✖


Jump to content

Нацеливание на гены

Ген химерной мыши, нацеленный на ген окраски шерсти агути , и его потомство

Нацеливание на гены — это биотехнологический инструмент, используемый для изменения последовательности ДНК организма (следовательно, это форма редактирования генома ). ДНК Он основан на естественном механизме репарации (HDR), включая гомологичную рекомбинацию . Нацеливание на гены можно использовать для внесения изменений ДНК разного размера: от более крупных изменений ДНК, таких как вставка целых новых генов в организм, до гораздо меньших изменений в существующей ДНК, таких как изменение одной пары оснований. Нацеливание на гены основано на наличии шаблона репарации для внесения в ДНК определяемых пользователем изменений. Пользователь (обычно ученый) разрабатывает шаблон восстановления, содержащий желаемое редактирование, окруженное последовательностью ДНК, соответствующей (гомологичной) области ДНК, которую пользователь хочет отредактировать; следовательно, редактирование нацелено на конкретную область генома. Таким образом, нацеливание на гены отличается от естественной репарации, направленной на гомологию, во время которой «естественная» матрица репарации ДНК сестринской хроматиды используется для восстановления поврежденной ДНК (сестринская хроматида является второй копией гена). Изменение последовательности ДНК в организме может быть полезно как в исследовательском контексте (например, для понимания биологической роли гена), так и в биотехнологии, например, для изменения свойств организма (например, для улучшения сельскохозяйственных растений).

Методы

[ редактировать ]
дикого типа Physcomitrella и нокаутные мхи : отклонения фенотипов, индуцированные трансформантами библиотеки с разрушением генов. Растения Physcomitrella дикого типа и трансформированные растения выращивали на минимальной среде Кнопа для индукции дифференцировки и развития гаметофоров . Для каждого растения показан общий вид (верхний ряд, масштабная линейка соответствует 1 мм) и крупный план (нижний ряд, масштабная линейка равна 0,5 мм). А: гаплоидное растение мха дикого типа, полностью покрытое листовыми гаметофорами, и крупный план листа дикого типа. Б–Е, Разные мутанты. [1]

Чтобы создать генно-ориентированный организм, в его клетки необходимо ввести ДНК. Эта ДНК должна содержать все части, необходимые для завершения нацеливания на ген. Как минимум, это матрица восстановления гомологии, содержащая желаемую редактуру, фланкированную областями ДНК, гомологичными (идентичными по последовательности) целевой области (эти гомологичные области называются «плечами гомологии»). Часто репортерный ген и/или селектируемый маркер также требуется , чтобы помочь идентифицировать и выбрать клетки (или «события»), в которых действительно произошел GT. Также распространенной практикой является увеличение скорости GT путем создания двухцепочечного разрыва (DSB) в целевой области ДНК. [2] Следовательно, гены, кодирующие интересующую сайт-специфическую нуклеазу, также могут быть трансформированы вместе с матрицей репарации. Эти генетические элементы, необходимые для GT, могут быть собраны посредством обычного молекулярного клонирования в бактериях.

Методы нацеливания на гены разработаны для нескольких модельных организмов и могут различаться в зависимости от используемого вида . Чтобы нацелиться на гены мышей , ДНК встраивают в эмбриональные стволовые клетки мыши в культуре. Клетки со вставкой могут вносить вклад в ткани мыши посредством инъекции эмбриона . Наконец, химерных мышей, у которых модифицированные клетки составляют репродуктивные органы выводят . После этого шага все тело мыши создается на основе выбранной эмбриональной стволовой клетки.

Чтобы нацелиться на гены мха , ДНК инкубируют вместе со свежевыделенными протопластами и полиэтиленгликолем . Поскольку мхи являются гаплоидными организмами, [3] мха нити ( протонема ) можно напрямую проверить на предмет мишени либо путем обработки антибиотиками , либо с помощью ПЦР . Уникальная среди растений процедура обратной генетики столь же эффективна, как и у дрожжей . [4] Генное нацеливание успешно применялось к крупному рогатому скоту, овцам, свиньям и многим грибам.

Частоту нацеливания на гены можно значительно повысить за счет использования сайт-специфических эндонуклеаз, таких как нуклеазы с цинковыми пальцами . [5] сконструированные самонаводящиеся эндонуклеазы , [6] TALENS , или чаще всего система CRISPR -Cas. Этот метод был применен к видам, включая Drosophila melanogaster , [5] табак , [7] [8] кукуруза , [9] человека , клетки [10] мыши [11] и крысы . [11]

Сравнение с другими формами генной инженерии

[ редактировать ]
Диаграмма Венна, показывающая взаимосвязь между тремя типами «генной инженерии»; Генетическая модификация, таргетинг на гены и редактирование генома.

Взаимосвязь между нацеливанием на гены, редактированием генов и генетической модификацией показана на диаграмме Венна ниже. Он показывает, как «генная инженерия» включает в себя все три метода. Редактирование генома характеризуется внесением небольших изменений в геном в определенном месте, часто после разрезания целевой области ДНК сайт-специфической нуклеазой, такой как CRISPR. [12] Генетическая модификация обычно означает вставку трансгена (чужеродной ДНК, т.е. гена другого вида) в случайное место генома. [13] [14] Генное нацеливание — это специфический биотехнологический инструмент, который может привести к небольшим изменениям в геноме в определенном месте. [2] - в этом случае изменения, вызванные воздействием на гены, будут считаться редактированием генома. Однако нацеливание на гены также позволяет вставлять целые гены (например, трансгены) в целевой сайт, если трансген включен в матрицу восстановления гомологии, которая используется во время нацеливания на ген. [15] [16] В таких случаях изменения, вызванные генным нацеливанием, в некоторых юрисдикциях будут рассматриваться как эквиваленты генетической модификации, поскольку произошла вставка чужеродной ДНК. [16]

Нацеливание на гены — это одна из конкретных форм инструмента редактирования генома . Другие инструменты редактирования генома включают целевой мутагенез, базовое редактирование и первичное редактирование , каждый из которых вносит изменения в эндогенную ДНК (ДНК, уже присутствующую в организме) в определенном месте генома. [17] [18] Именно этот сайт-специфичный или «целевой» характер редактирования генома обычно отличает редактирование генома от традиционной «генетической модификации», при которой трансген вставляется в неспецифическое место в геноме организма, а также редактирование генома, делающее небольшие изменения. редактирование ДНК, уже присутствующей в организмах, в отличие от генетической модификации, вставки «чужой» ДНК из другого вида. [19] [20]

Поскольку редактирование генов вносит меньшие изменения в эндогенную ДНК, многие мутации, созданные посредством редактирования генома, теоретически могут возникать посредством естественного мутагенеза или, в случае растений, посредством мутационной селекции , которая является частью традиционной селекции (в отличие от вставки трансгена в создание генетически модифицированного организма (ГМО) не могло произойти естественным путем). Однако из этого общего правила есть исключения; как объяснялось во введении, GT может вносить в ДНК изменения разного размера; от очень небольших изменений, таких как изменение, вставка или удаление одной пары оснований, до вставки гораздо более длинных последовательностей ДНК, которые теоретически могут включать в себя вставку всего трансгена. [16] Однако на практике GT чаще используется для вставки небольших последовательностей. Диапазон изменений, возможных через GT, может затруднить регулирование (см. «Регулирование» ).

Возможные результаты восстановления ДНК после разрезания с помощью CRISPR , что приводит к редактированию генов. Обе цепи ДНК разрезаются CRISPR-Cas (или другой сайт-специфической нуклеазой), образуя двухцепочечный разрыв (DSB). Затем DSB восстанавливается посредством двух альтернативных путей восстановления ДНК ( NHEJ или HR ), что приводит к случайным мутациям в месте разреза («целевой мутагенез») или специфическим мутациям, если предоставляется шаблон репарации, который содержит эти конкретные изменения («нацеливание на ген»). ).

Двумя наиболее распространенными формами редактирования генов являются нацеливание на гены и целевой мутагенез . В то время как нацеливание на гены основано на пути восстановления ДНК , направленном на гомологию (HDR) (также называемом гомологичной рекомбинацией , HR), при целевом мутагенезе используется негомологическое соединение концов (NHEJ) сломанной ДНК. NHEJ — это путь восстановления ДНК, подверженный ошибкам. Это означает, что при восстановлении поврежденной ДНК он может вставлять или удалять основания ДНК, создавая вставки или делеции (инделы). Пользователь не может указать, какими будут эти случайные вставки, поэтому он не может точно контролировать, какие изменения вносятся на целевой сайт. Однако они могут контролировать, где будут происходить эти изменения (т.е. определять целевой сайт), используя нуклеазу, специфичную для сайта (ранее — нуклеазы цинковых пальцев и TALEN , теперь обычно CRISPR ), чтобы разрушить ДНК в целевом сайте. Краткое изложение генного нацеливания с помощью HDR (также называемого гомологичной рекомбинацией) и целевого мутагенеза с помощью NHEJ показано на рисунке ниже.

Более новые методы редактирования генов, такие как первичное редактирование и базовое редактирование, [18] основанные на методах CRISPR-Cas, являются альтернативой нацеливанию на гены, которые также могут создавать определяемые пользователем изменения в целевых местах генома. Однако каждый из них ограничен в возможной длине вставки последовательности ДНК; редактирование оснований ограничивается преобразованиями одной пары оснований [21] в то время как первичное редактирование может вставлять только последовательности длиной до ~ 44 бит. [22] [23] Следовательно, GT остается основным методом целенаправленной (локально-специфической) вставки длинных последовательностей ДНК для геномной инженерии. 

Сравнение с ловушкой генов

[ редактировать ]

Захват генов основан на случайном вставке кассеты, тогда как нацеливание на гены манипулирует конкретным геном. Кассеты можно использовать для самых разных целей, в то время как фланкирующие области гомологии кассет, нацеленных на гены, необходимо адаптировать для каждого гена. Это делает ловушку генов более подходящей для крупномасштабных проектов, чем таргетирование. С другой стороны, нацеливание на гены можно использовать для генов с низкой транскрипцией, которые остались бы незамеченными при скрининге-ловушке. Вероятность захвата увеличивается с размером интрона , в то время как при нацеливании на гены небольшие гены так же легко изменяются.

Приложения

[ редактировать ]

Применение в системах млекопитающих

[ редактировать ]

Нацеливание на гены было разработано в клетках млекопитающих в 1980-х годах. [24] [25] [26] с возможными разнообразными применениями в результате возможности внесения конкретных изменений последовательности в целевом геномном сайте, например, изучение функции гена или заболеваний человека, особенно на моделях мышей. [27] Действительно, нацеливание на гены широко используется для изучения генетических заболеваний человека путем удаления (« выбивания ») или добавления (« выбивания ») конкретных представляющих интерес мутаций. [28] [29] Ранее использовался для создания моделей клеток крыс, [30] [31] Достижения в технологиях генного таргетинга открывают новую волну моделей изогенных заболеваний человека . Эти модели являются наиболее точными моделями in vitro , доступными исследователям, и облегчают разработку персонализированных лекарств и средств диагностики, особенно в онкологии . [32] Нацеливание на гены также исследовалось для генной терапии с целью коррекции мутаций, вызывающих заболевания. Однако низкая эффективность доставки механизмов нацеливания на гены в клетки препятствовала этому, и были проведены исследования вирусных векторов для нацеливания на гены, чтобы попытаться решить эти проблемы. [33]

Применение в дрожжах и мхе

[ редактировать ]

Нацеливание на гены имеет относительно высокую эффективность у дрожжей, бактерий и мхов (но редко встречается у высших эукариот). Следовательно, нацеливание на гены использовалось в подходах обратной генетики для изучения функции генов в этих системах. [34] [35] [36] [37] [38]

Применение в генной инженерии растений

[ редактировать ]

Нацеливание на гены (GT) или репарация, направленная на гомологию (HDR), обычно используется в инженерии генома растений для вставки определенных последовательностей. [39] с первым опубликованным примером GT на растениях в 1980-х годах. [15] Однако нацеливание на гены особенно сложно у высших растений из-за низких показателей гомологичной рекомбинации, или гомологичной репарации, у высших растений и низкой скорости трансформации (поглощения ДНК) у многих видов растений. [40] Однако в последние десятилетия было предпринято много усилий по увеличению частоты нацеливания генов на растения. [39] [40] [41] [42] поскольку очень полезно иметь возможность вводить определенные последовательности в геном растений для геномной инженерии растений. Наиболее значительным улучшением частоты нацеливания генов у растений была индукция двухцепочечных разрывов с помощью сайт-специфических нуклеаз, таких как CRISPR, как описано выше. Другие стратегии включают в себя нацеливание на гены растений , при котором матрица восстановления гомологии внедряется в геном растения, а затем высвобождается с помощью вырезания CRISPR; [43] активация генов, участвующих в пути гомологичной рекомбинации; подавление конкурирующего пути негомологичного соединения концов; [39] увеличение количества копий гомологичного шаблона репарации; [44] и разработка вариантов Cas, которые будут оптимизированы для культуры тканей растений. [45] Некоторые из этих подходов также использовались для повышения эффективности нацеливания на гены в клетках млекопитающих. [46]

К растениям, подвергшимся генному воздействию, относятся Arabidopsis thaliana (наиболее часто используемое модельное растение ), рис, томаты, кукуруза, табак и пшеница. [40]

Технические проблемы

[ редактировать ]

Нацеливание на гены открывает огромные перспективы для целевых, определяемых пользователем изменений последовательностей или вставок последовательностей в геном. Однако его основные применения - моделирование заболеваний человека и инженерия генома растений - затруднены из-за низкой эффективности гомологичной рекомбинации по сравнению с конкурирующим негомологичным соединением концов в клетках млекопитающих и высших растений. [47] Как описано выше, существуют стратегии, которые можно использовать для увеличения частоты нацеливания на гены в растениях и клетках млекопитающих. [37] Кроме того, надежные методы селекции, которые позволяют отбирать или специфично обогащать клетки, в которых произошло нацеливание на гены, могут увеличить скорость восстановления клеток, нацеленных на гены. [48]

Нобелевская премия 2007 г.

[ редактировать ]

Марио Р. Капечки , Мартин Дж. Эванс и Оливер Смитис были удостоены Нобелевской премии по физиологии и медицине 2007 года за работу над «принципами введения специфических модификаций генов у мышей с помощью эмбриональных стволовых клеток» или нацеливания на гены. [49]

Регуляция организмов, нацеленных на гены

[ редактировать ]

Как объяснялось выше, таргетинг на гены технически способен создавать генетические изменения разного размера; от мутаций одной пары оснований до вставки более длинных последовательностей, включая потенциально трансгены. Это означает, что продукты воздействия на гены могут быть неотличимы от естественной мутации или могут быть эквивалентны ГМО из-за введения в них трансгена (см. диаграмму Венна выше). Следовательно, регулирование продуктов генного таргетинга может быть сложной задачей, и разные страны применяют разные подходы или рассматривают, как это сделать, в рамках более широких нормативных проверок продуктов генного редактирования. [50] [51] [52] Широко принятые классификации разделяют организмы с отредактированными генами на 3 класса «SDN1-3», имея в виду сайт-направленные нуклеазы (такие как CRISPR-Cas), которые используются для создания организмов с отредактированными генами. [53] [16] Эти классификации SDN могут служить ориентиром в национальных правилах относительно того, какой класс SDN они будут считать «ГМО» и, следовательно, на которые будут распространяться потенциально строгие правила. 

  • SDN1 = организмы, созданные посредством негомологичного соединения концов разрыва ДНК, катализируемого SDN. Следовательно, случайные мутации произошли из-за подверженного ошибкам NHEJ, и шаблон восстановления не использовался (следовательно, это не нацеливание на гены). Часто подвергается менее строгому нормативному надзору из-за отсутствия использования матрицы репарации ДНК и эквивалентности традиционным методам селекции (в случае селекции растений).
  • SDN2 = одна или несколько специфических мутаций были введены в целевой ген в месте разреза SDN посредством использования матрицы восстановления гомологии (следовательно, это нацеливание на ген).
  • SDN3 = более длинные последовательности были вставлены в сайт разреза посредством гомологичной рекомбинации (т.е. нацеливания на гены) или посредством NHEJ. [16] «Более длинные последовательности» обычно относятся к целым генетическим элементам, таким как промоторы или области, кодирующие белок. Их часто считают трансгенными и поэтому часто классифицируют как ГМО. [54]

Исторически Европейский Союз (ЕС) широко выступал против технологии генетической модификации на основании ее принципа предосторожности . В 2018 году Европейский суд (ЕСС) постановил, что генетически модифицированные культуры (в том числе генетически модифицированные) следует рассматривать как генетически модифицированные. [55] и, следовательно, на них распространяется действие Директивы о ГМО, которая налагает значительное нормативное бремя на использование ГМО. Однако это решение было воспринято негативно европейским научным сообществом. [56] В 2021 году Европейская комиссия сочла, что действующее законодательство ЕС, регулирующее методы генетической модификации и редактирования генов (или NGT – новые геномные методы), «не соответствует своей цели» и требует адаптации с учетом научно-технического прогресса. [57] В июле 2023 года Европейская комиссия опубликовала предложение изменить правила для некоторых продуктов редактирования генов, чтобы снизить нормативные требования к организмам, созданным с помощью редактирования генов и содержащим генетические изменения, которые могли произойти естественным путем. [58]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Эгенер Т., Гранадо Дж., Гиттон М.С., Хохе А., Холторф Х., Лухт Дж.М. и др. (июль 2002 г.). «Высокая частота фенотипических отклонений у растений Physcomitrella patens, трансформированных с помощью библиотеки разрушения генов» . Биология растений BMC . 2 :6. дои : 10.1186/1471-2229-2-6 . ПМК   117800 . ПМИД   12123528 .
  2. ^ Перейти обратно: а б Санагала Р., Мула А.К., Боллипо Диана Р.К. (декабрь 2017 г.). «Обзор передовых методов нацеливания на гены растений» . Журнал генной инженерии и биотехнологии . 15 (2): 317–321. дои : 10.1016/j.jgeb.2017.07.004 . ПМК   6296621 . ПМИД   30647669 .
  3. ^ Рески Р. (февраль 1998 г.). «Развитие, генетика и молекулярная биология мхов». Ботаника Акта . 111 (1): 1–5. дои : 10.1111/j.1438-8677.1998.tb00670.x .
  4. ^ Рески Р. (июнь 1998 г.). « Физкомитрелла и арабидопсис : Давид и Голиаф обратной генетики». Тенденции в науке о растениях . 3 (6): 209–210. дои : 10.1016/S1360-1385(98)01257-6 .
  5. ^ Перейти обратно: а б Бибикова М., Боймер К., Траутман Дж.К., Кэрролл Д. (май 2003 г.). «Усиление нацеливания на гены с помощью разработанных нуклеаз с цинковыми пальцами». Наука . 300 (5620): 764. doi : 10.1126/science.1079512 . ПМИД   12730594 . S2CID   42087531 .
  6. ^ Гризо С., Смит Дж., Дабусси Ф., Прието Дж., Редондо П., Мерино Н. и др. (сентябрь 2009 г.). «Эффективное нацеливание на ген SCID с помощью сконструированной одноцепочечной эндонуклеазы самонаведения» . Исследования нуклеиновых кислот . 37 (16): 5405–5419. дои : 10.1093/нар/gkp548 . ПМЦ   2760784 . ПМИД   19584299 .
  7. ^ Кай К.К., Дойон Ю., Эйнли В.М., Миллер Дж.К., Декелвер Р.К., Мёле Э.А. и др. (апрель 2009 г.). «Направленная интеграция трансгена в растительные клетки с использованием разработанных нуклеаз с цинковыми пальцами». Молекулярная биология растений . 69 (6): 699–709. дои : 10.1007/s11103-008-9449-7 . ПМИД   19112554 . S2CID   6826269 .
  8. ^ Таунсенд Дж.А., Райт Д.А., Уинфри Р.Дж., Фу Ф., Мэдер М.Л., Йонг Дж.К., Войтас Д.Ф. (май 2009 г.). «Высокочастотная модификация генов растений с использованием сконструированных нуклеаз с цинковыми пальцами» . Природа . 459 (7245): 442–445. Бибкод : 2009Natur.459..442T . дои : 10.1038/nature07845 . ПМЦ   2743854 . ПМИД   19404258 .
  9. ^ Шукла В.К., Дойон Ю., Миллер Дж.К., ДеКелвер Р.К., Мёле Э.А., Уорден С.Е. и др. (май 2009 г.). «Точная модификация генома сельскохозяйственных культур Zea mays с использованием нуклеаз с цинковыми пальцами». Природа . 459 (7245): 437–441. Бибкод : 2009Natur.459..437S . дои : 10.1038/nature07992 . ПМИД   19404259 . S2CID   4323298 .
  10. ^ Урнов Ф.Д., Миллер Дж.К., Ли Ю.Л., Босежур К.М., Рок Дж.М., Огастес С. и др. (июнь 2005 г.). «Высокоэффективная коррекция эндогенных генов человека с использованием разработанных нуклеаз с цинковыми пальцами». Природа . 435 (7042): 646–651. Бибкод : 2005Natur.435..646U . дои : 10.1038/nature03556 . ПМИД   15806097 . S2CID   4390010 .
  11. ^ Перейти обратно: а б Цуй Икс, Джи Д., Фишер Д.А., Ву Ю, Бринер Д.М., Вайнштейн Э.Дж. (январь 2011 г.). «Направленная интеграция в эмбрионы крыс и мышей с помощью нуклеаз с цинковыми пальцами». Природная биотехнология . 29 (1): 64–67. дои : 10.1038/nbt.1731 . ПМИД   21151125 . S2CID   13409267 .
  12. ^ «Редактирование генов – комплект цифровых медиа» . Национальные институты здравоохранения (NIH) . 07.03.2019 . Проверено 21 июля 2023 г.
  13. ^ «Что такое ГМ-культуры и как это делается? | Королевское общество» . royalsociety.org . Проверено 21 июля 2023 г.
  14. ^ «Чем ГМ отличается от традиционной селекции растений? | Королевское общество» . royalsociety.org . Проверено 21 июля 2023 г.
  15. ^ Перейти обратно: а б Пашковски Дж., Баур М., Богуцкий А., Потрикус И. (декабрь 1988 г.). «Нацеливание на гены растений» . Журнал ЭМБО . 7 (13): 4021–4026. дои : 10.1002/j.1460-2075.1988.tb03295.x . ПМК   455109 . ПМИД   16453864 .
  16. ^ Перейти обратно: а б с д и Редактирование генов и агропродовольственные системы . Рим: Продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций (ФАО). 2022. doi : 10.4060/cc3579en . ISBN  978-92-5-137417-7 .
  17. ^ Маха А (13 июня 2022 г.). «Синтего | Полная геномная инженерия» . www.synthego.com . Проверено 10 июля 2023 г.
  18. ^ Перейти обратно: а б Анзалоне А.В., Коблан Л.В., Лю Д.Р. (июль 2020 г.). «Редактирование генома с помощью нуклеаз CRISPR-Cas, базовых редакторов, транспозаз и прайм-редакторов». Природная биотехнология . 38 (7): 824–844. дои : 10.1038/s41587-020-0561-9 . ПМИД   32572269 . S2CID   256820370 .
  19. ^ Нативидад-Томе КГ (4 мая 2022 г.). «В чем разница между генной инженерией и редактированием генов?» . Наука говорит . Международная служба по приобретению агробиотехнологических приложений (ISAAA) . Проверено 10 июля 2023 г.
  20. ^ «Часто задаваемые вопросы о генетической модификации» . Эдинбургский университет . 25 июня 2021 г. Проверено 10 июля 2023 г.
  21. ^ Гиринг М. «CRISPR 101: редакторы оснований цитозина и аденина» . blog.addgene.org . Проверено 10 июля 2023 г.
  22. ^ Цанг Дж. «Основное редактирование: добавление точности и гибкости к редактированию CRISPR» . blog.addgene.org . Проверено 10 июля 2023 г.
  23. ^ Анзалоне А.В., Рэндольф П.Б., Дэвис Дж.Р., Соуза А.А., Коблан Л.В., Леви Дж.М. и др. (декабрь 2019 г.). «Редактирование генома с поиском и заменой без двухцепочечных разрывов или донорской ДНК» . Природа . 576 (7785): 149–157. Бибкод : 2019Natur.576..149A . дои : 10.1038/s41586-019-1711-4 . ПМК   6907074 . ПМИД   31634902 .
  24. ^ Смитис О., Грегг Р.Г., Боггс С.С., Коралевски М.А., Кучерлапати Р.С. (сентябрь 1985 г.). «Вставка последовательностей ДНК в хромосомный локус бета-глобина человека путем гомологичной рекомбинации». Природа . 317 (6034): 230–234. дои : 10.1038/317230a0 . ПМИД   2995814 .
  25. ^ Дучман Т., Грегг Р.Г., Маэда Н., Хупер М.Л., Мелтон Д.В., Томпсон С., Смитис О. (декабрь 1987 г.). «Целевая коррекция мутантного гена HPRT в эмбриональных стволовых клетках мыши». Природа . 330 (6148): 576–578. дои : 10.1038/330576a0 . ПМИД   3683574 .
  26. ^ Томас КР, Капечки MR (ноябрь 1987 г.). «Сайт-направленный мутагенез путем нацеливания на гены в стволовых клетках, полученных из эмбрионов мыши». Клетка . 51 (3): 503–512. дои : 10.1016/0092-8674(87)90646-5 . ПМИД   2822260 .
  27. ^ ДеКьяра ТМ (2001). «Нацеливание на гены в ES-клетках». В Tymms MJ, Kola I (ред.). Методы молекулярной биологии . Том. 158. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. стр. 19–45. дои : 10.1385/1-59259-220-1:19 . ISBN  978-1-59259-220-3 . ПМИД   11236657 . {{cite book}}: |work= игнорируется ( помогите )
  28. ^ Беглопулос В., Шен Дж. (1 августа 2004 г.). «Гено-таргетные технологии исследования неврологических расстройств». Нейромолекулярная медицина . 6 (1): 13–30. дои : 10.1385/НММ:6:1:013 . ПМИД   15781974 .
  29. ^ Фанелли А (2017). «Применение ксенотрансплантации» . Ксенографт.нет . Проверено 15 января 2018 г.
  30. ^ Мен Х, Дэвис DJ, Брида EC (2023). «Нацеливание на гены в эмбриональных стволовых клетках крысы». В Сондерсе Т.Л. (ред.). Трансгенез . Методы молекулярной биологии. Том. 2631. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Springer US. стр. 341–353. дои : 10.1007/978-1-0716-2990-1_15 . ISBN  978-1-0716-2990-1 . ПМИД   36995676 . {{cite book}}: |work= игнорируется ( помогите )
  31. ^ Джейкоб Х.Дж., Лазар Дж., Дуинелл М.Р., Морено С., Гертс А.М. (декабрь 2010 г.). «Нацеливание на гены у крыс: достижения и возможности» . Тенденции в генетике . 26 (12): 510–518. дои : 10.1016/j.tig.2010.08.006 . ПМК   2991520 . ПМИД   20869786 .
  32. ^ Сур С., Пальярини Р., Бунц Ф., Раго С., Диас Л.А., Кинцлер К.В. и др. (март 2009 г.). «Панель изогенных раковых клеток человека предлагает терапевтический подход к лечению рака с инактивированным р53» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 106 (10): 3964–3969. Бибкод : 2009PNAS..106.3964S . дои : 10.1073/pnas.0813333106 . ПМК   2656188 . ПМИД   19225112 .
  33. ^ Хендри ПК, Рассел Д.В. (июль 2005 г.). «Нацеливание на гены с помощью вирусных векторов» . Молекулярная терапия . 12 (1): 9–17. дои : 10.1016/j.ymthe.2005.04.006 . ПМИД   15932801 .
  34. ^ Камисуги Ю, Cuming AC, Cove DJ (ноябрь 2005 г.). «Параметры, определяющие эффективность нацеливания генов у мха Physcomitrella patens» . Исследования нуклеиновых кислот . 33 (19): e173. дои : 10.1093/nar/gni172 . ПМЦ   1283530 . ПМИД   16282584 .
  35. ^ Лэнгстон Л.Д., Симингтон Л.С. (октябрь 2004 г.). «Нацеливание на гены у дрожжей инициируется инвазией двух независимых цепей» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 101 (43): 15392–15397. дои : 10.1073/pnas.0403748101 . ПМК   524428 . ПМИД   15489271 .
  36. ^ Штафа А, Микленич М.С., Зандона А, Жунар Б, Кадеж Н, Петкович Х, Светец И.К. (июнь 2017 г.). «В Saccharomyces cerevisiae точность нацеливания на гены зависит от метода трансформации и пропорции общей длины трансформирующей и целевой ДНК» . Исследование дрожжей FEMS . 17 (4). дои : 10.1093/femsyr/fox041 . ПМИД   28633406 .
  37. ^ Перейти обратно: а б «Нацеливание на гены, управляемые аптамерами, в клетках дрожжей и человека» . Academic.oup.com . Проверено 24 июля 2023 г.
  38. ^ Коллонье С., Эперт А., Мара К., Макло Ф., Гийон-Дебаст А., Шарло Ф. и др. (январь 2017 г.). «Эффективный направленный мутагенез, опосредованный CRISPR-Cas9, и RAD51-зависимое и RAD51-независимое нацеливание на гены у мха Physcomitrella patens» . Журнал биотехнологии растений . 15 (1): 122–131. дои : 10.1111/pbi.12596 . ПМЦ   5253467 . ПМИД   27368642 .
  39. ^ Перейти обратно: а б с Пухта Х, Фаузер Ф (2013). «Нацеливание на гены растений: 25 лет спустя» . Международный журнал биологии развития . 57 (6–8): 629–637. дои : 10.1387/ijdb.130194hp . ПМИД   24166445 .
  40. ^ Перейти обратно: а б с Чэнь Дж, Ли С, Хэ Ю, Ли Дж, Ся Л (март 2022 г.). «Обновленная информация о точном редактировании генома путем гомологичной репарации у растений» . Физиология растений . 188 (4): 1780–1794. дои : 10.1093/plphys/kiac037 . ПМЦ   8968426 . PMID   35238390 .
  41. ^ Капдевиль Н., Шинделе П., Пухта Х. (февраль 2023 г.). «Все время становится лучше: недавний прогресс в разработке инструментов на основе CRISPR/Cas для инженерии генома растений». Современное мнение в области биотехнологии . 79 : 102854. doi : 10.1016/j.copbio.2022.102854 . ПМИД   36455451 .
  42. ^ Чен Х., Нойбауэр М., Ван Дж.П. (2022). «Повышение частоты HR для точного редактирования генома растений» . Границы в науке о растениях . 13 : 883421. doi : 10.3389/fpls.2022.883421 . ПМЦ   9113527 . ПМИД   35592579 .
  43. ^ Фаузер Ф., Рот Н., Пахер М., Илг Г., Санчес-Фернандес Р., Бисген С., Пухта Х. (май 2012 г.). «Нацеливание на гены растений» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 109 (19): 7535–7540. дои : 10.1073/pnas.1202191109 . ПМЦ   3358861 . ПМИД   22529367 .
  44. ^ Чен Х., Нойбауэр М., Ван Дж. П. (3 мая 2022 г.). «Повышение частоты HR для точного редактирования генома растений» . Границы в науке о растениях . 13 : 883421. doi : 10.3389/fpls.2022.883421 . ПМЦ   9113527 . ПМИД   35592579 .
  45. ^ Шинделе П., Пухта Х (май 2020 г.). «Разработка CRISPR/LbCas12a для высокоэффективного редактирования генов растений, устойчивых к температуре» . Журнал биотехнологии растений . 18 (5): 1118–1120. дои : 10.1111/pbi.13275 . ПМК   7152607 . ПМИД   31606929 .
  46. ^ Ланцов В.А. (октябрь 1999 г.). «Нацеливание на гены для генной терапии: перспективы». Молекулярная генетика и обмен веществ . 68 (2): 276–282. дои : 10.1006/mgme.1999.2910 . ПМИД   10527679 .
  47. ^ Токунага А., Анаи Х., Ханада К. (февраль 2016 г.). «Механизмы нацеливания генов у высших эукариот» . Клеточные и молекулярные науки о жизни . 73 (3): 523–533. дои : 10.1007/s00018-015-2073-1 . ПМЦ   11108335 . ПМИД   26507245 .
  48. ^ «Нацеливание на гены посредством гомологичной рекомбинации как биотехнологический инструмент функциональной геномики риса» . Проверено 24 июля 2023 г.
  49. ^ «Пресс-релиз: Нобелевская премия по физиологии и медицине 2007 года» . Проверено 8 октября 2007 г.
  50. ^ «Глобальный трекер регулирования редактирования генов» . Глобальный трекер правил редактирования генов . Проверено 10 июля 2023 г.
  51. ^ Хандлби П., Харвуд В. (2022). «Регуляторные ограничения и различия культур с отредактированным геномом во всем мире». В Вани С.Х., Хензель Г. (ред.). Редактирование генома . Чам: Международное издательство Springer. стр. 319–341. дои : 10.1007/978-3-031-08072-2_17 . ISBN  978-3-031-08072-2 .
  52. ^ Фридрихс С., Такасу Ю., Кернс П., Дагальер Б., Осима Р., Шофилд Дж., Моредду К. (01.07.2019). «Обзор нормативных подходов к редактированию генома в сельском хозяйстве» . Биотехнологические исследования и инновации . 3 (2): 208–220. дои : 10.1016/j.biori.2019.07.001 . ISSN   2452-0721 . S2CID   201456122 .
  53. ^ Редактирование генов и безопасность пищевых продуктов – Технические соображения и потенциальное значение для работы Кодекса Алиментариус . Документы ФАО (Отчет). Рим: ФАО | Продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций . Проверено 10 июля 2023 г.
  54. ^ Шмидт С.М., Белайл М., Фроммер В.Б. (июнь 2020 г.). «Эволюция ситуации с редактированием генома в сельском хозяйстве: многие страны освободили или собираются освободить формы редактирования генома от регулирования ГМО сельскохозяйственных растений» . Отчеты ЭМБО . 21 (6): e50680. дои : 10.15252/эмбр.202050680 . ПМЦ   7271327 . ПМИД   32431018 .
  55. ^ Неслен А (25 июля 2018 г.). «Генетически отредактированные растения и животные являются ГМ-продуктами, постановил суд ЕС» . Хранитель . ISSN   0261-3077 . Проверено 10 июля 2023 г.
  56. ^ «Что такое EU-SAGE?» . www.eu-sage.eu . Проверено 10 июля 2023 г.
  57. ^ «Исследование ЕС по новым геномным методам» . food.ec.europa.eu . Проверено 10 июля 2023 г.
  58. ^ Предложение о РЕГЛАМЕНТЕ ЕВРОПЕЙСКОГО ПАРЛАМЕНТА И СОВЕТА о растениях, полученных с помощью некоторых новых геномных методов, а также о продуктах питания и кормах для них, а также о внесении поправок в Регламент (ЕС) 2017/625 , 2023 г. , получено 10 июля 2023 г.
  59. ^ Буше Н., Буше Д. (апрель 2001 г.). «Нокаут гена арабидопсиса: нужны фенотипы». Современное мнение в области биологии растений . 4 (2): 111–117. дои : 10.1016/S1369-5266(00)00145-X . ПМИД   11228432 .
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Gene_targeting&oldid=1225859010"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 9d3611b951ffff51bd62395efc80d3df__1716773520
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/9d/df/9d3611b951ffff51bd62395efc80d3df.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Gene targeting - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)