем смешивания насыщенного раствора пикриновой кислоты в 95% этаноле (80 мл) с формалином (37-40% формальдегида) (15 мл) и ледяной уксусной кислотой (5 мл). [ 8 ] Фиксатор Жандра содержит больше пикриновой кислоты, чем фиксатор Буэна, из-за большей растворимости (6,23% мас./об.) в этаноле, чем в воде (1,23% мас./об.). [ 9 ]
Решение Олланда
[ редактировать ]Раствор Олланда — это вариант раствора Буэна, содержащий ацетат меди . Ацетат меди стабилизирует мембраны эритроцитов и гранулы эозинофилов клеток , и эндокринных так что происходит меньший лизис этих клеточных компонентов, чем в обычном растворе Буэна. [ 10 ] Фиксатор Холланда изготавливается путем добавления 6,25 г ацетата меди, 10 г пикриновой кислоты (влажный порошок), 25 мл формалина (37-40% формальдегида) и 2,5 мл ледяной (100%) уксусной кислоты к 250 мл воды. [ 11 ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Карсон, Фрида Л.; Хладик, Криста (2009). Гистотехнология: текст для самообучения (3-е изд.). Гонконг: Издательство Американского общества клинической патологии . п. 19. ISBN 978-0-89189-581-7 .
- ^ Каллинг, CFA 1974. Справочник по гистопатологическим и гистохимическим методам (включая музейные методы), 3-е изд. Лондон: Баттервортс, стр.49.
- ^ Бэнкрофт, Джон Д.; Гэмбл, Мэрилин, ред. (2008). Теория и практика методов гистологии (6-е изд.). Китай: Черчилль Ливингстон Эльзевир. п. 72. ИСБН 978-0-443-10279-0 .
- ^ Бейкер, Дж. Р. 1958. Принципы биологической микротехники. Лондон, Метуэн, стр. 149–150.
- ^ Кирнан, Дж. А. 2015 Гистологические и гистохимические методы. Теория и практика. Банбери, Великобритания: Scion, стр.195.
- ^ Линкольн, Роджер Дж.; Шилс, Джон Гордон, ред. (1979). Беспозвоночные животные - сбор и сохранение (1-е изд.). Великобритания: Британский музей (естественная история). п. 128. ИСБН 0-521-296773 .
- ^ Каллинг, CFA 1974. Справочник по гистопатологическим и гистохимическим методам (включая музейные методы), 3-е изд. Лондон: Баттервортс, стр.49.
- ^ Каллинг, CFA 1974. Справочник по гистопатологическим и гистохимическим методам (включая музейные методы), 3-е изд. Лондон: Баттервортс, стр.49.
- ^ Дин, Дж. А. 1973. Справочник Ланге по химии, 11-е изд. Нью-Йорк: МакГроу-Хилл, стр.7-383.
- ^ Карсон, Фрида Л.; Хладик, Криста (2009). Гистотехнология: текст для самообучения (3-е изд.). Гонконг: Издательство Американского общества клинической патологии . п. 19. ISBN 978-0-89189-581-7 .
- ^ Грей, П. 1954. Формуляр и руководство для микротомиста. Перепечатано в 1975 году. Хантингтон, Нью-Йорк: Крейгер, стр.220.