✖


Jump to content

Испытание бокового потока

Иллюстрация НАСА анализа бокового потока.

Тест бокового потока ( LFT ), [ 1 ] Это анализ, также известный как устройство с боковым потоком ( LFD ), иммунохроматографический анализ с боковым потоком или быстрый тест . Это простое устройство, предназначенное для обнаружения присутствия целевого вещества в жидкой пробе без необходимости использования специализированного и дорогостоящего оборудования. LFT широко используются в медицинской диагностике в домашних условиях, на местах и ​​в лаборатории. Например, домашний тест на беременность представляет собой LFT, который обнаруживает определенный гормон. Эти тесты просты и экономичны и обычно показывают результаты примерно через пять-тридцать минут. [ 2 ] Многие лабораторные приложения повышают чувствительность простых LFT за счет использования дополнительного специального оборудования. [ 3 ] Поскольку целевым веществом часто является биологический антиген , многие тесты с латеральным потоком представляют собой быстрые тесты на антиген (RAT или ART).

LFT работают на тех же принципах аффинной хроматографии , что и иммуноферментные анализы ( ELISA ). По сути, эти тесты проводят образец жидкости по поверхности подушечки с реактивными молекулами, которые показывают визуальный положительный или отрицательный результат. Подушечки основаны на ряде капиллярных слоев, таких как кусочки пористой бумаги, [ 4 ] микроструктурированный полимер , [ 5 ] [ 6 ] или спеченный полимер. [ 7 ] Каждая из этих подушечек способна спонтанно транспортировать жидкость (например, мочу, кровь, слюну). [ 8 ]

Подушечка для проб действует как губка и удерживает избыток жидкости пробы. После впитывания жидкость течет ко второй площадке для конъюгата, в которой производитель хранит лиофилизированные биологически активные частицы, называемые конъюгатами (см. ниже), в матрице соль-сахар. Подушечка конъюгата содержит все реагенты, необходимые для оптимизированной химической реакции между молекулой-мишенью (например, антигеном ) и ее химическим партнером (например, антителом ), иммобилизованным на поверхности частицы. Это маркирует целевые частицы, когда они проходят через площадку и продолжают путь к тестовой и контрольной линиям. Тестовая линия показывает сигнал, часто цветной, как в тестах на беременность. Контрольная линия содержит аффинные лиганды, которые показывают, прошел ли образец и активны ли биомолекулы в подушечке конъюгата. Пройдя эти реакционные зоны, жидкость попадает в конечный пористый материал — фитиль, который действует просто как контейнер для отходов.

LFT могут работать как конкурентные или сэндвич-анализы .

История

[ редактировать ]

LFT происходят от бумажной хроматографии , которая была разработана в 1943 году Мартином и Синджем . [ 9 ] и разработан в 1944 году Консденом, Гордоном и Мартином. [ 10 ] [ 11 ] После 1945 года произошел взрыв активности в этой области. [ 9 ] Технология ИФА была разработана в 1971 году. [ 12 ] Ряд патентов LFT, включая оспариваемый патент США 6 485 982, описанный ниже, был подан компанией Armkel LLC, начиная с 1988 года. [ 13 ]

Краткое содержание

[ редактировать ]

Цветные частицы

[ редактировать ]

В принципе, можно использовать любые цветные частицы, кроме латекса (синего цвета) или частиц нанометрового размера. [ 14 ] из золота (красного цвета) чаще всего используются. Частицы золота имеют красный цвет из-за локализованного поверхностного плазмонного резонанса . [ 15 ] флуоресцентный [ 16 ] или магнитный [ 17 ] [ 18 ] также можно использовать меченые частицы, но для оценки результата теста требуется использование электронного считывателя.

Сэндвич-анализы

[ редактировать ]
Разница между сэндвич-анализом и конкурентными форматами тестов латерального потока [ нужны разъяснения ]

Сэндвич-анализы обычно используются для более крупных аналитов, поскольку они имеют тенденцию иметь несколько сайтов связывания. [ 19 ] По мере прохождения образца через анализ он сначала сталкивается с конъюгатом, который представляет собой антитело, специфичное к целевому аналиту, помеченное визуальной меткой, обычно коллоидным золотом. Антитела связываются с целевым аналитом в образце и мигрируют вместе, пока не достигнут тест-линии. Тестовая линия также содержит иммобилизованные антитела, специфичные к целевому аналиту, которые связываются с молекулами конъюгата, связанными с мигрированным аналитом. Затем тестовая линия демонстрирует визуальное изменение из-за концентрированной визуальной метки, что подтверждает наличие целевых молекул. Большинство сэндвич-анализов также имеют контрольную линию, которая появляется независимо от того, присутствует или нет целевой аналит, чтобы гарантировать правильное функционирование пластины латерального потока. [ 2 ]

Быстрый и недорогой сэндвич-анализ обычно используется для домашних тестов на беременность, которые обнаруживают хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) в моче беременных женщин.

Конкурентные анализы

[ редактировать ]

Конкурентные анализы обычно используются для аналитов меньшего размера, поскольку аналиты меньшего размера имеют меньше сайтов связывания. [ 19 ] В образце сначала обнаруживаются антитела к целевому аналиту, помеченные визуальной меткой (цветные частицы). Тестовая линия содержит целевой аналит, зафиксированный на поверхности. Когда целевой аналит отсутствует в образце, несвязанное антитело будет связываться с этими фиксированными молекулами аналита, что означает, что будет виден визуальный маркер. И наоборот, когда целевой аналит присутствует в образце, он связывается с антителами, предотвращая их связывание с фиксированным аналитом в тест-линии, и, таким образом, визуальный маркер не проявляется. Он отличается от сэндвич-анализа тем, что отсутствие полосы означает наличие аналита. [ 2 ] [ 19 ]

Количественные тесты

[ редактировать ]

Большинство LFT предназначены для работы исключительно на качественной основе. Однако можно измерить интенсивность тестовой линии, чтобы определить количество аналита в образце. Портативные диагностические устройства, известные как считыватели бокового потока, используются несколькими компаниями для получения полностью количественных результатов анализа. Используя уникальные длины волн света для освещения в сочетании с технологией обнаружения CMOS или CCD , можно получить насыщенное сигналами изображение реальных тестовых линий. Используя алгоритмы обработки изображений, специально разработанные для конкретного типа теста и среды, интенсивность линий можно затем соотнести с концентрацией аналита. Одна из таких портативных платформ для устройств бокового потока изготовлена ​​ООО «Детект Биомедикал». [ 20 ] Альтернативные неоптические методы также позволяют сообщать о результатах количественного анализа. Одним из таких примеров является магнитный иммуноанализ (МИА) в форме LFT, который также позволяет получить количественный результат. Уменьшение изменений в капиллярной откачке пробы жидкости — еще один подход к переходу от качественных результатов к количественным. Недавние работы, например, продемонстрировали капиллярную перекачку с постоянной скоростью потока, независимой от вязкости жидкости и поверхностной энергии . [ 6 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ]

Линия управления

[ редактировать ]
Контрольная полоска этого теста на беременность пуста, что делает тест недействительным.

В большинстве тестов используется вторая линия, содержащая дополнительное антитело (неспецифическое к анализируемому веществу), которое связывает некоторые оставшиеся окрашенные частицы, которые не связались с тестовой линией. Это подтверждает, что жидкость успешно прошла с подушечки для нанесения образца мимо тестовой линии. [ 2 ] Предоставляя подтверждение того, что образец имел возможность взаимодействовать с тестовой линией, это повышает уверенность в том, что визуально неизмененная тестовая линия может быть интерпретирована как отрицательный результат (или что измененная тестовая линия может быть интерпретирована как отрицательный результат в конкурентный анализ).

Экстракция плазмы крови

[ редактировать ]

Поскольку интенсивный красный цвет гемоглобина мешает считыванию результатов колориметрических или оптических диагностических тестов, разделение плазмы крови является обычным первым шагом к повышению точности диагностических тестов. Плазму можно извлечь из цельной крови с помощью встроенных фильтров. [ 24 ] или посредством агглютинации. [ 25 ]

Скорость и простота

[ редактировать ]

Время получения результата теста является ключевым фактором для этих продуктов. Результаты тестов могут быть доступны уже через несколько минут. Обычно существует компромисс между временем и чувствительностью: разработка более чувствительных тестов может занять больше времени. Другим ключевым преимуществом этого формата теста по сравнению с другими иммуноанализами является простота теста, поскольку обычно требуется мало или вообще не требуется подготовка проб или реагентов. [ 26 ]

Патенты

[ редактировать ]

Это высококонкурентная область, и многие люди претендуют на патенты в этой области, в первую очередь компания Alere (ранее Inverness Medical Innovations, теперь принадлежащая Abbott ), владеющая патентами. [ 13 ] первоначально поданный Unipath . Срок действия патента США № 6 485 982, по которому ведется судебное разбирательство, истек в 2019 году. Ряд других компаний также имеют патенты в этой области. Группа конкурентов оспаривает действительность патентов. [ 27 ] Оригинальный патент, очевидно, датирован 1988 годом. [ 28 ] [ 29 ]

Приложения

[ редактировать ]

Анализы латерального потока имеют широкий спектр применений и могут тестировать различные образцы, такие как моча, кровь, слюна, пот, сыворотка и другие жидкости. В настоящее время они используются клиническими лабораториями, больницами и врачами для быстрого и точного тестирования конкретных целевых молекул и экспрессии генов. Другими сферами применения анализов латерального потока являются безопасность пищевых продуктов и окружающей среды, а также ветеринарная медицина для определения химических веществ, таких как болезни и токсины. [ 2 ] LFT также часто используются для выявления заболеваний, таких как вирус Эбола, но наиболее распространенными LFT являются домашние беременности. [ 2 ] и тесты на SARS-CoV-2.

Тестирование на COVID-19

[ редактировать ]
Основная статья: Быстрый тест на антиген COVID-19
Быстрый тест на боковой поток антигена COVID-19 показал отрицательный результат

Анализы латерального потока сыграли решающую роль в тестировании на COVID-19 , поскольку их преимущество заключается в том, что они дают результат через 15–30 минут. [ 30 ] Систематическая оценка анализов латерального потока во время пандемии COVID-19 [ 31 ] была инициирована в Оксфордском университете в рамках сотрудничества Великобритании с Общественным здравоохранением Англии . Исследование FALCON-C19, начавшееся в июне 2020 года в Великобритании, подтвердило чувствительность некоторых устройств с латеральным потоком (LFD) в этих условиях. [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] Согласно этим ранним тестам, четыре из 64 протестированных LFD имели желаемые эксплуатационные характеристики; Быстрый качественный тест Innova на антиген SARS-CoV-2 выполнен умеренно [ 34 ] в обнаружении/чувствительности вирусных антигенов с превосходной специфичностью, хотя потенциальными проблемами были процент неудачных наборов и влияние обучения. [ 33 ] Специфичность теста Innova более широко известна, но чувствительность в исследованиях 4 фазы составила 50,1%. [ 35 ] Здесь описывается устройство, у которого каждый второй пациент, инфицированный COVID-19 и протестированный в реальных условиях, получит ложноотрицательный результат. После закрытия школ в январе 2021 года в Англии были введены тесты LFT раз в две недели для учителей, учеников и семей учеников, когда школы вновь открылись 8 марта 2021 года для бессимптомного тестирования. [ 36 ] 9 апреля 2021 года LFT, проводимый раз в две недели, стал общедоступным для всех в Англии. [ 37 ] LFT использовались для массового тестирования на COVID-19 по всему миру [ 38 ] [ 39 ] [ 40 ] и дополнять другие меры общественного здравоохранения в отношении COVID-19. [ 41 ]

Некоторые ученые за пределами правительства в конце 2020 года выразили серьезные опасения по поводу использования LFD Innova для скрининга на Covid. По словам Джона Дикса , профессора биостатистики в Университете Бирмингема , Англия, тест Innova «совершенно непригоден» для общественного тестирования: «поскольку тест может пропустить до половины случаев, отрицательный результат теста указывает на снижение риска Covid, но не исключает Covid». [ 42 ] [ 43 ]

Чувствительность тестов, использованных в 2022 году, составила около 70%. [ 44 ]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Вайс, Алан (1 ноября 1999 г.). «Конкурентный инжиниринг для диагностики боковых потоков» . Технология IVD . Архивировано из оригинала 15 апреля 2014 г. Проверено 1 октября 2022 г.
  2. ^ Jump up to: а б с д и ж Кочула, Катажина М.; Галлотта, Андреа (30 июня 2016 г.). «Анализ латерального потока» . Очерки по биохимии . 60 (1): 111–120. дои : 10.1042/EBC20150012 . ПМЦ   4986465 . ПМИД   27365041 .
  3. ^ Йетисен А.К., Акрам М.С., Лоу Ч.Р. (июнь 2013 г.). «Бумажные микрофлюидные диагностические устройства для мест оказания медицинской помощи». Лаборатория на чипе . 13 (12): 2210–51. дои : 10.1039/C3LC50169H . ПМИД   23652632 . S2CID   17745196 .
  4. ^ «Введение в боковой поток» . khufash.com . Архивировано из оригинала 28 июля 2012 года . Проверено 27 июля 2012 г.
  5. ^ Ханссон Дж., Ясуга Х., Харальдссон Т., ван дер Вейнгаарт В. (январь 2016 г.). «Синтетическая микрофлюидная бумага: массивы полимерных микростолбиков с большой площадью поверхности и высокой пористостью» . Лаборатория на чипе . 16 (2): 298–304. дои : 10.1039/C5LC01318F . ПМИД   26646057 .
  6. ^ Jump up to: а б Вэйджин Го; Йонас Ханссон; Воутер ван дер Вейнгаарт (2016). «Микрожидкостная пропитка бумаги, независимая от вязкости» (PDF) . MicroTAS 2016, Дублин, Ирландия .
  7. ^ Крозье, Алекс; Раджан, Селина; Бьюкен, Иэн; Макки, Мартин (3 февраля 2021 г.). «Испытание: использование технологий быстрого тестирования на Covid-19» . БМЖ . 372 : Приложение стр. 6. дои : 10.1136/bmj.n208 . ПМИД   33536228 . S2CID   231775752 . Приложение Таблица 1, с. 6 .
  8. ^ «Антитела, белки, наборы ИФА» . Аббекса . Проверено 12 января 2022 г. Анализ латерального потока, также известный как иммунохроматографический анализ латерального потока [...] Технология основана на ряде капиллярных слоев; такие как кусочки пористой бумаги, микроструктурированный полимер или спеченный полимер. Каждый из этих элементов обладает способностью спонтанно транспортировать жидкость (например, мочу).
  9. ^ Jump up to: а б Хаслам Э (2007). «Растительные танины – уроки фитохимической жизни». Фитохимия . 68 (22–24): 2713–21. Бибкод : 2007PChem..68.2713H . doi : 10.1016/j.phytochem.2007.09.009 . ПМИД   18037145 .
  10. ^ Консден Р., Гордон А.Х., Мартин А.Дж. (1944). «Качественный анализ белков: метод распределительной хроматографии на бумаге» . Биохимический журнал . 38 (3): 224–32. дои : 10.1042/bj0380224 . ПМК   1258072 . ПМИД   16747784 .
  11. ^ «Бумажная хроматография | химия» . Британская энциклопедия . Проверено 1 июня 2018 г.
  12. ^ Энгвалл, Э (22 ноября 1972 г.). «Имуноферментный анализ, Элиза» . Журнал иммунологии . 109 (1): 129–135. дои : 10.4049/jimmunol.109.1.129 . ISSN   0022-1767 . ПМИД   4113792 .
  13. ^ Jump up to: а б Патент США 6485982 , Дэвид Э. Чарльтон, «Тестовое устройство и метод иммуноанализа цветных частиц», опубликованный 26 ноября 2002 г., передан компании Church & Dwight.  
  14. ^ Кесада-Гонсалес Д., Меркоши А. (ноябрь 2015 г.). «Биосенсоры бокового потока на основе наночастиц» . Биосенсоры и биоэлектроника . 73 (специальный): 47–63. дои : 10.1016/j.bios.2015.05.050 . hdl : 10261/131760 . ПМИД   26043315 .
  15. ^ Наногибриды. «Этикетки с золотыми наночастицами, специально разработанные для анализов в латеральном потоке» . Наногибриды . Архивировано из оригинала 11 сентября 2021 года . Проверено 29 сентября 2020 г.
  16. ^ Фаулстих К., Грулер Р., Эберхард М., Хаберстро К. (июль 2007 г.). «Разработка быстрых мобильных POC-систем. Часть 1. Устройства и приложения для латеральной иммунодиагностики» . Технология IVD . 13 (6): 47–53. Архивировано из оригинала 02 марта 2009 г. Проверено 22 ноября 2007 г.
  17. ^ Лаборд RT, О'Фаррел Б. (апрель 2002 г.). «Обнаружение парамагнитных частиц в анализах с боковым потоком» . ИВД Технол . 8 (3): 36–41. Архивировано из оригинала 1 марта 2010 г. Проверено 22 ноября 2007 г.
  18. ^ «Магнитный иммуноанализ: новая парадигма в POCT (архив IVDT, июль/август 2008 г.)» . Архивировано из оригинала 28 октября 2013 года . Проверено 23 октября 2008 г.
  19. ^ Jump up to: а б с наноКомпозикс. «Введение в экспресс-диагностику латерального потока» . наноКомпозикс . Проверено 4 ноября 2019 г.
  20. ^ «ООО «Детект Биомедикал» - Считыватели бокового потока для экспресс-детектирования тест-полосок и иммуноанализа» . idetekt.com . Проверено 6 июля 2017 г.
  21. ^ Го, Вэйджин; Ханссон, Йонас; Ван дер Вейнгаарт, Воутер (2016). «Капиллярная откачка, не зависящая от вязкости жидкой пробы» . Ленгмюр . 32 (48): 12650–12655. doi : 10.1021/acs.langmuir.6b03488 . ПМИД   27798835 . S2CID   24662688 .
  22. ^ Го, Вэйджин; Ханссон, Йонас; Ван дер Вейнгаарт, Воутер (2017). «Капиллярная откачка с постоянным расходом, не зависящим от вязкости пробы жидкости и поверхностной энергии». 2017 30-я Международная конференция IEEE по микроэлектромеханическим системам (MEMS) . стр. 339–341. дои : 10.1109/MEMSYS.2017.7863410 . ISBN  978-1-5090-5078-9 . S2CID   13219735 .
  23. ^ Го В., Ханссон Дж., Ван дер Вейнгаарт В. (2018). «Капиллярная перекачка, не зависящая от поверхностной энергии и вязкости жидкости» . Микросистемы и наноинженерия . 4 (1): 2. Бибкод : 2018MicNa...4....2G . дои : 10.1038/s41378-018-0002-9 . ПМК   6220164 . ПМИД   31057892 .
  24. ^ Трипати С., Кумар В., Прабхакар А., Джоши С., Агравал А. (2015). «Пассивное разделение плазмы крови на микроуровне: обзор принципов проектирования и микроустройств». Дж. Микромехан. Микроинж . 25 (8): 083001. Бибкод : 2015JMiMi..25h3001T . дои : 10.1088/0960-1317/25/8/083001 . S2CID   138153068 .
  25. ^ Го В., Ханссон Дж., ван дер Вейнгаарт В. (май 2020 г.). «Синтетическая бумага отделяет плазму от цельной крови с низкой потерей белка» . Аналитическая химия . 92 (9): 6194–6199. дои : 10.1021/acs.analchem.0c01474 . ПМИД   32323979 .
  26. ^ Лю, Илинь; Жан, Ли; Цинь, Чжэньпэн; Сакрисон, Джеймс; Бишоф, Джон К. (23 марта 2021 г.). «Сверхчувствительные и высокоспецифичные анализы латерального потока для диагностики на месте» . АСУ Нано . 15 (3): 3593–3611. дои : 10.1021/acsnano.0c10035 . ISSN   1936-0851 . ПМИД   33607867 . S2CID   231969545 .
  27. ^ «Массивная веб-группа, оспаривающая патенты на боковой поток» . Медицинское устройствоСсылка . Ноябрь 2000 г. Архивировано из оригинала 8 июля 2001 г.
  28. ^ «Датчики бокового потока» . www.sensor100.com . Проверено 18 апреля 2024 г.
  29. ^ US6485982B1 , Чарльтон, Дэвид Э., «Тестовое устройство и метод иммуноанализа цветных частиц», выпущено 26 ноября 2002 г.  
  30. ^ Гульельми Дж. (сентябрь 2020 г.). «Быстрые тесты на коронавирус: что можно и чего нельзя». Природа . 585 (7826): 496–498. Бибкод : 2020Natur.585..496G . дои : 10.1038/d41586-020-02661-2 . ПМИД   32939084 . S2CID   221768935 .
  31. ^ «Руководство: первая волна оценки немашинной технологии бокового потока (LFT)» . GOV.UK. ​11 января 2021 г. Проверено 20 января 2021 г.
  32. ^ «Оксфордский университет и PHE подтверждают высокую чувствительность тестов латерального потока» . GOV.UK. ​11 ноября 2020 г.
  33. ^ Jump up to: а б «Платформа СОКОЛ — КОНДОР» . www.condor-platform.org . Проверено 25 ноября 2020 г.
  34. ^ Jump up to: а б Пето Т. (июнь 2021 г.). «COVID-19: Быстрое обнаружение антигена SARS-CoV-2 с помощью анализа латерального потока: национальная систематическая оценка чувствительности и специфичности массового тестирования» . Электронная клиническая медицина . 36 : 100924. doi : 10.1016/j.eclinm.2021.100924 . ПМК   8164528 . ПМИД   34101770 . S2CID   231609922 .
  35. ^ Вольф А., Халмс Дж., Хопкинс Х. (10 марта 2021 г.). «Специфика устройства с боковым потоком на этапе 4 (постмаркетингового) наблюдения» (PDF) . gov.uk. ​ Архивировано (PDF) из оригинала 14 августа 2022 г.
  36. ^ «Бессимптомное тестирование на коронавирус (COVID-19) в школах и колледжах» . GOV.UK. ​Проверено 27 мая 2021 г.
  37. ^ «Быстрое тестирование два раза в неделю будет доступно каждому в Англии» . GOV.UK. ​05.04.2021 . Проверено 27 мая 2021 г.
  38. ^ «Словакия проводит массовое тестирование двух третей населения на Covid» . Хранитель . Агентство Франс-Пресс. 2 ноября 2020 г. ISSN   0261-3077 .
  39. ^ Питер Литтлджонс (6 ноября 2020 г.). «Великобритания тестирует тест бокового потока на Covid-19 – как это работает?» . Медицинские изделия Н.С.
  40. ^ «Район округа Мертир-Тидвил станет первым пилотным проектом по тестированию на всей территории Уэльса» . ПРАВИТЕЛЬСТВО УЭЛЬСА . 18 ноября 2020 г.
  41. ^ «Популяционное тестирование SARS-CoV-2: опыт стран и потенциальные подходы в ЕС/ЕЭЗ и Великобритании» . Европейский центр профилактики и контроля заболеваний . 19 августа 2020 г.
  42. ^ Берк М. (18 ноября 2020 г.). «Ученые призывают с осторожностью использовать тесты с боковым потоком для выявления Covid-19» . Химический мир . Критика LFD для тестирования Covid со стороны нескольких экспертов с подробным численным обсуждением.
  43. ^ Дикс Дж., Раффл А., Гилл М. (12 января 2021 г.). «Covid-19: правительство должно срочно переосмыслить проведение испытаний на боковой поток» . Мнение БМЖ .
  44. ^ Тапари А., Бралиу Г.Г., Папаефтимиу М., Маврики Х., Конту П.И., Николопулос Г.К., Багос П.Г. (4 июня 2022 г.). «Эффективность тестов на обнаружение антигена SARS-CoV-2: систематический обзор и метаанализ» . Диагностика . 12 (6): 1388. doi : 10.3390/diagnostics12061388 . ПМК   9221910 . ПМИД   35741198 .

Дальнейшее чтение

[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Lateral_flow_test&oldid=1230688030"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 08293681437cf6f6f16646ed7f51cad5__1719190800
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/08/d5/08293681437cf6f6f16646ed7f51cad5.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Lateral flow test - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)