✖


Jump to content

Трансфекция

Трансфекция — это процесс преднамеренного введения обнаженных или очищенных нуклеиновых кислот в эукариотические клетки . [1] [2] Это может также относиться к другим методам и типам клеток, хотя часто предпочтительны другие термины: « трансформация невирусной ДНК » обычно используется для описания переноса в бактериях клетках неживотных и эукариотических , включая растительные клетки. В клетках животных термин «трансфекция» является предпочтительным, поскольку трансформация также используется для обозначения прогрессирования в раковое состояние ( канцерогенез этих клеток ). Трансдукцию часто используют для описания вирусопосредованного переноса генов в эукариотические клетки. [2] [3]

Слово «трансфекция» представляет собой сочетание слов «транс-» и «инфекция» . Генетический материал (такой как сверхспиральная плазмидная ДНК или конструкции siРНК ) может быть трансфицирован. Трансфекция клеток животных обычно включает открытие временных пор или «отверстий» в клеточной мембране для обеспечения поглощения материала. Трансфекцию можно осуществлять с использованием фосфата кальция (т.е. трикальцийфосфата ), электропорации , сжатия клеток или смешивания катионного липида с материалом для получения липосом, которые сливаются с клеточной мембраной и откладывают свой груз внутри.

Трансфекция может привести к неожиданной морфологии и аномалиям в клетках-мишенях.

Терминология [ править ]

Значение этого термина изменилось. [4] Первоначальное значение трансфекции было «заражение путем трансформации», т.е. введение генетического материала, ДНК или РНК из прокариот вируса, инфицирующего , или бактериофага в клетки, что приводит к инфекции. При работе с бактериальными и архейными клетками трансфекция сохраняет свое первоначальное значение как частный случай трансформации. Поскольку термин «трансформация» имел другой смысл в биологии клеток животных (генетическое изменение, позволяющее длительное размножение в культуре или приобретение свойств, типичных для раковых клеток), термин «трансфекция» приобрел для клеток животных свое нынешнее значение изменения в клетке. свойства, обусловленные введением ДНК. [ нужна ссылка ]

Методы [ править ]

Существуют различные методы введения чужеродной ДНК в эукариотическую клетку : некоторые основаны на физической обработке (электропорация, сжатие клеток, наночастицы , магнитофекция); другие полагаются на химические материалы или биологические частицы (вирусы), которые используются в качестве носителей. Существует множество различных методов доставки генов, разработанных для различных типов клеток и тканей, от бактерий до млекопитающих. В целом методы можно разделить на три категории: физические, химические и биологические. [5]

Физические методы включают электропорацию , микроинъекцию , генную пушку , прокалывание , гидростатическое давление , непрерывную инфузию и обработку ультразвуком. Химические методы включают такие методы, как липофекция , которая представляет собой липидопосредованный процесс трансфекции ДНК с использованием липосомальных векторов. Сюда же можно отнести использование полимерных носителей генов (полипплексов). [6] Биологическая трансфекция обычно осуществляется с помощью вирусов , использующих способность вируса вводить свою ДНК внутрь клетки-хозяина. Ген, предназначенный для доставки, упаковывается в вирусную частицу с дефицитом репликации. Вирусы, используемые на сегодняшний день, включают ретровирус , лентивирус , аденовирус , аденоассоциированный вирус и вирус простого герпеса . [ нужна ссылка ]

Физические методы [ править ]

Электропоратор с прямоугольными и экспоненциальными волнами затухания для применений in vitro, in vivo, прилипших клеток и 96-луночной электропорации. Изготовлено компанией BTX Harvard Apparatus, Холлистон, Массачусетс, США.

Физические методы являются концептуально самыми простыми: они используют некоторые физические средства для введения трансфицированного материала в ядро ​​клетки-мишени. Наиболее широко используемый физический метод — электропорация , при которой короткие электрические импульсы разрушают клеточную мембрану, позволяя трансфицированным нуклеиновым кислотам проникнуть в клетку. [5] В других физических методах используются различные средства для проделывания отверстий в клеточной мембране: при сонопорации используется ультразвук высокой интенсивности (в основном это связано с кавитацией пузырьков газа, взаимодействующих с близлежащими клеточными мембранами), при оптической трансфекции используется высокофокусированный лазер для формирования частиц диаметром около 1 мкм. дыра. [7]

В нескольких методах используются инструменты, которые вводят нуклеиновую кислоту в клетку, а именно: микроинъекция нуклеиновой кислоты тонкой иглой; [5] биолистическая доставка частиц , при которой нуклеиновая кислота прикрепляется к частицам тяжелых металлов (обычно золота) и продвигается в клетки на высокой скорости; [8] и магнитофекция , при которой нуклеиновые кислоты прикрепляются к магнитным частицам оксида железа и направляются в клетки-мишени с помощью магнитов. [8]

Гидродинамическая доставка — это метод, используемый на мышах и крысах, при котором нуклеиновые кислоты можно доставить в печень путем инъекции относительно большого объема в кровь менее чем за 10 секунд; Благодаря этой процедуре почти вся ДНК экспрессируется в печени. [9]

Химические методы [ править ]

Химическую трансфекцию можно разделить на несколько видов: циклодекстриновую , [10] полимеры, [11] липосомы или наночастицы [12] (с химической или вирусной функционализацией или без нее. См. ниже).

  • В одном из самых дешевых методов используется фосфат кальция , первоначально открытый Ф. Л. Грэмом и А. Дж. ван дер Эбом в 1973 году. [13] (см. также [14] ). HEPES -буферный солевой раствор (HeBS), содержащий ионы фосфата, объединяют с раствором хлорида кальция , содержащим ДНК, подлежащую трансфекции. Когда они объединяются, образуется мелкий осадок положительно заряженного кальция и отрицательно заряженного фосфата, связывающий ДНК, подлежащую трансфекции, на его поверхности. Затем суспензию осадка добавляют к клеткам, подлежащим трансфекции (обычно культура клеток, выращенная в монослое). В результате не совсем понятного процесса клетки поглощают часть осадка, а вместе с ним и ДНК. Этот процесс был предпочтительным методом идентификации многих онкогенов. [15]
  • Другой метод — использование катионных полимеров , таких как DEAE-декстран или полиэтиленимин (PEI). Отрицательно заряженная ДНК связывается с поликатионом , и комплекс поглощается клеткой посредством эндоцитоза .
  • Липофекция (или трансфекция липосом ) — это метод, используемый для инъекции генетического материала в клетку с помощью липосом , которые представляют собой пузырьки , которые могут легко сливаться с клеточной мембраной, поскольку они оба состоят из бислоя фосфолипидов . [16] В липофекции обычно используются положительно заряженные ( катионные ) липиды ( катионные липосомы или смеси) для образования агрегата с отрицательно заряженным ( анионным ) генетическим материалом. [17] Эта технология трансфекции выполняет те же задачи, что и другие биохимические процедуры с использованием полимеров, DEAE-декстрана , фосфата кальция и электропорации . Эффективность липофекции можно повысить, обрабатывая трансфицированные клетки мягким тепловым шоком . [18]
  • Fugene представляет собой серию широко используемых запатентованных нелипосомальных реагентов для трансфекции, способных напрямую трансфицировать самые разнообразные клетки с высокой эффективностью и низкой токсичностью. [19] [20] [21] [22]
  • Дендример — это класс сильно разветвленных молекул, основанных на различных строительных блоках и синтезированных конвергентным или дивергентным методом. Эти дендримеры связывают нуклеиновые кислоты с образованием дендриплексов, которые затем проникают в клетки. [23] [24]

Вирусные методы [ править ]

ДНК также можно вводить в клетки, используя вирусы в качестве носителя . В таких случаях метод называется трансдукцией , а клетки называются трансдуцированными. Аденовирусные векторы могут быть полезны для методов вирусной трансфекции, поскольку они могут переносить гены в самые разные клетки человека и имеют высокую скорость переноса. [2] Лентивирусные векторы также полезны благодаря их способности трансдуцировать клетки, в настоящее время не находящиеся в митозе.

Слияние протопластов — это метод, при котором трансформированные бактериальные клетки обрабатываются лизоцимом с целью удаления клеточной стенки. После этого используются слияющие агенты (например, вирус Сендай, ПЭГ, электропорация) для слияния протопласта, несущего интересующий ген, с клеткой-мишенью-реципиентом. Основным недостатком этого метода является то, что бактериальные компоненты также неспецифично вводятся в клетку-мишень.

и временная трансфекция Стабильная

Стабильная и временная трансфекция различаются по долгосрочному воздействию на клетку; Стабильно трансфицированная клетка будет непрерывно экспрессировать трансфицированную ДНК и передавать ее дочерним клеткам , тогда как временно трансфицированная клетка будет экспрессировать трансфицированную ДНК в течение короткого периода времени и не передавать ее дочерним клеткам.

Для некоторых применений трансфекции достаточно, чтобы трансфицированный генетический материал экспрессировался лишь временно. Поскольку ДНК, введенная в процессе трансфекции, обычно не интегрируется в ядерный геном, чужеродная ДНК будет разбавлена ​​в результате митоза или деградирована. [5] Клеточные линии, экспрессирующие ядерный антиген 1 вируса Эпштейна-Барра (EBV) (EBNA1) или антиген большого T SV40, позволяют эписомальную амплификацию плазмид, содержащих начала репликации вируса EBV (293E) или SV40 (293T), значительно снижая скорость разбавление. [25]

Если желательно, чтобы трансфицированный ген действительно оставался в геноме клетки и ее дочерних клеток, должна произойти стабильная трансфекция. Для этого маркерный ген котрансфицируется, что дает клетке определенное преимущество, такое как устойчивость к определенному токсину . Некоторые (очень немногие) трансфицированные клетки случайно интегрируют чужеродный генетический материал в свой геном. Если затем токсин добавить в культуру клеток, только те немногие клетки, в геном которых интегрирован маркерный ген, смогут пролиферировать , в то время как другие клетки погибнут. После применения этого селективного стресса (давления отбора) в течение некоторого времени остаются только клетки со стабильной трансфекцией, которые можно культивировать дальше. [26]

Обычными агентами для выбора стабильной трансфекции являются:

РНК Трансфекция ​ ​

РНК также можно трансфицировать в клетки для временной экспрессии закодированного ею белка или для изучения распада РНК кинетики . Трансфекция РНК часто используется в первичных клетках, которые не делятся.

siRNAs также можно трансфицировать для достижения подавления РНК (т.е. потери РНК и белка из целевого гена). Это стало основным применением в исследованиях по « нокдауну » интересующих белков (например, эндотелина-1). [27] ) с потенциальным применением в генной терапии. Ограничением метода подавления является токсичность трансфекции для клеток и потенциальные «нецелевые» эффекты на экспрессию других генов/белков.

РНК можно очистить из клеток после лизиса или синтезировать из свободных нуклеотидов химически или ферментативно с использованием РНК-полимеразы для транскрипции матрицы ДНК . Как и ДНК, РНК можно доставлять в клетки различными способами, включая микроинъекцию , электропорацию и липид-опосредованную трансфекцию . Если РНК кодирует белок , трансфицированные клетки могут транслировать РНК в кодируемый белок. [28] Если РНК является регуляторной РНК (например, микроРНК ), РНК может вызывать другие изменения в клетке (например, нокдаун, опосредованный РНКи ).

Инкапсулирование молекулы РНК в липидные наночастицы стало прорывом в производстве жизнеспособных РНК-вакцин , разрешив ряд ключевых технических барьеров при доставке молекулы РНК в клетку человека. [29] [30]

Молекулы РНК короче примерно 25 нуклеотидов (нуклеотиды) в значительной степени ускользают от обнаружения врожденной иммунной системой , которая активируется более длинными молекулами РНК. Большинство клеток организма экспрессируют белки врожденной иммунной системы, и при воздействии экзогенных длинных молекул РНК эти белки инициируют сигнальные каскады, которые приводят к воспалению . Это воспаление повышает чувствительность подвергшихся воздействию клеток и близлежащих клеток к последующему воздействию. В результате, хотя клетку можно неоднократно трансфицировать короткой РНК с небольшими неспецифическими эффектами, повторная трансфекция клеток даже небольшим количеством длинной РНК может привести к гибели клетки, если не будут приняты меры по подавлению или обходу врожденной иммунной системы (см. «Трансфекция длинной РНК» ниже).

Трансфекция короткой РНК обычно используется в биологических исследованиях для подавления экспрессии интересующего белка (с использованием миРНК ) или для экспрессии или блокирования активности микроРНК ( с использованием короткой РНК, которая действует независимо от клеточного механизма РНКи и, следовательно, не называемые siRNA). Хотя также можно использовать векторы на основе ДНК ( вирусы , плазмиды ), которые кодируют короткую молекулу РНК, трансфекция короткой РНК не подвергает риску модификацию клеточной ДНК, что привело к развитию коротких РНК как нового класса макромолекулярные препараты . [31]

Трансфекция длинной РНК — это процесс преднамеренного введения молекул РНК длиной более 25 нуклеотидов в живые клетки. Различают трансфекцию коротких и длинных РНК, поскольку экзогенные молекулы длинных РНК вызывают врожденный иммунный ответ в клетках, который может вызывать различные неспецифические эффекты, включая блокировку трансляции , остановку клеточного цикла и апоптоз .

длинные РНК экзогенные и Эндогенные

Врожденная иммунная система эволюционировала для защиты от инфекции путем обнаружения молекулярных структур, связанных с патогенами (PAMP), и запуска сложного набора реакций, известных под общим названием « воспаление ». Многие клетки экспрессируют специфические рецепторы распознавания образов (PRR) для экзогенной РНК, включая толл-подобные рецепторы 3,7,8 ( TLR3 , TLR7 , TLR8 ), [32] [33] [34] [35] РНК- хеликаза RIG1 (RARRES3) , [36] протеинкиназа R (PKR, она же EIF2AK2), [37] [38] члены семейства белков олигоаденилатсинтетазы ( OAS1 , OAS2 , OAS3 ) и другие. Все эти белки могут специфически связываться с экзогенными молекулами РНК и запускать иммунный ответ.Конкретные химические, структурные или другие характеристики длинных молекул РНК, необходимые для распознавания PRR, остаются в значительной степени неизвестными, несмотря на интенсивные исследования. В любой момент времени типичная клетка млекопитающего может содержать несколько сотен тысяч мРНК и других регуляторных длинных молекул РНК. Как клетки отличают экзогенную длинную РНК от большого количества эндогенной длинной РНК, является важным открытым вопросом в клеточной биологии . В нескольких сообщениях предполагается, что фосфорилирование 5'-конца длинной молекулы РНК может влиять на ее иммуногенность , в частности, что 5'-трифосфат РНК, которая может вырабатываться во время вирусной инфекции, более иммуногенна, чем 5'-дифосфат РНК, 5' -монофосфатная РНК или РНК, не содержащая 5'-фосфата. [39] [40] [41] [42] [43] [44] Однако транскрибируемая in vitro (ivT) длинная РНК, содержащая 7-метилгуанозиновый кэп (присутствует в эукариотической мРНК), также обладает высокой иммуногенностью, несмотря на отсутствие 5'-фосфата. [45] предполагая, что характеристики, отличные от 5'-фосфорилирования, могут влиять на иммуногенность молекулы РНК.

Эукариотическая мРНК содержит химически модифицированные нуклеотиды, такие как N 6 -метиладенозин , 5-метилцитидин и 2'-O-метилированные нуклеотиды. Хотя в типичной молекуле мРНК присутствует лишь очень небольшое количество этих модифицированных нуклеотидов, они могут помочь предотвратить активацию мРНК врожденной иммунной системы, разрушая вторичную структуру , которая напоминает двухцепочечную РНК (дцРНК). [46] [34] тип РНК, который, как полагают, присутствует в клетках только во время вирусной инфекции.Иммуногенность длинных РНК использовалась для изучения как врожденного, так и адаптивного иммунитета .

РНК Повторная трансфекция длинной

Ингибирования только трех белков, интерферона-β , STAT2 и EIF2AK2 , достаточно, чтобы спасти фибробласты человека от гибели клеток, вызванной частой трансфекцией длинной РНК, кодирующей белок. [45] Ингибирование передачи сигналов интерферона разрушает петлю положительной обратной связи, которая обычно повышает чувствительность клеток, подвергающихся воздействию экзогенной длинной РНК. Исследователи недавно использовали этот метод для экспрессии перепрограммирующих белков в первичных фибробластах человека . [47]

См. также [ править ]

Ссылки [ править ]

  1. ^ Трансфекция Национальной медицинской библиотеки США в медицинских предметных рубриках (MeSH).
  2. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с «Трансфекция» . Руководство по протоколам и приложениям . Промега. Архивировано из оригинала 25 июня 2014 года . Проверено 25 октября 2014 г.
  3. ^ Трансдукция, генетика , Национальная медицинская библиотека США по медицинским предметным рубрикам (MeSH).
  4. ^ «Трансфекция» в Медицинском словаре Дорланда.
  5. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с д Ким Т.К., Эбервин Дж.Х. (август 2010 г.). «Трансфекция клеток млекопитающих: настоящее и будущее» . Аналитическая и биоаналитическая химия . 397 (8): 3173–8. дои : 10.1007/s00216-010-3821-6 . ПМЦ   2911531 . ПМИД   20549496 .
  6. ^ Саул Дж.М., член парламента от Линнеса, Ратнер Б.Д., Джачелли К.М., Пун Ш.Х. (ноябрь 2007 г.). «Доставка невирусных носителей генов из фибриновых каркасов со сферическими шаблонами для устойчивой экспрессии трансгена». Биоматериалы . 28 (31): 4705–16. doi : 10.1016/j.bimaterials.2007.07.026 . ПМИД   17675152 .
  7. ^ Цукакоши М., Курата С., Номия Ю. и др. (1984). «Новый метод трансфекции ДНК с помощью лазерной микролучевой хирургии клеток». Прикладная физика B: Фотофизика и лазерная химия . 35 (3): 135–140. Бибкод : 1984ApPhB..35..135T . дои : 10.1007/BF00697702 . S2CID   123250337 .
  8. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Мейер-Умберт С., Гай Р.Х. (апрель 2005 г.). «Физические методы переноса генов: улучшение кинетики доставки генов в клетки». Adv Drug Deliv Rev. 57 (5): 733–53. дои : 10.1016/j.addr.2004.12.007 . ПМИД   15757758 .
  9. ^ Суда Т, Лю Д (2015). «Гидродинамическая доставка». Невирусные векторы для генной терапии — физические методы и медицинский перевод . Достижения генетики. Том. 89. стр. 89–111. дои : 10.1016/bs.adgen.2014.10.002 . ISBN  9780128022726 . ПМИД   25620009 .
  10. ^ Менуэль С., Фонтане С., Кларо И., Дюваль Р.Э., Диес Л., Марсура А. (декабрь 2008 г.). «Синтез и способность к комплексообразованию нового бис-(гуанидиния)-тетракис-(бета-циклодекстрина) дендримерного тетрапода как потенциальной системы доставки генов (ДНК и миРНК). Исследование клеточной трансфекции миРНК». Биоконъюгатная химия . 19 (12): 2357–62. дои : 10.1021/bc800193p . ПМИД   19053312 .
  11. ^ Фишер Д., фон Харпе А., Кунат К., Петерсен Х., Ли Й., Киссель Т. (2002). «Сополимеры этиленимина и N-(2-гидроксиэтил)-этилимина как инструменты для изучения влияния структуры полимера на физико-химические и биологические свойства комплексов ДНК». Биоконъюгатная химия . 13 (5): 1124–33. дои : 10.1021/bc025550w . ПМИД   12236795 .
  12. ^ «Реагенты для трансфекции на основе наночастиц» . Ресурс по исследованию биологической трансфекции . Трансфекция.ws. Архивировано из оригинала 21 апреля 2013 года . Проверено 30 сентября 2009 г.
  13. ^ Грэм Флорида, ван дер Эб Эй Джей (апрель 1973 г.). «Новый метод анализа инфекционности ДНК аденовируса человека 5». Вирусология . 52 (2): 456–67. дои : 10.1016/0042-6822(73)90341-3 . ПМИД   4705382 .
  14. ^ Баккетти С., Грэм Флорида (апрель 1977 г.). «Перенос гена тимидинкиназы в клетки человека с дефицитом тимидинкиназы с помощью очищенной ДНК вируса простого герпеса» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 74 (4): 1590–4. Бибкод : 1977PNAS...74.1590B . дои : 10.1073/pnas.74.4.1590 . ПМК   430836 . ПМИД   193108 .
  15. ^ Криглер М (1991). Перенос и экспрессия: Лабораторное руководство . У. Х. Фриман. стр. 96–97. ISBN  978-0-7167-7004-6 .
  16. ^ Фельгнер П.Л., Гадек Т.Р., Холм М., Роман Р., Чан Х.В., Венц М., Нортроп Дж.П., Ринголд Г.М., Даниэльсен М. (ноябрь 1987 г.). «Липофекция: высокоэффективная процедура липид-опосредованной ДНК-трансфекции» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 84 (21): 7413–7. Бибкод : 1987PNAS...84.7413F . дои : 10.1073/pnas.84.21.7413 . ПМК   299306 . ПМИД   2823261 .
  17. ^ Фельгнер Дж. Х., Кумар Р., Шридхар К. Н., Уилер С. Дж., Цай Ю. Дж., Бордер Р., Рэмси П., Мартин М., Фельгнер П. Л. (январь 1994 г.). «Улучшенная доставка генов и исследования механизмов с использованием новой серии составов катионных липидов» . Журнал биологической химии . 269 ​​(4): 2550–61. дои : 10.1016/S0021-9258(17)41980-6 . ПМИД   8300583 .
  18. ^ Пайпс Б.Л., Васанвала Ф.Х., Цанг Т.К., Чжан Т., Луо П., Харрис Д.Т. (январь 2005 г.). «Краткий тепловой шок увеличивает стабильную интеграцию липид-опосредованных трансфекций ДНК» . БиоТехники . 38 (1): 48–52. дои : 10.2144/05381bm05 . ПМИД   15679084 . [ постоянная мертвая ссылка ]
  19. ^ Якобсен Л.Б., Кэлвин С.А., Колвин К.Е., Райт М. (июнь 2004 г.). «Реагент для трансфекции FuGENE 6: бережная сила». Методы . Трансфекция клеток млекопитающих. 33 (2): 104–12. дои : 10.1016/j.ymeth.2003.11.002 . ПМИД   15121164 .
  20. ^ Хеллгрен И., Дрвота В., Пипер Р., Энокссон С., Бломберг П., Ислам К.Б., Сильвен С. (август 2000 г.). «Высокоэффективный клеточный перенос генов с использованием невирусных векторов и FuGene6: исследования in vitro и in vivo» . Клеточные и молекулярные науки о жизни . 57 (8–9): 1326–33. дои : 10.1007/PL00000769 . ПМЦ   11146917 . ПМИД   11028922 . S2CID   27916034 .
  21. ^ Лакшмипати У, Тьягараджан Б (2011). Первичные и стволовые клетки: технологии и применение переноса генов (1-е изд.). Уайли-Блэквелл. ISBN  978-0-470-61074-9 .
  22. ^ Арнольд А.С., Лапорт В., Дюмон С., Апперт-Коллин А., Эрбахер П., Купен Дж., Леви Р., Пойндрон П., Гис Дж.П. (февраль 2006 г.). «Сравнение реагентов для эффективной трансфекции первичных миобластов человека: FuGENE 6, Effectene и ExGen 500». Фундаментальная и клиническая фармакология . 20 (1): 81–9. дои : 10.1111/j.1472-8206.2005.00344.x . ПМИД   16448398 . S2CID   42585711 .
  23. ^ Сапра, Рахит; Верма, Рам П.; Маурья, Говинд П.; Дхаван, Самир; Бабу, Джиша; Харидас, В. (13 ноября 2019 г.). «Конструктор пептидов и белковых дендримеров: перекрестный анализ». Химические обзоры . 119 (21): 11391–11441. doi : 10.1021/acs.chemrev.9b00153 . ISSN   0009-2665 . ПМИД   31556597 . S2CID   203435702 .
  24. ^ Хейтц, Марк; Явор, Саша; Дарбре, Тамис; Реймонд, Жан-Луи (21 августа 2019 г.). «Стереоселективные pH-чувствительные пептидные дендримеры для трансфекции миРНК». Биоконъюгатная химия . 30 (8): 2165–2182. doi : 10.1021/acs.bioconjchem.9b00403 . ISSN   1043-1802 . ПМИД   31398014 . S2CID   199519310 .
  25. ^ Дюрошер Ю., Перрет С., Камен А. (январь 2002 г.). «Высокоуровневое и высокопроизводительное производство рекомбинантного белка путем временной трансфекции суспензионно растущих клеток человека 293-EBNA1» . Исследования нуклеиновых кислот . 30 (2): 9д–9. дои : 10.1093/нар/30.2.e9 . ПМК   99848 . ПМИД   11788735 .
  26. ^ Фанелли А (2016). «Наука создания стабильных клеточных линий» . Проверено 23 декабря 2017 г.
  27. ^ Мауджи И.А., Марсден, Пенсильвания (июнь 2006 г.). «Трансфекция РНК — универсальный инструмент для изучения посттранскрипционной регуляции эндотелина-1» . Экспериментальная биология и медицина . 231 (6): 704–708. doi : 10.3181/00379727-231-2310704 (неактивен 31 января 2024 г.). ПМИД   16740984 . {{cite journal}}: CS1 maint: DOI неактивен по состоянию на январь 2024 г. ( ссылка )
  28. ^ Херб М., Фарид А., Глушко А., Кренке М., Шрамм М. (ноябрь 2019 г.). «Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов транскрибируемой in vitro мРНК» . Журнал визуализированных экспериментов (153). дои : 10.3791/60143 . ПМИД   31762462 .
  29. ^ Куни, Элизабет (1 декабря 2020 г.). «Как нанотехнологии помогают мРНК-вакцинам против Covid-19 работать» . Стат . Проверено 3 декабря 2020 г.
  30. ^ Фоли, Кэтрин Эллен (22 декабря 2020 г.). «Первые вакцины против Covid-19 навсегда изменили биотехнологии» . Кварц . Кварц Медиа . Проверено 11 января 2021 г.
  31. ^ Тэнси Б. (11 августа 2006 г.). «Лечение дегенерации желтого пятна мешает передаче сообщений РНК» . Хроника Сан-Франциско.
  32. ^ Алексопулу Л., Холт А.С., Меджитов Р., Флавелл Р.А. (2001). «Распознавание двухцепочечной РНК и активация NF-каппаB Toll-подобным рецептором 3». Природа . 413 (6857): 732–738. Бибкод : 2001Natur.413..732A . дои : 10.1038/35099560 . ПМИД   11607032 . S2CID   4346537 .
  33. ^ Карико К., Ни Х., Каподичи Дж., Ламфье М., Вайсман Д. (2004). «МРНК является эндогенным лигандом Toll-подобного рецептора 3» . J Биол Хим . 279 (13): 12542–12550. дои : 10.1074/jbc.M310175200 . ПМИД   14729660 .
  34. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Карико К., Бакштейн М., Ни Х., Вайсман Д. (2005). «Подавление распознавания РНК Toll-подобными рецепторами: влияние модификации нуклеозидов и эволюционное происхождение РНК» . Иммунитет . 23 (2): 165–175. doi : 10.1016/j.immuni.2005.06.008 . ПМИД   16111635 .
  35. ^ Диболд С.С., Кайшо Т., Хемми Х., Акира С., Рейс и Соуза С. (2004). «Врожденные противовирусные ответы посредством TLR7-опосредованного распознавания одноцепочечной РНК» . Наука . 303 (5663): 1529–1531. Бибкод : 2004Sci...303.1529D . дои : 10.1126/science.1093616 . ПМИД   14976261 . S2CID   33144196 .
  36. ^ Ёнеяма М., Кикучи М., Нацукава Т., Синобу Н., Имаидзуми Т. и др. (2004). «РНК-хеликаза RIG-I выполняет важную функцию в врожденных противовирусных ответах, индуцированных двухцепочечной РНК». Нат Иммунол . 5 (7): 730–737. дои : 10.1038/ni1087 . ПМИД   15208624 . S2CID   34876422 .
  37. ^ Дас Х.К., Дас А., Гош-Дастидар П., Ралстон Р.О., Ягмаи Б. и др. (1981). «Синтез белка в ретикулоцитах кролика. Очистка и характеристика ингибитора двухцепочечного РНК-зависимого синтеза белка из лизатов ретикулоцитов» . J Биол Хим . 256 (12): 6491–6495. дои : 10.1016/S0021-9258(19)69192-1 . ПМИД   7240221 .
  38. ^ Левин Д.Х., Петришин Р., Лондонский международный аэропорт (1981). «Характеристика очищенной двухцепочечной РНК-активируемой альфа-киназы eIF-2 из ретикулоцитов кролика» . J Биол Хим . 256 (14): 7638–7641. дои : 10.1016/S0021-9258(19)69008-3 . ПМИД   6265457 .
  39. ^ Хорнунг В., Эллегаст Дж., Ким С., Бржозка К., Юнг А. и др. (2006). «5'-трифосфатная РНК является лигандом RIG-I» . Наука . 314 (5801): 994–997. Бибкод : 2006Sci...314..964H . дои : 10.1126/science.1132505 . ПМИД   17038590 . S2CID   22436759 .
  40. ^ Сайто Т; Оуэн ДМ; Цзян Ф; Маркотриджано Дж; Гейл М. младший (2008). «Врожденный иммунитет, индуцированный зависимым от состава распознаванием RIG-I РНК вируса гепатита С» . Природа . 454 (7203): 523–527. Бибкод : 2008Natur.454..523S . дои : 10.1038/nature07106 . ПМЦ   2856441 . ПМИД   18548002 .
  41. ^ Такахаси К., Йонеяма М., Нишихори Т., Хираи Р., Кумета Х. и др. (2008). «Механизм восприятия несобственной РНК хеликазы RIG-I и активация противовирусного иммунного ответа» . Мол Клетка . 29 (4): 428–440. doi : 10.1016/j.molcel.2007.11.028 . ПМИД   18242112 .
  42. ^ Ёнеяма М., Фудзита Т. (2008). «Структурный механизм узнавания РНК RIG-I-подобными рецепторами» . Иммунитет . 29 (2): 178–181. doi : 10.1016/j.immuni.2008.07.009 . ПМИД   18701081 .
  43. ^ Шмидт А., Шверд Т., Хамм В., Хельмут Дж.К., Куи С. и др. (2009). «5'-трифосфатная РНК требует структур, спаренных оснований, для активации противовирусной передачи сигналов через RIG-I» . Proc Natl Acad Sci США . 106 (29): 12067–12072. Бибкод : 2009PNAS..10612067S . дои : 10.1073/pnas.0900971106 . ПМЦ   2705279 . ПМИД   19574455 .
  44. ^ Шли М., Рот А., Хорнунг В., Хагманн К.А., Вимменауэр В. и др. (2009). «Для распознавания 5'-трифосфата хеликазой RIG-I требуется короткая тупая двухцепочечная РНК, содержащаяся в ручке вируса с отрицательной цепью» . Иммунитет . 31 (1): 25–34. doi : 10.1016/j.immuni.2009.05.008 . ПМЦ   2824854 . ПМИД   19576794 .
  45. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Анхель М., Яник М.Ф. (2010). «Врожденная иммуносупрессия обеспечивает частую трансфекцию РНК, кодирующей перепрограммирующие белки» . ПЛОС ОДИН . 5 (7): е11756. Бибкод : 2010PLoSO...511756A . дои : 10.1371/journal.pone.0011756 . ПМК   2909252 . ПМИД   20668695 .
  46. ^ Херб М., Фарид А., Глушко А., Кренке М., Шрамм М. (ноябрь 2019 г.). «Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов транскрибируемой in vitro мРНК» . Журнал визуализированных экспериментов (153). дои : 10.3791/60143 . ПМИД   31762462 .
  47. ^ Трафтон А (26 июля 2010 г.). «РНК предлагает более безопасный способ перепрограммирования клеток» . Пресс-служба Массачусетского технологического института.

Дальнейшее чтение [ править ]

Внешние ссылки [ править ]

Scholia имеет профиль для трансфекции (Q1429031) .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Transfection&oldid=1230414202"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 5482b51fad85e9bddc52dc5ea50d40e6__1719060060
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/54/e6/5482b51fad85e9bddc52dc5ea50d40e6.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Transfection - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)