буфер ТВЭ

TBE или Tris/Borate/EDTA представляет собой буферный раствор, содержащий смесь трис-основания , борной кислоты и ЭДТА .

В молекулярной биологии буферы TBE и TAE часто используются в процедурах с участием нуклеиновых кислот , наиболее распространенным из которых является электрофорез . Растворы трис -кислот являются эффективными буферами для слабоосновных условий, которые сохраняют ДНК депротонированной и растворимой в воде. ЭДТА является хелатором двухвалентных катионов , особенно магния (Mg ²⁺). Поскольку эти ионы являются необходимыми кофакторами для многих ферментов, включая примесные нуклеазы , роль ЭДТА заключается в защите нуклеиновых кислот от ферментативной деградации. Но поскольку Мг ²⁺ также является кофактором многих полезных ферментов, модифицирующих ДНК, таких как ферменты рестрикции и ДНК-полимеразы , его концентрация в буферах TBE или TAE обычно поддерживается на низком уровне (обычно около 1 мМ ).

Недавно обнаруженные заменители буферов TBE и TAE для электрофореза доступны. ^[1]

Рецепт (1 литр исходного раствора 5X)

54 г основания Трис (CAS#77-86-1, свободное основание)
27,5 г борной кислоты (CAS# 10043-35-3)
20 мл 0,5 М ЭДТА (CAS# 60-00-4) ( рН 8,0)

Отрегулируйте pH до 8,3 с помощью HCl. ^[2]

Перед использованием в электрофорезе ТВЕ можно разбавить в 1 раз, допускается также разведение в 0,5 раза. Более высокие концентрации приведут к плохим результатам из-за чрезмерного выделения тепла.

См. также

Буфер LB , литий-боратный буфер, аналогичный буфер, содержащий ионы лития вместо Триса.
Буфер TAE , аналогичный буфер, содержащий уксусную кислоту вместо борной кислоты.

Ссылки

^ Броуди-младший; Керн, SE (2004). «История и принципы проводящих сред для стандартного электрофореза ДНК» (PDF) . Анальная биохимия . 333 (1): 1–13. дои : 10.1016/j.ab.2004.05.054 . ПМИД 15351274 .
^ https://web.archive.org/web/20171107223153/https://www.eeb.ucla.edu/Faculty/Barber/Web%20Protocols/Protocol7.pdf ^{[ только URL-адрес PDF ]}

[1] Броуди-младший; Керн, SE (2004). «История и принципы проводящих сред для стандартного электрофореза ДНК» (PDF) . Анальная биохимия . 333 (1): 1–13. дои : 10.1016/j.ab.2004.05.054 . ПМИД 15351274 .

[2] ttps://web.archive.org/web/20171107223153/https://www.eeb.ucla.edu/Faculty/Barber/Web%20Protocols/Protocol7.pdf ^{[ только URL-адрес PDF ]}

[1]

[2]