Интеграция, опосредованная рестриктазами

Интеграция, опосредованная ферментом рестрикции (сокращенно REMI ), представляет собой метод интеграции ДНК (линеаризованной плазмиды ) в сайты генома, которые были созданы тем же ферментом рестрикции, который использовался для линеаризации ДНК. ^[1] Интеграция плазмиды происходит в соответствующих сайтах генома , часто путем регенерации сайтов узнавания с помощью того же фермента рестрикции, который используется для линеаризации плазмиды.

Механизм

Специфический фермент рестрикции расщепляет геномную ДНК в случайных точках и генерирует сайты узнавания. ^[2] Фрагмент ДНК, который необходимо встроить, линеаризуют с использованием того же фермента рестрикции, и смесь инъецируют в клетку с последующей успешной вставкой фрагмента ДНК. ^[3]

Приложения

Метод REMI использовался для создания генетически модифицированных организмов, включая Saccharomyces cerevisiae , Dictyostelium discoideum и Xenopus laevis . ^[1]^[4]^[5]

Геномная инженерия

REMI использовался для крупномасштабного трансгенеза эмбрионов X. laevis с целью изучения различных сигнальных путей, включая FGF и систему щитовидной железы . ^[3]^[6]

Ссылки

^ Перейти обратно: ^а ^б Шистль, Р.Х.; Питс, Т.Д. (1 сентября 1991 г.). «Интеграция фрагментов ДНК путем незаконной рекомбинации в Saccharomyces cerevisiae» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 88 (17): 7585–7589. Бибкод : 1991PNAS...88.7585S . дои : 10.1073/pnas.88.17.7585 . ISSN 0027-8424 . ПМК 52346 . ПМИД 1881899 .
^ Кесслер, К.; Манта, В. (16 августа 1990 г.). «Обзор специфичности эндонуклеаз рестрикции и метилтрансфераз модификации ДНК (издание 3)». Джин . 92 (1–2): 1–248. дои : 10.1016/0378-1119(90)90486-б . ISSN 0378-1119 . ПМИД 2172084 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Кролл, КЛ; Амайя, Э. (1 октября 1996 г.). «Трансгенные эмбрионы Xenopus, полученные после трансплантации ядер спермы, обнаруживают потребности в передаче сигналов FGF во время гаструляции». Разработка . 122 (10): 3173–3183. дои : 10.1242/dev.122.10.3173 . ISSN 0950-1991 . ПМИД 8898230 . S2CID 20349983 .
^ Куспа, А.; Лумис, ВФ (15 сентября 1992 г.). «Мечение генов развития в Dictyostelium путем интеграции плазмидной ДНК, опосредованной ферментами рестрикции» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 89 (18): 8803–8807. Бибкод : 1992PNAS...89.8803K . дои : 10.1073/pnas.89.18.8803 . ISSN 0027-8424 . ПМК 50009 . ПМИД 1326764 .
^ Воробей, Дункан Б.; Латкич, Бранко; Мохун, Тим Дж. (15 февраля 2000 г.). «Упрощенный метод получения трансгенного Xenopus» . Исследования нуклеиновых кислот . 28 (4): е12. дои : 10.1093/нар/28.4.e12 . ISSN 0305-1048 . ПМЦ 102591 . PMID 10648800 .
^ Турке, Натали; Палмье, Карима; Ле Мевель, Себастьян; Аллиот, Кэролайн; Деменикс, Барбара А. (1 ноября 2005 г.). «Быстрый физиологический протокол тестирования транскрипционных эффектов агентов, разрушающих щитовидную железу, у преметаморфических головастиков Xenopus» . Перспективы гигиены окружающей среды . 113 (11): 1588–1593. дои : 10.1289/ehp.7992 . ISSN 0091-6765 . ПМЦ 1310923 . ПМИД 16263516 .

[Schiestl_7585–7589-1] Перейти обратно: ^а ^б Шистль, Р.Х.; Питс, Т.Д. (1 сентября 1991 г.). «Интеграция фрагментов ДНК путем незаконной рекомбинации в Saccharomyces cerevisiae» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 88 (17): 7585–7589. Бибкод : 1991PNAS...88.7585S . дои : 10.1073/pnas.88.17.7585 . ISSN 0027-8424 . ПМК 52346 . ПМИД 1881899 .

[2] Кесслер, К.; Манта, В. (16 августа 1990 г.). «Обзор специфичности эндонуклеаз рестрикции и метилтрансфераз модификации ДНК (издание 3)». Джин . 92 (1–2): 1–248. дои : 10.1016/0378-1119(90)90486-б . ISSN 0378-1119 . ПМИД 2172084 .

[:0-3] Перейти обратно: ^а ^б Кролл, КЛ; Амайя, Э. (1 октября 1996 г.). «Трансгенные эмбрионы Xenopus, полученные после трансплантации ядер спермы, обнаруживают потребности в передаче сигналов FGF во время гаструляции». Разработка . 122 (10): 3173–3183. дои : 10.1242/dev.122.10.3173 . ISSN 0950-1991 . ПМИД 8898230 . S2CID 20349983 .

[4] Куспа, А.; Лумис, ВФ (15 сентября 1992 г.). «Мечение генов развития в Dictyostelium путем интеграции плазмидной ДНК, опосредованной ферментами рестрикции» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 89 (18): 8803–8807. Бибкод : 1992PNAS...89.8803K . дои : 10.1073/pnas.89.18.8803 . ISSN 0027-8424 . ПМК 50009 . ПМИД 1326764 .

[5] Воробей, Дункан Б.; Латкич, Бранко; Мохун, Тим Дж. (15 февраля 2000 г.). «Упрощенный метод получения трансгенного Xenopus» . Исследования нуклеиновых кислот . 28 (4): е12. дои : 10.1093/нар/28.4.e12 . ISSN 0305-1048 . ПМЦ 102591 . PMID 10648800 .

[6] Турке, Натали; Палмье, Карима; Ле Мевель, Себастьян; Аллиот, Кэролайн; Деменикс, Барбара А. (1 ноября 2005 г.). «Быстрый физиологический протокол тестирования транскрипционных эффектов агентов, разрушающих щитовидную железу, у преметаморфических головастиков Xenopus» . Перспективы гигиены окружающей среды . 113 (11): 1588–1593. дои : 10.1289/ehp.7992 . ISSN 0091-6765 . ПМЦ 1310923 . ПМИД 16263516 .

[1]

[2]

[3]

[4]

[5]

[6]