Трихромное окрашивание

«Трихром» перенаправляется сюда. О трехцветном зрении см. Трихроматия . Информацию о группе и альбоме см. в разделе Trichromes . Для трехцветных систем см. Цветовую модель CMY , Цветовую модель RGB и Цветовую модель RYB . Не путать с Трихомом .

Окрашивание трихромом — это метод гистологического окрашивания , в котором используются два или более кислотных красителя в сочетании с поликислотой . Окрашивание дифференцирует ткани, окрашивая их в контрастные цвета. Он увеличивает контрастность микроскопических особенностей клеток и тканей , что облегчает их наблюдение при просмотре через микроскоп .

Слово трихром означает «три цвета». Первым протоколом окрашивания, который был описан как «трихром», было окрашивание трихромом по Мэллори , которое дифференциально окрашивало эритроциты в красный цвет, мышечную ткань в красный цвет и коллаген в синий цвет. Некоторые другие протоколы трихромного окрашивания — это трихромное окрашивание Массона , трихромное окрашивание Лилли и трихромное окрашивание Гёмёри .

Цель

Без трихромного окрашивания отличить один признак от другого может быть крайне сложно. Гладкую мышечную ткань , например, трудно отличить от коллагена. Окрашивание трихромом может окрасить мышечную ткань в красный цвет, а коллагеновые волокна в зеленый или синий цвет. Биопсия печени может содержать тонкие коллагеновые волокна между клетками печени, и количество коллагена можно оценить на основе метода окрашивания. Трихромные методы в настоящее время используются, среди прочего, для дифференциации мышц от коллагена, альфа-клеток гипофиза от бета-клеток, фибрина от коллагена и митохондрий в свежезамороженных срезах мышц, а также для других целей. Это помогает выявить увеличение коллагеновой ткани (т.е. фиброзные изменения), например, при циррозе печени , и отличить опухоли, возникающие из мышечных клеток и фибробластов.

Процедура

В технике трихромного окрашивания используются два или более кислотных красителя . Обычно кислотные красители окрашивают одни и те же основные белки, но, применяя их последовательно, можно манипулировать схемой окрашивания. Поликислота (например, фосфорномолибденовая кислота или фосфорновольфрамовая кислота ) используется для избирательного удаления красителя. Считается, что поликислоты ведут себя как красители с высокой молекулярной массой : они вытесняют легко удаляемый краситель из коллагена.

красный краситель в разбавленной уксусной кислоте Обычно сначала наносят , чтобы прокрасить все компоненты. Затем наносится поликислота, удаляющая красный краситель из коллагена и некоторых других компонентов методом вытеснения. Наносится второй кислотный краситель (синий или зеленый) в разбавленной уксусной кислоте, который, в свою очередь, вытесняет поликислоту, в результате чего коллаген окрашивается в цвет, контрастирующий с используемым исходным красителем. Если необходимо окрасить эритроциты, перед окрашиванием красным красителем наносят желтый или оранжевый краситель с небольшой молекулярной массой. Обычно его применяют из насыщенного раствора в 80% этаноле и часто в сочетании с пикриновой кислотой (которая сама по себе является красителем) и поликислотой. В методах используются незначительные различия в реакции тканей на красители, плотности, доступности и т. д.

Трихромные красители, при которых красители и поликислота наносятся последовательно, называются многоступенчатыми трихромами . В «одноэтапных» методах все красители — с поликислотой или без нее — объединяются в одном растворе. Одним из старейших одноэтапных подходов к окрашиванию трихромом является метод Ван Гисона, при котором мышцы и цитоплазма окрашиваются в желтый цвет, а коллаген — в красный. Другой вариант — трихромное окрашивание Гёмёри , которое очень похоже на трихром Массона. При методе «желтого растворения» сначала наносится красный краситель в разбавленной уксусной кислоте, затем срез очень тщательно обезвоживается, чтобы не осталось влаги. Затем красный краситель заменяется желтым красителем в растворителе, например целлозольве (2-этоксиэтанол). Название «желтый раствор» представляет собой смесь терминов «желтый» и «целлосольв» . Флоксин-тартразин Лендрума для клеточных включений является одним из примеров окрашивания желтым раствором.

Красители

Среди красителей, используемых для трихромного окрашивания, выделяют:

Красный

Кислота фуксин , ксилидин понсо, хромотроп 2R, алый Бибриха , понсо 6R, флоксин.

Синий и зеленый

Светло-зеленый SF желтоватый, Fast Green FCF , метиловый синий , водный синий.

Желтый

Пикриновая кислота , оранжевый G , мартиус желтый , тартразин , фрезерный желтый.

См. также

• Дисперсионное окрашивание
• микроскопия
• Фазово-контрастная микроскопия

Ссылки

• Бейкер Дж. Р. (1958) Принципы биологической микротехники. Лондон: Метуэн. (Также переиздание в мягкой обложке, Franklin Classics Trade Press, США, 2018. ISBN 978-0353331044.)
• Хоробин Р.В. (1982)Гистохимия. Штутгарт: Густав Фишер. ISBN 3437107003.
• Хоробин Р.В. (1988) Понимание гистохимии. Чичестер: Эллис Хорвуд. ISBN 9780470210604.
• Кирнан Дж.А. (2015) Гистологические и гистохимические методы, 5-е изд. Банбери, Великобритания: Scion. ISBN 9781907904325.
• Пренто П. (2009) Окрашивание макромолекул: возможные механизмы и примеры. Биотехнология. Гистохим. 84: 139-158.
• Пухтлер Х. Ислер Х. (1958) Влияние фосфорномолибденовой кислоты на окрашивание соединительных тканей различными красителями. Дж. Гистохим. Цитохим. 6: 265-270.
• Рид ЧП. Ягалло М., Нер С., Янкунис М., Морроу П. (1993) Механизм техник соединительной ткани. 1. Влияние концентрации красителя и времени окрашивания на процедуры анионного окрашивания. Гистохим. Дж. 25: 821–829.

Внешние ссылки

СМИ, связанные с окрашиванием трихромом, на Викискладе?

• Трихромный протокол Массона