Процедура замороженного среза

Процедура замороженных срезов — это патологоанатомическая лабораторная процедура, позволяющая выполнить быстрый микроскопический анализ образца. Чаще всего его используют в онкологической хирургии . ^[1] Техническое название этой процедуры — криосекция . Устройство микротома , которое разрезает тонкие блоки замороженной ткани методом холодной резки, называется криотомом . ^[2]

Качество слайдов, полученных с помощью замороженных срезов, ниже, чем при обработке тканей, фиксированных формалином и залитых в парафин. Хотя во многих случаях диагноз можно поставить, во многих случаях для более точного диагноза предпочтительна обработка фиксированной ткани.

Интраоперационная консультация — это название всего вмешательства патологоанатома , которое включает не только замороженные срезы, но и общую оценку образца, исследование цитологических препаратов, взятых с образца (например, отпечатков прикосновения), а также аликвотирование образца для специальных целей. исследования (например, методы молекулярной патологии, проточная цитометрия). Отчет патологоанатома часто ограничивается диагнозом «доброкачественный» или «злокачественный» и передается оперирующему хирургу через интерком. При операции на ранее подтвержденном злокачественном новообразованиях основная цель патологоанатома — сообщить хирургу, свободен ли край резекции от остаточного рака или присутствует ли остаточный рак на краю резекции. Обработка обычно осуществляется методом выпекания хлеба . Но операция с контролируемым краем ( CCPDMA ) может быть выполнена с использованием различных методов разрезания и крепления тканей, включая операцию Мооса .

История

Процедура замороженных срезов, практикуемая сегодня в медицинских лабораториях, основана на описании доктора Луи Б. Уилсона в 1905 году. Уилсон разработал эту технику на основе более ранних отчетов по просьбе доктора Уильяма Мэйо , хирурга и одного из основателей клиники Майо. ^[3] В более ранних отчетах доктора Томаса С. Каллена из больницы Джонса Хопкинса в Балтиморе также упоминались замороженные срезы, но только после фиксации формалином, а патологоанатом доктор Уильям Уэлч, также из Хопкинса, экспериментировал с процедурой Каллена, но без клинических последствий. Таким образом, Уилсону обычно приписывают настоящего пионера этой процедуры (Gal & Cagle, 2005). ^[4]

Процедура

Ключевым инструментом для криоссекции является криостат , который по сути представляет собой микротом внутри морозильной камеры. Микротом можно сравнить с очень точным «гастрономическим» слайсером, способным нарезать срезы толщиной до 1 микрометра. Обычный гистологический срез вырезается толщиной от 5 до 10 микрометров. Хирургический образец помещается на диск из металлической ткани, который затем закрепляется в патроне и быстро замораживается до температуры от –20 до –30 °C. Образец помещают в гелеобразную среду для заливки, обычно OCT , которая состоит из полиэтиленгликоля и поливинилового спирта ; это соединение известно под многими названиями и в замороженном состоянии имеет ту же плотность, что и замороженная ткань. При этой температуре большинство тканей становятся твердыми. Обычно для тканей, богатых жиром или липидами, требуется более низкая температура. Каждая ткань имеет предпочтительную температуру обработки. Затем его разрезают в замороженном состоянии с помощью микротомной части криостата, срез переносят на предметное стекло и окрашивают (обычно гематоксилином и эозином , краситель H&E ). Подготовка пробы происходит гораздо быстрее, чем при традиционном методе. гистологический метод (около 10 минут против 16 часов). Однако техническое качество разделов значительно ниже. Вся лаборатория может занимать площадь менее 9 квадратных футов (0,84 м²). ²), и требуется минимальная вентиляция по сравнению со стандартной лабораторией с образцами, залитыми воском. ^{[ нужна ссылка ]}

Этапы криотомии:

Установка образцов на один или несколько патронов.
Покрытие образца заливочной средой
Нанесение проводника (если только это не тонкий образец, который нужно стоять на боку)
Использование замораживающего спрея для ускорения замерзания, если таковой имеется.
Отрыв любой закладной среды, которая доходит до пластины патрона.
Закрепите патрон на криотоме и нарежьте относительно толстые срезы до тех пор, пока не обнажится вся интересующая поверхность ткани.
Продвижение образца над лезвием, удерживая секцию вниз, чтобы предотвратить ее складывание на себя.
Продолжайте до тех пор, пока вся интересующая ткань не окажется в разрезе.
Наложение предметного стекла на ткань.

Использование

Основное применение процедуры замороженных срезов — исследование тканей во время операции. Это может быть по разным причинам. При выполнении операции Мооса это простой метод контроля границ хирургического образца в режиме реального времени. Если опухоль метастазирует , образец предполагаемого метастаза отправляется на криосекцию для подтверждения его идентичности. Это поможет хирургу решить, есть ли смысл продолжать операцию. Обычно агрессивное хирургическое вмешательство проводится только в том случае, если есть шанс вылечить пациента. Если опухоль метастазировала, хирургическое вмешательство обычно не приводит к излечению, и хирург выбирает более консервативную операцию или вообще не выполняет резекцию. Если опухоль была удалена, но неясно, свободен ли край резекции от опухоли, необходима интраоперационная консультация для оценки необходимости проведения дальнейшей резекции для получения четких границ. При процедуре на сторожевом узле сторожевой узел, содержащий опухолевую ткань, требует дальнейшей диссекции лимфатического узла, в то время как доброкачественный узел избегает такой процедуры. ^{[ нужна ссылка ]}

Если операция носит исследовательский характер, быстрое обследование поражения может помочь определить возможную причину симптомов пациента. Однако важно отметить, что возможности патологоанатома очень ограничены из-за низкого технического качества замороженных срезов. Окончательный диагноз редко устанавливается интраоперационно. ^{[ нужна ссылка ]}

Редко криосрезы используются для обнаружения веществ, утраченных при традиционном гистологическом методе, например липидов. Их также можно использовать для обнаружения некоторых антигенов , замаскированных формалином. Криостат доступен в вариантах от небольшого портативного устройства весом менее 80 фунтов (36 кг) до большого стационарного устройства весом 500 фунтов (230 кг) и более. Всю гистологическую лабораторию можно переносить в одном портативном ящике, что делает гистологию замороженных срезов возможным инструментом в примитивной медицине.

Точность диагностики

В систематическом обзоре Кокрейна, опубликованном в 2016 году, были проанализированы все исследования, в которых сообщалось о диагностической точности замороженных срезов у женщин, перенесших операцию по поводу подозрительной опухоли яичника. В обзоре сделан вывод, что для опухолей, которые на замороженном срезе были явно либо доброкачественными, либо злокачественными, точность диагноза была хорошей, что позже было подтверждено регулярной биопсией. Напротив, там, где диагноз замороженного среза представлял собой пограничную опухоль, что не подтверждало и не исключало рак, диагноз был менее точным. Обзор показывает, что в таких ситуациях неопределенности хирурги могут решить провести дополнительную операцию у этой группы женщин во время первоначальной операции, чтобы уменьшить необходимость во второй операции, поскольку в среднем одна из пяти таких операций впоследствии у женщин был обнаружен рак. ^[5]

Ультракриотом

Ультракриотом трансмиссионной , который очень похож на критом, может разрезать ультратонкие блоки ткани, и эту ткань можно наблюдать с помощью электронной микроскопии . Толщина среза ультракриотома составляет около десятков нанометров. Ультраструктурные . свойства можно изучать без внедрения ткани, поэтому молекулярная консервация лучше ^[6]

См. также

Массив замороженных тканей

Ссылки

^ «Тестирование образцов биопсии и цитологии на рак» (PDF) .
^ «Криотом» . TheFreeDictionary.com . Проверено 3 ноября 2021 г.
^ Уилсон Л.Б. (1905). «Способ быстрой подготовки свежих тканей к микроскопу» . J Am Med Assoc . 45 (23): 1737. doi : 10.1001/jama.1905.52510230037003c .
^ Гал А.А., Кейгл П.Т. (2005). «100-летие описания процедуры замороженного сечения». ДЖАМА . 294 (298): 3135–7. дои : 10.1001/jama.294.24.3135 . ПМИД 16380595 . S2CID 757309 .
^ Ратнавелу, Северная Дакота; Браун, АП; Маллетт, С; Схолтен, Р.Дж.; Патель, А; Фунта, К; Галаал, К; Кросс, П; Наик, Р. (1 марта 2016 г.). «Интраоперационный анализ замороженных срезов для диагностики ранней стадии рака яичников при подозрительных образованиях в области таза» (PDF) . Кокрановская база данных систематических обзоров . 3 (9): CD010360. дои : 10.1002/14651858.CD010360.pub2 . ПМК 6457848 . ПМИД 26930463 .
^ «Гистологические методы. 4. Срезы. КРИОТОМ» . Атлас гистологии растений и животных . Проверено 3 ноября 2021 г.

Внешние ссылки

Страница пациента JAMA о процедуре замороженного среза

[1] «Тестирование образцов биопсии и цитологии на рак» (PDF) .

[TheFreeDictionary.com-2] «Криотом» . TheFreeDictionary.com . Проверено 3 ноября 2021 г.

[3] Уилсон Л.Б. (1905). «Способ быстрой подготовки свежих тканей к микроскопу» . J Am Med Assoc . 45 (23): 1737. doi : 10.1001/jama.1905.52510230037003c .

[4] Гал А.А., Кейгл П.Т. (2005). «100-летие описания процедуры замороженного сечения». ДЖАМА . 294 (298): 3135–7. дои : 10.1001/jama.294.24.3135 . ПМИД 16380595 . S2CID 757309 .

[5] Ратнавелу, Северная Дакота; Браун, АП; Маллетт, С; Схолтен, Р.Дж.; Патель, А; Фунта, К; Галаал, К; Кросс, П; Наик, Р. (1 марта 2016 г.). «Интраоперационный анализ замороженных срезов для диагностики ранней стадии рака яичников при подозрительных образованиях в области таза» (PDF) . Кокрановская база данных систематических обзоров . 3 (9): CD010360. дои : 10.1002/14651858.CD010360.pub2 . ПМК 6457848 . ПМИД 26930463 .

[6] «Гистологические методы. 4. Срезы. КРИОТОМ» . Атлас гистологии растений и животных . Проверено 3 ноября 2021 г.

[1]

[2]

[3]

[4]

[5]

[6]