Диэтиламиноэтилцеллюлоза
Диэтиламиноэтил целлюлоза ( DEAE-C ) представляет собой положительно заряженную смолу, используемую в ионообменной хроматографии , тип колоночной хроматографии , для разделения и очистки белков и нуклеиновых кислот. Гелевые шарики дериватизируются диэтиламиноэтанолом ( DEAE ) и блокируют отрицательно заряженные белки или нуклеиновые кислоты в матрицу. Белки высвобождаются из смолы, увеличивая концентрацию соли растворителя или изменяя pH раствора, чтобы изменить заряд на белке.
Подготовка
[ редактировать ]DEAE-C синтезируется катализируемой щелочкой реакцией целлюлозы (полученной из хлопчатобумажной ткани ) с 2-хлортриитиламином, проиллюстрированный следующим образом: [ 1 ]
Типы
[ редактировать ]Общие смолы
[ редактировать ]DEAE-C обычно коммерчески доступен в виде DE52 и DE53. [ 2 ] Эти смолы подготовлены preswollen [ 3 ] Хотя целлюлозные обменчики наполняются в сильной основной среде, чтобы увеличить доступ к сайтам связывания. [ 4 ]
DE52 имеет PKA 11,5. [ Цитация необходима ] Буферный диапазон для диетаноламина составляет 8,4-8,8, хотя диапазон для DEAE-C варьируется между производителями. [ 5 ]
Богиня-D
[ редактировать ]Deae- dextran (DEAE-D) является положительно заряженным производным декстрана, которое может использоваться для выработки вакцин , генной терапии , стабилизации белка, дислипидемии профилактики , флокуляционных агентов и многих других применений. [ 6 ] DEAE-D также используется для трансфекции клеток животных иностранной ДНК. Он добавляется в раствор, содержащий ДНК, предназначенную для трансфекции. Он связывает и взаимодействует с отрицательно заряженными молекулами ДНК и через неизвестный механизм приводит к поглощению нуклеиновых кислот клеткой. Эта процедура высоко подходит для переходной трансфекции, используемой для различных исследований молекулярной биологии . [ 7 ]
Другие производные
[ редактировать ]DEAE-SEPHAROSE , DEAE-650 и DEAE- SEPHADEX обычно используются в хроматографии.
Ионообменная хроматография
[ редактировать ]DEAE-C-слабый анионовый обменник. Этот обмен используется для разделения белков, которые имеют слабые разные обвинения. Как и все анионные обменники, смола несет положительный заряд, который положительно взаимодействует с отрицательными зарядами. Положительный заряд целлюлозы DEAE связан с протонированной группой амина. Чтобы гарантировать, что смола протонирована и положительно заряжена, хроматография должна быть выполнена, по крайней мере, 2 единицы PH ниже PKA группы амина, 10. Сила связи между смолой и белком сильно зависит от диапазона pH в колонна и ИП белка, представляющего интерес. Смола является слабым обменником, потому что она частично ионизируется по большинству значений pH, а эффективное разделение с хроматографией DEAE-C требует специфического узкого диапазона pH. [ 8 ]
Целлюлоза, декстран, агароза и другие нерастворимые комплексы не затронуты, потому что они составляют инертные матрицы, поэтому они так часто дериватизируются сильными и слабыми катионными и анионными обменниками в хроматографии. Граны DEAE-C имеют диэтиламиноэтиловые цепи, ковалентно связанные с атомами кислорода на D-глюкозы субъединицах целлюлозы .
Смотрите также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Руссо, Рональд В.; Феррелл, Джеймс К.; Рирдон, Роберт Ф. (1984-06-01). «Синтез диэтиламиноэтил целлюлозы на хлопковой ткани». Промышленная и инженерная химия исследования продуктов и разработка . 23 (2): 250–252. doi : 10.1021/i300014a015 . ISSN 0196-4321 .
- ^ «Whatman® Anion Exchange Cellulose DE52» . Сигма-Альдрич . Получено 11 мая 2016 года .
- ^ Reuveny, S.; Silberstein, L.; Шахар, А.; Freeman, E.; Мизрахи А. (февраль 1982 г.). «Микроасылки из целлюлозы DE-52 и DE-53: I. Рост первичных и установленных якорных клеток». In vitro . 18 (2): 92–98. JSTOR 20170418 .
- ^ Петерсон, Элберт А.; Соберный, Герберт А. (1956). «Хроматография белков. И. Адсорбенты ионо обмена целлюлозы». Журнал Американского химического общества . 78 (4): 751–755. doi : 10.1021/ja01585a016 . ISSN 0002-7863 .
- ^ «DEAE и CM Bio-Gel ® A Ионообменной инструкции по руководству по обменным гелям» (PDF) . Био-рад . Получено 11 мая 2016 года .
- ^ «DEAE-DEXTRAN» (PDF) . GE Life Sciences . Amersham Biosciences. Архивировано из оригинала (PDF) 11 июня 2016 года . Получено 11 мая 2016 года .
- ^ Гулик, Тод (2003). «Трансфекция с использованием deae-dextran». Текущие протоколы в клеточной биологии . 19 : 20.4.1–20.4.10. doi : 10.1002/0471143030.cb2004S19 . PMID 18228428 .
- ^ Ninfa, Александр (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Хобокен, Нью -Джерси: Джон Уайли. ISBN 978-0-470-08766-4 .