Стрептамер
позволяющая обратимо выделять и окрашивать антигенспецифические Т - Strep Tamer — это технология , клетки. Эта технология сочетает в себе современный метод изоляции Т-клеток с технологией Strep-Tag . В принципе, Т-клетки разделяются путем установления специфического взаимодействия между интересующей Т-клеткой и молекулой , которая конъюгирована с маркером, который обеспечивает выделение. Обратимость этого взаимодействия и низкие температуры, при которых оно осуществляется, позволяют выделить и охарактеризовать функциональные Т-клетки. Поскольку Т-клетки фенотипически и функционально неотличимы от необработанных клеток, этот метод предлагает современные стратегии клинических и фундаментальных исследований Т-клеток. [ 1 ]
Классические методы исследования Т-клеток
[ редактировать ]Т-клетки играют важную роль в адаптивной иммунной системе . Они способны организовывать, регулировать и координировать сложные иммунные реакции. С функцией или неисправностью Т-клеток связан широкий спектр клинически значимых аспектов: аутоиммунные заболевания , контроль над вирусными или бактериальными патогенами , развитие рака или реакции трансплантат против хозяина. За последние годы были разработаны различные методы ( ELISpot Assay , внутриклеточное окрашивание цитокинов , анализ секреции ) для идентификации Т-клеток, но только процедуры главного комплекса гистосовместимости (MHC) позволяют идентифицировать и очищать антигенспецифические Т-клетки независимо от их происхождения. функциональное состояние.
В принципе, процедуры MHC используют рецептора Т-клеток (TCR) лиганд , который представляет собой комплекс MHC-пептид, в качестве окрашивающего зонда. MHC взаимодействует с TCR, который, в свою очередь, экспрессируется на Т-клетках. Поскольку взаимодействия TCR-MHC имеют очень слабое сродство друг к другу, мономерные комплексы MHC-эпитоп не могут обеспечить стабильное связывание. Эту проблему можно решить, используя мультимеризованные MHC-эпитопы, что увеличивает авидность связывания и, следовательно, обеспечивает стабильное связывание. Флуорохромы , конъюгированные с MHC-мультимерами, затем можно использовать для идентификации Т-клеток методом проточной цитометрии . В настоящее время молекулы MHC можно получать рекомбинантно вместе с антигенными пептидами, которые известны для быстро растущего числа заболеваний.
Технология Стрептамер
[ редактировать ]Основа стрептамера
[ редактировать ]Принцип окрашивания стрептамером сочетает в себе классический метод выделения Т-клеток с помощью MHC-мультимеров с технологией Strep-tag / Strep-Tactin . Strep -tag представляет собой короткую пептидную последовательность, которая демонстрирует умеренную аффинность связывания с биотин -связывающим сайтом мутированной молекулы стрептавидина , называемой Strep-Tactin. В технологии Streptamer молекулы Strep-Tactin мультимеризуются и образуют «основу», создавая тем самым платформу для связывания с белками, меченными стрептококком . Кроме того, основная цепь стреп-тактина имеет флуоресцентную метку, позволяющую проводить анализ методом проточной цитометрии . Инкубация слитых белков MHC-Strep-tag с основной цепью Strep-Tactin приводит к образованию MHC-мультимера, который способен к антигенспецифическому окрашиванию Т-клеток.
Обратимое окрашивание
[ редактировать ]Поскольку молекула d-биотина имеет гораздо более высокое сродство к Strep-Tactin, чем Strep-tag, она может эффективно конкурировать за сайт связывания . [ 2 ] [ 3 ] Следовательно, мультимер MHC, основанный на взаимодействии Strep-tag со Strep-Tactin, легко разрушается в присутствии относительно низких концентраций d-биотина. Без основной цепи Strep-Tactin отдельные слитые белки MHC-Strep-tag спонтанно отделяются от TCR Т-клетки из-за слабого сродства связывания (мономерные комплексы MHC-эпитоп не могут обеспечить стабильное связывание, см. Выше).
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Кнабель, М., Франц, Т.Дж., Шиманн, М., Вульф, А., Виллмоу, Б., Шмидт, Б., Бернхард, Х., Вагнер, Х. и Буш, Д. (2002) Реверсивный MHC мультимерное окрашивание для функциональной изоляции популяций Т-клеток и эффективного адоптивного переноса. Природная медицина 8 (6), 631-637.
- ^ Schmidt TGM и Skerra A, 2007. Система Strep-tag для одноэтапной очистки и высокоаффинного обнаружения или захвата белков. ПРОТОКОЛЫ ПРИРОДЫ 2, 1528–1535 гг.
- ^ "Дом" . strep-tag.com . Архивировано из оригинала 18 сентября 2004 г. Проверено 13 августа 2023 г.