✖


Jump to content

гематоксилин

(Перенаправлено с Гематоксилина )

Гематоксилин
Гематоксилин порошок
Скелетная формула гематоксилина
Шаровидная модель молекулы гематоксилина.
Имена
Предпочтительное название ИЮПАК
(6a S ,11b R )-7,11b-Дигидроиндоло[2,1- c ][1]бензопиран-3,4,6a,9,10(6 H )-пентол
Другие имена
гематоксилин; Натуральный черный 1; гематоксилин; гидроксибразилин; Гидроксибразилин; КИ 75290
Идентификаторы
3D model ( JSmol )
ЧЕМБЛ
ХимическийПаук
Информационная карта ECHA 100.007.490 Отредактируйте это в Викиданных
МеШ Гематоксилин
НЕКОТОРЫЙ
Характеристики
С 16 Н 14 О 6
Молярная масса 302.282  g·mol −1
Температура плавления 100-120 °С
Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа).

Гематоксилин или гематоксилин ( / ˌ h iː m ə ˈ t ɒ k s ɪ l ɪ n / ) , также называемый натуральным черным 1 или CI 75290 , представляет собой соединение , извлеченное из сердцевины бревенчатого дерева ( Haematoxylum Campechianum ). [1] [2] с химической формулой C
16 ч.
14 Ох
6 . Этот природный краситель использовался в качестве гистологического красителя , в качестве чернил. [3] [4] [5] [6] и как краситель в текстильной и кожевенной промышленности. [7] [8] Краситель гематоксилин получил название Пало де Кампече. [8] экстракт бревна, [7] синее дерево [9] и черное дерево. [9] В гистологии после окрашивания гематоксилином обычно следует контрастное эозином окрашивание . [1] [10] [11] В сочетании эта процедура окрашивания известна как окрашивание H&E и является одной из наиболее часто используемых комбинаций в гистологии . [1] [7] [12] [13] [14] Помимо использования в окраске H&E, гематоксилин также является компонентом окраски Папаниколау (или окраски Папаниколау), которая широко используется при исследовании цитологических образцов. [1] [14]

Хотя краситель обычно называют гематоксилином, активным красителем является окисленная форма гематеина , которая образует ярко окрашенные комплексы с ионами некоторых металлов (обычно солями Fe(III) и Al(III)). [1] [7] [8] [15] [16] В чистом виде гематоксилин представляет собой бесцветное кристаллическое твердое вещество. [7] [17] хотя коммерческие образцы обычно имеют цвет от светлого до темно-коричневого в зависимости от уровня присутствующих примесей. [2] [18]

Экстракция и очистка

[ редактировать ]
Щепки из бревен ( Haematoxylum Campechianum )

гематоксилин Синтезирован . [19] [20] хотя никогда в коммерчески жизнеспособных количествах. [14] [21] Исторически древесина экспортировалась, а гематоксилин добывался в Европе. В последнее время добыча осуществляется ближе к месту заготовки бревна. [18] Экстракция гематоксилина из бревен в промышленных масштабах осуществлялась «французским способом» путем кипячения древесной щепы или «американским процессом» с паром и давлением. [9] [22] После извлечения краситель можно продавать в виде жидкого концентрата или высушивать и продавать в кристаллической форме. [9] используется вода, эфир или спирт В современных методах производства в качестве растворителя , после чего экстракты могут быть дополнительно очищены до необходимого уровня чистоты. [18]

Коммерческий продукт может варьироваться от партии к партии и у разных производителей. [18] как по уровню примесей, так и по соотношению гематоксилина к гематеину. [23] [2] [24] При гистологическом использовании эта изменчивость может влиять на взаимодействие красителей с образцами биологических тканей и поэтому вызывает беспокойство у гистологов и патологов . [23] [2] [18] Гематоксилин, как и другие биологические красители, может быть сертифицирован Комиссией по биологическим пятнам , что означает, что конкретная партия красителей работает в стандартизированном тесте, хотя в этом не указывается фактическая чистота красителя. [23]

Использование в качестве гистологического пятна

[ редактировать ]
Окрашивание гематоксилином сверху показано как «базофильное», что видно при двойном окрашивании гематоксилином и эозином (H&E) .

Окрашивание гематоксилином обычно сопровождается (или докрашивается) другим гистологическим красителем, эозином . [10] [11] [1] В сочетании эта процедура окрашивания известна как окрашивание H&E и является одной из наиболее часто используемых комбинаций в гистологии . [1] [12] [7] [14] Гематоксилин также является компонентом окраски Папаниколау (или окраски PAP), которая широко используется при исследовании цитологических образцов, особенно в тесте PAP, используемом для выявления рака шейки матки . [14] [1]

В основном используемый в качестве ядерного красителя (для окрашивания ядра клетки), гематоксилин также окрашивает шероховатую эндоплазматическую сеть , рибосомы , коллаген , миелин , эластические волокна и кислые муцины . [10] Гематоксилин сам по себе не является эффективным красителем, но при окислении до гематеина и в сочетании с протравой окрашивается хроматин в ядрах клеток от темно-синего до черного цвета. [1] [7] [25] [10] Цвет и специфичность пятен гематоксилина контролируются химической природой и количеством используемой протравы, а также pH окрашивающего раствора, поэтому были разработаны различные составы гематоксилина. [1] [10] [15]

Составы пятен

[ редактировать ]
Раствор гематоксилина для окраски предметных стекол.

Составы красителей гематоксилина можно широко классифицировать в зависимости от того, как гематоксилин окисляется (или созревает ), а также по выбору используемой протравы. [1] Составы красителей гематоксилина могут либо естественным образом окисляться под воздействием воздуха и солнечного света, либо, что чаще всего, особенно в коммерчески приготовленных растворах, [7] химически окисляется йодатом натрия . [1] [26] [11] Обычно окислителя добавляют ровно столько, чтобы превратить половину гематоксилина в гематеин, что позволяет остатку естественным образом окислиться во время использования. Это продлевает срок службы окрашивающего раствора, поскольку образуется больше гематеина, в то время как некоторая часть гематеина дополнительно окисляется до оксигематеина. [13] [27] [11] Из солей металлов, используемых в качестве протравителей, алюминий . наиболее распространенным является [11] другие протравы включают соли железа , вольфрама , молибдена и свинца . [1]

В зависимости от состава или техники окрашивания красители гематоксилином можно использовать так называемым прогрессивным способом, при котором время, в течение которого ткань остается в контакте с красящим раствором, используется для контроля интенсивности окрашивания, или регрессивным способом . , при котором ткань чрезмерно окрашивается, а излишки пятна удаляются на втором этапе процедуры. [11] [25] [1] Удаление нежелательного окрашивания или дифференциация обычно включает раствор разбавленного этанола и соляной кислоты . [11] [1] [20]

Таблица значимых составов

[ редактировать ]
Название формулы Ссылка протрава Метод окисления Типичное использование
Эрлиха Гематоксилин [26] Эрлих, 1886 г. Калийно-алюминиевые квасцы Естественный Ядерное пятно в H&E
Гематоксилин Делафилда [26] Прадден, 1855 г. Аммонийно-алюминиевые квасцы Естественный Ядерное пятно в H&E
Майера Гематоксилин [26] Майер, 1903 г. Калийные или аммонийные квасцы Йодат натрия Ядерное пятно в H&E
Гематоксилин Харриса [26] Харрис, 1900 год. [28] Калийно-алюминиевые квасцы Оксид ртути Ядерное окрашивание в H&E, также используется в классических версиях окрашивания Папаниколау. [29]
Гематоксилин Коула [1] Коул, 1943 год. [30] Калийно-алюминиевые квасцы Йод Ядерное пятно в H&E
Гематоксилин Карацци [1] Карацци, 1911 год. Калийно-алюминиевые квасцы Йодат калия Ядерное окрашивание в H&E, срочные биопсии участки
Вейгерта Гематоксилин [26] Вейгерт, 1904 г. Хлорид железа Естественный Ядерное пятно в H&E, устойчивое к кислотам
Гематоксилин Верхоева. [1] Верховев, 1908 г. Хлорид железа Йод эластические волокна , миелин [20]
Фосфорновольфрамовая кислота Мэллори Гематоксилин [1] Мэллори, 1897 г. Фосфорновольфрамовая кислота Натуральный или химический Фибрин , мышечная полосатость
Гематоксилин Гилла (I, II и III) Каллинг и др. 1985 год [11] [27] Сульфат алюминия Йодат натрия Ядерное пятно в H&E

Раннее использование в качестве гистологического пятна

[ редактировать ]

В 1758 году Георг Кристиан Райхель использовал гемотоксилин без протравы для окрашивания тканей растений. [31] [12] [32] Джон Томас Кекетт в книге 1852 года: [33] предлагает использовать «бревно» (гематоксилин) для окраски полупрозрачного материала для исследования под микроскопом . [32] [31] В 1863 году Вильгельм фон Вальдейер-Гарц применил гематоксилин к тканям животных без протравы (с ограниченным успехом). [34] и иногда считается первым, кто сделал это, [8] [12] [35] [34] хотя это не является общепринятым. [35] [8] Франц Бёмер в 1865 году опубликовал формулу гематоксилина с использованием квасцов в качестве протравы. [34] [21] [12] [8] [35] [31] а в 1891 году Пол Майер опубликовал рецептуру, использующую химический окислитель для превращения гематоксилина в гематеин. [26] [31] [12] Первое использование гематоксилина с эозином в качестве контрастного красителя, который в настоящее время является наиболее часто используемой комбинацией красителей в гистологии, было впервые предложено А. Виссовским в 1876 году. [15] [31] К началу 1900-х годов гематоксилин получил широкое распространение в качестве гистологического красителя. [12]

Дефицит и возможные альтернативы

[ редактировать ]

Во время Первой мировой войны , конец 1920-х годов, Вторая мировая война , начало 1970-х годов (лето 1973 года). [22] ), а в 2008 году возник дефицит гематоксилина из-за перебоев в его извлечении из древесины. [18] Этот дефицит побудил к поиску альтернативных ядерных пятен. [22] [18] В качестве замены было рекомендовано несколько синтетических красителей, в частности, целестиновый синий (CI 51050), [18] галлоцианин [7] [11] (CI 51030), галлеин [18] (CI 45445) и эриохром цианин R [18] [11] также называется хромоксанцианином R и солохромцианином (CI 43820). Все четыре содержат Fe(III) в качестве протравы . Альтернативой является алюминиевый комплекс окисленного бразилина , отличающийся от гематоксилина только одной гидроксильной группой. Замена гематоксилина при окрашивании H&E также не должна нарушать возможности гистологов и патологов. [14] которые потратили годы на обучение работе с предметными стеклами, окрашенными H&E, для их изучения и постановки медицинских диагнозов . [7] Ни одно из предложенных пятен-заменителей не получило широкого распространения. [14] [7]

Использование в качестве красителя для текстиля.

[ редактировать ]

Гематоксилин впервые использовался в качестве красителя майя и ацтеками в Центральной Америке, где растут бревенчатые деревья. [8] [9] Краситель был впервые завезен в и вскоре Европу испанцами получил широкое распространение. [9] [8] Гематоксилин использовался для получения черного, синего и пурпурного цветов на различных тканях и оставался важным промышленным красителем до появления подходящих заменителей в виде синтетических красителей . [9] Что касается синего красителя (с квасцами в качестве протравы), первоначальные результаты были не такими светостойкими, как те, которые были получены с использованием индиго . [7] [9] В ответ на эту кажущуюся неполноценность качества синего цвета, полученного с помощью гематоксилина, его использование для окраски тканей было запрещено в Англии с 1581 по 1662 год. [8] [9] После появления в конце 19 века синтетических черных красителей гематоксилин впервые был заменен красителем для хлопка. [9] В немецком трактате 1902 года о крашении текстиля отмечается: «...бревна при крашении хлопка в черный цвет значительно пострадали от конкуренции с анилиновым черным». [36] Гематоксилин оставался важным черным красителем (с использованием меди или хрома в качестве протравы) для шерсти до 1920-х годов, когда стал доступен черный синтетический краситель, совместимый с шерстью. [9] Современное использование гематоксилина включает крашение шелка, кожи и шовных материалов . [7]

Используйте в качестве чернил для письма и рисования.

[ редактировать ]

Гематоксилин использовался в качестве основного компонента чернил для письма и рисования , хотя время его первого использования в качестве чернил неясно. [37] Гематоксилин также добавляли в некоторые железо-галловые чернила , которым требуется время, чтобы полностью потемнеть при нанесении на бумагу. [4] [37] В этом случае гематоксилин обеспечивал некоторый первоначальный цвет до того, как железный галл достиг полной глубины цвета. [4] [37] Уильяму Льюису в 1763 году приписывают первое использование гематоксилина в качестве добавки к железо-галловым чернилам. [6] В 1848 году Фридлиб Фердинанд Рунге изготовил некислотные гематоксилиновые чернила, используя в качестве протравы хромат калия, преимуществом которых было то, что они не разъедали стальные ручки. [6] Известно, что Ван Гог использовал гематоксилиновые чернила с хромовой протравой в ряде своих рисунков и писем. [6] [5] [37]

См. также

[ редактировать ]

Дальнейшее чтение

[ редактировать ]
  • Джоселин Х. Брюс-Грегориос, доктор медицинских наук: Гистопатологические методы, JMC Press Inc., Кесон-Сити, Филиппины, 1974.
  • Мелоан, С.М. и Пухтлер, Х. 1987. «Гематоксилин Харриса», что на самом деле написал Харрис, и механизм окрашивания гемалюмом. Журнал гистотехнологии 10: 257–261.
  • Пухтлер Х., Мелоан С.Н. и Уолдроп Ф.С. 1986. Применение современных химических концепций к пятнам металл-гематеин и бразилеин. Гистохимия 85: 353–364.
  • Файл пятен

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж к л м н тот п д р с Стивенс, Алан (1982). «Гематоксилины». В Бэнкрофте, Джон; Стивенс, Алан (ред.). Теория и практика гистологических методов (2-е изд.). Лонгман Групп Лимитед. п. 109.
  2. ^ Перейти обратно: а б с д Лилли, Ральф Дугалл (1977). Биологические пятна HJ Conn (9-е изд.). Балтимор: Уильямс и Уилкинс. стр. 692с.
  3. ^ Митчелл, А. (1908). «Английские чернила: их состав и дифференциация в почерке» . Аналитик . 33 (384): 80–85. Бибкод : 1908Ана....33...80М . дои : 10.1039/AN9083300080 .
  4. ^ Перейти обратно: а б с Барроу, Уильям (1948). «Черные чернила колониального периода» . Американский архивариус . 11 (4): 291–307. дои : 10.17723/aarc.11.4.903256p5lp2g3354 . ISSN   0360-9081 .
  5. ^ Перейти обратно: а б Сентено, Сильвия А.; Бронзато, Маддалена; Ропрет, Полонка; и др. (2016). «Состав и спектроскопические свойства исторических чернил из хромового дерева». Журнал рамановской спектроскопии . 47 (12): 1422–1428. Бибкод : 2016JRSp...47.1422C . дои : 10.1002/jrs.4938 . ISSN   0377-0486 .
  6. ^ Перейти обратно: а б с д Нивел, Йохан (2003). «24: Идентификация чернил Ван Гога для рисования и письма». В Веллекопе, Марие; Гелдоф, Мюриэл; Хендрикс, Элла; Янсен, Лео; де Тагле, Альберто (ред.). Студийная практика Ван Гога . Меркаторфондс. стр. 420–435. ISBN  9780300191875 .
  7. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж к л м Титфорд, М. (2005). «Долгая история гематоксилина». Биотехника и гистохимия . 80 (2): 73–80. дои : 10.1080/10520290500138372 . ПМИД   16195172 . S2CID   20338201 .
  8. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я Ортис-Идальго С, Пина-Овьедо С (2019). «Гематоксилин: дар Мезоамерики гистопатологии. Пало де Кампече (бревно), самое желанное сокровище пиратов и незаменимое пятно для тканей» . Int J Surg Pathol . 27 (1): 4–14. дои : 10.1177/1066896918787652 . ПМИД   30001639 .
  9. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж к Понтинг, КГ (1973). «Логвуд: интересный краситель» . Журнал европейской экономической истории . 2 (1): 109–119. ISSN   2499-8281 .
  10. ^ Перейти обратно: а б с д и Чан Дж.К. (2014). «Чудесные цвета гематоксилин-эозиновой окраски в диагностике хирургической патологии» . Int J Surg Pathol . 22 (1): 12–32. дои : 10.1177/1066896913517939 . ПМИД   24406626 . S2CID   26847314 .
  11. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж Ллевеллин Б.Д. (2009). «Ядерное окрашивание квасцовым гематоксилином» . Биотех Гистохим . 84 (4): 159–77. дои : 10.1080/10520290903052899 . ПМИД   19579146 . S2CID   205713596 .
  12. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г Смит С. (2006). «Наш долг перед бревном: история гематоксилина» . MLO Med Lab Obs . 38 (5): 18, 20–2. ПМИД   16761865 .
  13. ^ Перейти обратно: а б Кирнан, Дж.А. (2006). «Красители и другие колоранты в микротехнике и биомедицинских исследованиях» . Технология окраски . 122 (1): 1–21. дои : 10.1111/j.1478-4408.2006.00009.x . ISSN   1472-3581 .
  14. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г Дапсон Р.В., Хоробин Р.В. (2009). «Красители с точки зрения двадцать первого века» . Биотех Гистохим . 84 (4): 135–7. дои : 10.1080/10520290902908802 . ПМИД   19384743 . S2CID   28563610 .
  15. ^ Перейти обратно: а б с Титфорд, Майкл (2009). «Прогресс в развитии микроскопических методов диагностики патологии» . Журнал гистотехнологии . 32 (1): 9–19. дои : 10.1179/his.2009.32.1.9 . ISSN   0147-8885 . S2CID   26801839 .
  16. ^ Кар, Барт; Ловелл, Скотт; Субрамони, Ананд (1998). «Прогресс экстракта бревен». Хиральность . 10 (1–2): 66–77. дои : 10.1002/чир.12 .
  17. ^ Беттингер С., Циммерманн Х.В. (1991). «Новые исследования гематоксилина, гематеина и комплексов гематеин-алюминий. II. Комплексы гематеин-алюминий и окрашивание гемалюмом» . Гистохимия . 96 (3): 215–28. дои : 10.1007/BF00271540 . ПМИД   1717413 . S2CID   23504301 .
  18. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж Дапсон Р., Хоробин Р.В., Кирнан Дж. (2010). «Нехватка гематоксилина: их причины и продолжительность, а также другие красители, которые могут заменить гемалум при рутинном окрашивании гематоксилином и эозином» . Биотех Гистохим . 85 (1): 55–63. дои : 10.3109/10520290903048400 . ПМИД   19562570 . S2CID   7698557 .
  19. ^ Морсингх, Ф.; Робинсон, Р. (1970). «Синтез бразилина и гематоксилина». Тетраэдр . 26 (1): 281–289. дои : 10.1016/0040-4020(70)85029-3 .
  20. ^ Перейти обратно: а б с Пухтлер Х., Мелоан С.Н., Уолдроп Ф.С. (1986). «Применение современных химических концепций к пятнам металл-гематеин и бразилеин» . Гистохимия . 85 (5): 353–64. дои : 10.1007/BF00982665 . ПМИД   2430916 . S2CID   7384777 .
  21. ^ Перейти обратно: а б Кукси С. (2010). «Гематоксилин и родственные соединения - аннотированная библиография, касающаяся их происхождения, свойств, химии и некоторых применений» . Биотех Гистохим . 85 (1): 65–82. дои : 10.3109/10520290903048418 . ПМИД   19568968 . S2CID   5297820 .
  22. ^ Перейти обратно: а б с Лилли Р.Д. (1974). «Дефицит гематоксилина и наличие синтетических заменителей» . Am J Med Technol . 40 (11): 455–61. ПМИД   4139897 .
  23. ^ Перейти обратно: а б с Шульте ЭК (1991). «Стандартизация биологических красителей и красителей: подводные камни и возможности» . Гистохимия . 95 (4): 319–28. дои : 10.1007/BF00266958 . ПМИД   1708749 . S2CID   29628388 .
  24. ^ Маршалл П.Н., Хоробин Р.В. (1974). «Простая процедура анализа смесей гематоксилина и гематеина» . Пятно Технол . 49 (3): 137–42. дои : 10.3109/10520297409116964 . ПМИД   4135791 .
  25. ^ Перейти обратно: а б Кирнан Дж.А. (2018). «Затрагивает ли прогрессивное ядерное окрашивание гемалюмом (квасцовым гематоксилином) ДНК и какова природа комплекса краситель-хроматин?» . Биотех Гистохим . 93 (2): 133–148. дои : 10.1080/10520295.2017.1399466 . ПМИД   29320873 . S2CID   13481905 .
  26. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г Гейтенби, Дж.Б.; Балки, HW (1950). Vade-Mecum микротомиста (11-е изд.). Филадельфия: Компания Blackstone.
  27. ^ Перейти обратно: а б Джилл Г.В. (2010). «Жаберные гематоксилины: рассказ от первого лица» . Биотех Гистохим . 85 (1): 7–18. дои : 10.3109/10520290903048376 . ПМИД   19657780 . S2CID   207513639 .
  28. ^ Харрис, Х.Ф. (1900). «О быстром превращении гематоксилина в гематеин в реакциях окрашивания». Журнал прикладных микроскопических лабораторных методов . 3 (3): 777.
  29. ^ Гилл, Гэри В. (2013). «Пятно Папаниколау». Цитопрепарат . Основы цитопатологии. Том. 12. стр. 143–189. дои : 10.1007/978-1-4614-4933-1_10 . ISBN  978-1-4614-4932-4 . ISSN   1574-9053 .
  30. ^ Коул, Элберт К. (1943). «Исследования пятен гематоксилина». Технология окраски . 18 (3): 125–142. дои : 10.3109/10520294309105804 . ISSN   0038-9153 .
  31. ^ Перейти обратно: а б с д и Брейсгедл, Брайан (1986). История микротехники: эволюция микротома и развитие подготовки тканей (2-е изд.). Science Heritage Ltd. Линкольнвуд, Иллинойс: ISBN  978-0940095007 .
  32. ^ Перейти обратно: а б Эллисон РТ (1999). «Гематоксилин — из дерева» . Дж. Клин Патол . 52 (7): 527–8. дои : 10.1136/jcp.52.7.527 . ПМК   501496 . ПМИД   10605407 .
  33. ^ Кекетт, Джон Томас (1848). Практический трактат по использованию микроскопа . Библиотека иллюстрированных стандартных научных работ. Том. VI. Париж: Ипполит Байьер.
  34. ^ Перейти обратно: а б с Манн, Густав (1902). Физиологическая гистология, методы и теория . Кларендон Пресс. п. 488 .
  35. ^ Перейти обратно: а б с Кук ХК (1997). «Происхождение... тинкториальных методов в гистологии» . Дж. Клин Патол . 50 (9): 716–20. дои : 10.1136/jcp.50.9.716 . ПМК   500167 . ПМИД   9389971 .
  36. ^ Георг фон Георгиевич (1902). Химическая технология текстильных волокон: их происхождение, строение, подготовка, стирка, отбеливание, крашение, печатание и отделка . Скотт, Гринвуд и Ко. с. 180 .
  37. ^ Перейти обратно: а б с д Сентено, Сильвия А.; Ропрет, Полонка; Федерико, Элеонора Дель; и др. (2010). «Характеристика комплексов Al (III) с гематеином в художественных чернилах из квасцового дерева». Журнал рамановской спектроскопии . 41 (4): 445–451. Бибкод : 2010JRSp...41..445C . дои : 10.1002/jrs.2455 . ISSN   0377-0486 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Haematoxylin&oldid=1221560300"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 41464f758a19407eb83046794373d237__1714485480
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/41/37/41464f758a19407eb83046794373d237.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Haematoxylin - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)