Активация базофилов
Аллергические симптомы вызваны начальным системным гистамина выбросом активированными базофилами и тучными клетками , что может привести к шоку с отеком гортани , обструкцией нижних дыхательных путей и гипотонией . Вот почему базофилы вместе с тучными клетками считаются ключевыми клетками при аллергических заболеваниях.
Процесс активации
[ редактировать ]Иммуноглобулин Е ( IgE ) представляет собой класс антител (или «изотип» иммуноглобулина), который обнаружен только у млекопитающих. Он играет важную роль при аллергии и особенно связан с гиперчувствительностью 1 типа . Рецепторы (FcεR) для константной области IgE, области Fc , имеются на нескольких типах клеток, включая тучные клетки и базофилы. Базофилы содержат внутри клетки множество гранул, наполненных разнообразными активными веществами, вызывающими аллергическую реакцию при дегрануляции. Клетки активируются и начинают дегрануляцию, когда антитело IgE, связанное с аллергеном, который может связываться со специфической вариабельной областью IgE, Fab-областью , связывается с рецептором Fc.
in vitro Метод теста на аллергию
[ редактировать ]В большинстве случаев при выявлении аллергии используют положительную кожную пробу, однако активация базофильных гранулоцитов анти-IgE, экспрессия антигена CD63 на поверхности клетки (плазматической мембране) позволяют идентифицировать аллерген, ответственный за реакцию гиперчувствительности. без проведения общего теста на царапины . Для этого эксперимента требуется лишь небольшое количество крови, что делает его удобным в использовании, поскольку его можно проводить параллельно с обычным анализом крови. Его можно использовать при различных аллергиях (например, на пчелиный яд , лекарства , контрастные вещества). [ 1 ] ).
Дегрануляция
[ редактировать ]Дегранулированные клетки подвергают CD63 [ 2 ] молекулы на внешней клеточной мембране, поэтому гранулы , содержащие молекулы CD63 на внутренней поверхности, сливаются с клеточной мембраной. Внутренняя клеточная поверхность гранул становится внешней клеточной поверхностью базофилов/тучных клеток во время процесса дегрануляции.
| материалы | цель |
|---|---|
| БСБ | стимуляция базофилов |
| Ил-3 | стимуляция базофилов |
| аллерген | |
| ЭДТА | пробка дегрануляции |
| маркер | отмечает базофилы |
| лизирующий раствор | лизирует эритроциты |
| центрифуга | вращать эритроциты |
| ПБС | смывание лизирующего раствора |
| FACS | подсчет клеток |
Маркировка и сортировка
[ редактировать ]Поскольку проточная цитометрия является ценным инструментом для анализа большого количества клеток и идентификации клеточных популяций даже при низких концентрациях, можно определить процент базофилов, активированных после стимуляции аллергенами in vitro и экспрессирующих маркер CD63. Маркер CD63 представляет собой антиген, меченный изотиоцианатом флуоресцеина , который может связываться с белком CD63 и используется для сортировки клеток с помощью FACS (сортировка/сортировка клеток, активируемая флуоресценцией). Этот меченный FITC антиген излучает свет с длиной волны 530 нм. Поскольку интенсивность излучаемой флуоресценции пропорциональна местам связывания каждой отдельной клетки, интенсивность будет увеличиваться в зависимости от количества конъюгированных с FITC антител, связанных с клетками, экспрессирующими CD63.
Процедура
[ редактировать ]Готовят пробирку с буфером для стимуляции базофилов (BSB), содержащим интерлейкин 3 и аллерген, который необходимо протестировать. Добавляют образец крови и пробирку инкубируют при температуре 37 °C в течение нескольких минут, чтобы гарантировать связывание аллергенов с IgE. При добавлении ЭДТА в пробирку процесс дегрануляции немедленно останавливается. После дегрануляции в пробирку добавляют маркер CD63 (меченые антитела). Несколько минут при комнатной температуре дают маркеру время для связывания с белками CD63 на клеточной мембране базофилов. Для лизиса эритроцитов проводят этап лизиса. Поскольку их численность намного превышает количество лейкоцитов, их необходимо удалить, чтобы провести FACS-анализ базофилов.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Бём I и др. Пилотное исследование активации базофилов, индуцированной контрастным веществом . Фундам Клин Фармакол 2011; 25: 267 - 276
- ^ Джейнвей, Калифорния, младший ; и др. (2001). Иммунобиология (5-е изд.). Издательство «Гирлянда». ISBN 0-8153-3642-Х . (полный текст в электронной форме через NCBI Bookshelf) .