Супероптимальный бульон

Супероптимальный бульон ( среда SOB ) представляет собой богатую питательными веществами бактерий среду для роста , используемую для микробиологического культивирования , как правило, Escherichia coli . Этот богатый питательными веществами микробный бульон содержит пептиды , аминокислоты, водорастворимые витамины и глюкозу в составе с низким содержанием соли. Она была разработана Дугласом Ханаханом в 1983 году и представляет собой модифицированную версию широко используемой среды LB ( лизогенный бульон ). Рост E. coli в среде SOB или SOC приводит к более высокой трансформации эффективности плазмид . ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]} Среду SOC также можно использовать для регенерации штаммов Klebsiella oxytoca для повышения эффективности трансформации.

Супероптимальный бульон с катаболитной репрессией ( SOC ) представляет собой SOB с добавлением глюкозы . ^{[ 3 ]}

Состав

(Цифры в скобках указывают массы, необходимые для создания 1 литра среды)

ПОД

2% w/v tryptone (20 g)
0,5% мас./об. Дрожжевой экстракт (5 г)
8,56 мМ NaCl (0,5 г) или 10 мМ NaCl (0,584 г)
2,5 мМ KCl (0,186 г)
_дд H ₂ O до 1000 мл ^{[ 4 ]}
10 мМ MgCl ₂ (безводный: 0,952 г; гексагидрат: 2,033 г) И 10 мМ MgSO ₄ (безводный: 1,204 г; гептагидрат: 2,465 г) ^{[ 2 ]}

СОЦ

Помимо содержимого SOB, SOC также содержит 20 мМ глюкозы (3,603 г).

Альтернативно, SOB и SOC можно приготовить путем добавления небольших количеств концентрированных растворов хлорида магния и глюкозы к заранее приготовленному SOB.

регулировка pH

Для достижения максимальной эффективности pH среды SOB/SOC следует довести до 7,0 путем добавления концентрированного гидроксида натрия . ^{[ 3 ]} В оригинальной литературе указано, что pH конечной среды должен составлять от 6,8 до 7,0.

Стерилизация

Наконец, среду SOB следует автоклавировать при температуре 121 °C для обеспечения стерильности . Компоненты среды SOC не следует автоклавировать вместе, поскольку высокая температура может вызвать реакцию глюкозы с триптическим пептидами (см. Реакцию Майяра ), что поставит под угрозу качество. Растворы добавок SOB и магния и глюкозы можно автоклавировать отдельно и затем смешивать до конечной концентрации. Полный SOC можно стерилизовать фильтрованием через фильтр с размером пор 0,22 мкм.

Ссылки

^ Ханахан, Д. (1983). «Исследования по трансформации Escherichia coli плазмидами». Журнал молекулярной биологии . 166 (4): 557–580. дои : 10.1016/S0022-2836(83)80284-8 . ПМИД 6345791 .
^ Jump up to: ^а ^б СОК Средний
^ Jump up to: ^а ^б http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/10626more1.html ^{[ мертвая ссылка ]}
^ Среда SOC

[1] Ханахан, Д. (1983). «Исследования по трансформации Escherichia coli плазмидами». Журнал молекулярной биологии . 166 (4): 557–580. дои : 10.1016/S0022-2836(83)80284-8 . ПМИД 6345791 .

[SA-2] Jump up to: ^а ^б СОК Средний

[protocol-online.org-3] Jump up to: ^а ^б http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/10626more1.html ^{[ мертвая ссылка ]}

[4] Среда SOC

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]