✖


Jump to content

Электропорация

Кюветы для электропорации in vitro. Они пластиковые с алюминиевыми электродами и синей крышкой. Они вмещают максимум 400 мкл .

Электропорация , или электропроницаемость , представляет собой метод, при котором к клеткам прикладывается электрическое поле с целью увеличения проницаемости клеточной мембраны . химические вещества, лекарства, электродные матрицы или ДНК Это может позволить вводить в клетку (также называемый электропереносом ). [1] [2] [3] [4]

В микробиологии процесс электропорации часто используется для трансформации бактерий , дрожжей или растений протопластов путем введения новой кодирующей ДНК. Если бактерии и плазмиды смешаны вместе, плазмиды можно перенести в бактерии после электропорации, хотя в зависимости от того, что переносится, проникающие в клетку пептиды или сдавливание клеток также можно использовать . Электропорация осуществляется путем пропускания тысяч вольт (~ 8 кВ/см) через суспендированные клетки в кювете для электропорации. [2] После этого с клетками следует обращаться осторожно, пока они не получат возможность делиться, образуя новые клетки, содержащие воспроизведенные плазмиды. Этот процесс примерно в десять раз более эффективен в увеличении проницаемости клеточных мембран, чем химическая трансформация , хотя во многих лабораториях нет специального оборудования, необходимого для электропорации. [5] [6] [ нужна проверка ]

Электропорация также очень эффективна для введения чужеродных генов в клетки культуры ткани, особенно в клетки млекопитающих . Например, его используют в процессе получения нокаутных мышей , а также при лечении опухолей, генной терапии и клеточной терапии. Процесс внедрения чужеродной ДНК в эукариотические клетки известен как трансфекция . Электропорация очень эффективна для трансфекции клеток в суспензии с использованием кювет для электропорации. Электропорация доказала свою эффективность при использовании на тканях in vivo , внутриутробно , а также при трансфекции in ovo . Прикрепленные клетки также можно трансфицировать с помощью электропорации, что дает исследователям альтернативу трипсинизированию клеток перед трансфекцией. Однако одним из недостатков электропорации является то, что после этого процесса может быть нарушена экспрессия более 7000 генов. [7] Это может вызвать проблемы в исследованиях, где экспрессию генов необходимо контролировать для обеспечения точных и точных результатов.

Хотя объемная электропорация имеет много преимуществ по сравнению с методами физической доставки, такими как микроинъекции и генные пушки , она все же имеет ограничения, в том числе низкую жизнеспособность клеток. Была изучена миниатюризация электропорации, приводящая к микроэлектропорации и нанотрансфекции тканей с использованием методов электропорации через наноканалы для минимально инвазивной доставки груза в клетки. [8] [9]

Электропорация также использовалась как механизм запуска слияния клеток . Искусственно вызванное слияние клеток можно использовать для исследования и лечения различных заболеваний, таких как диабет, [10] [11] [12] регенерируют аксоны центральной нервной системы, [13] и производить клетки с желаемыми свойствами, например, в клеточных вакцинах для иммунотерапии рака. [14] Однако первым и наиболее известным применением слияния клеток является производство моноклональных антител в гибридомной технологии , где гибридные клеточные линии (гибридомы) образуются путем слияния специфических В-лимфоцитов, продуцирующих антитела, с клеточной линией миеломы (рака В-лимфоцитов). [15]

Лабораторная практика [ править ]

Электропорация проводится с помощью электропораторов — специальных устройств, создающих электростатическое поле в клеточном растворе. Клеточную суспензию вносят пипеткой в ​​стеклянную или пластиковую кювету, которой имеются два алюминиевых электрода по бокам суспензия объемом около 50 микролитров . Для бактериальной электропорации обычно используется . Перед электропорацией эту суспензию бактерий смешивают с плазмидой трансформируемой . Смесь пипеткой наносят в кювету, устанавливают напряжение и емкость и вставляют кювету в электропоратор. Процесс требует прямого контакта между электродами и суспензией. Сразу после электропорации к бактериям добавляют один миллилитр жидкой среды (в кювету или пробирку Эппендорфа ) и пробирку инкубируют при оптимальной для бактерий температуре в течение часа или более, чтобы обеспечить восстановление клеток и экспрессию плазмиду с последующим культивированием бактерий на с агаром чашках .

Успех электропорации во многом зависит от чистоты раствора плазмиды, особенно от содержания в нем солей. Растворы с высокой концентрацией соли могут вызвать электрический разряд (известный как искрение ), который часто снижает жизнеспособность бактерий. Для дальнейшего детального изучения процесса большее внимание следует уделить выходному сопротивлению устройства-поратора и входному сопротивлению суспензии клеток (например, содержанию солей ).

Поскольку клеточная мембрана не способна пропускать ток (за исключением ионных каналов), она действует как электрический конденсатор. Воздействие на мембраны электрического поля высокого напряжения приводит к их временному разрушению, в результате чего образуются поры, которые достаточно велики, чтобы макромолекулы (например, ДНК) могли проникать в клетку или покидать ее. [16]

Кроме того, электропорацию можно использовать для увеличения проницаемости клеток во время внутриутробных инъекций и операций. В частности, электропорация позволяет более эффективно трансфицировать ДНК, РНК, кшРНК и все нуклеиновые кислоты в клетки мышей и крыс. Успех электропорации in vivo во многом зависит от напряжения, повторяемости, импульсов и продолжительности. Развивающиеся центральные нервные системы наиболее эффективны для электропорации in vivo благодаря видимости желудочков для инъекций нуклеиновых кислот, а также повышенной проницаемости делящихся клеток. Электропорация инъецированных внутриутробно эмбрионов проводится через стенку матки, часто с помощью электродов типа щипцов, чтобы ограничить повреждение эмбриона. [17]

in vitro Исследования и на животных [ править ]

Электроперенос генов in vivo был впервые описан в 1991 году. [18] и сегодня проводится множество доклинических исследований электропереноса генов. Метод используется для доставки большого количества терапевтических генов для потенциального лечения ряда заболеваний, таких как: нарушения иммунной системы, опухоли, нарушения обмена веществ, моногенетические заболевания, сердечно-сосудистые заболевания, аналгезия.... [19] [20] [21]

Что касается необратимой электропорации, первое успешное лечение злокачественных опухолей кожи, имплантированных мышам, было завершено в 2007 году группой ученых, которым удалось добиться полной абляции опухоли у 12 из 13 мышей. Они добились этого, отправив 80 импульсов по 100 микросекунд с частотой 0,3 Гц и величиной электрического поля 2500 В/см для лечения кожных опухолей. [22] В настоящее время ряд компаний, в том числе AngioDynamics, Inc. и VoltMed, Inc., продолжают разрабатывать и внедрять технологии необратимой электропорации в клинических условиях.

Первую группу, изучавшую электропорацию в медицинских целях, возглавил Луис М. Мир из Института Гюстава Русси. В этом случае они рассматривали возможность использования обратимой электропорации в сочетании с непроницаемыми макромолекулами. Первое исследование о том, как наносекундные импульсы можно использовать на клетках человека, было проведено исследователями из Медицинской школы Восточной Вирджинии и Университета Олд-Доминион и опубликовано в 2003 году. [23]

применения Медицинские ​ ​

Основная статья: Необратимая электропорация

Первое медицинское применение электропорации было использовано для введения противораковых препаратов с плохой проницаемостью в опухолевые узелки. [24] Вскоре особый интерес приобрел и электроперенос генов из-за его дешевизны, простоты реализации и безопасности. А именно, вирусные векторы могут иметь серьезные ограничения с точки зрения иммуногенности и патогенности при использовании для переноса ДНК. [25]

Необратимая электропорация используется и оценивается как абляция сердца, позволяющая убить очень небольшие участки сердечной мышцы. Это делается для лечения нарушений сердечного ритма . доставляет Сердечный катетер серии высоковольтных сверхбыстрых электрических импульсов, которые образуют необратимые поры в клеточных мембранах, что приводит к гибели клеток. Считается, что он обеспечивает лучшую избирательность, чем предыдущие методы, в которых для уничтожения больших объемов мышц использовалось тепло или холод. [26]

У свиней было обнаружено, что более высокое напряжение электропорации необратимо разрушает клетки-мишени в узком диапазоне, оставляя соседние клетки незатронутыми, и, таким образом, представляет собой многообещающее новое лечение рака, болезней сердца и других болезненных состояний, требующих удаления тканей. [27] С тех пор необратимая электропорация (IRE) доказала свою эффективность в лечении рака человека: хирурги из Университета Джонса Хопкинса и других учреждений теперь используют эту технологию для лечения рака поджелудочной железы, который ранее считался неоперабельным. [28]

Также сообщалось о первом этапе I клинического исследования электропереноса генов у пациентов с метастатической меланомой. [29] [30] опосредованную электропорацией доставку плазмиды, кодирующей ген интерлейкина-12 Осуществляли (pIL-12), и контролировали безопасность, переносимость и терапевтический эффект. Исследование пришло к выводу, что электроперенос гена с помощью pIL-12 безопасен и хорошо переносится. Кроме того, частичный или полный ответ наблюдался также в отдаленных нелеченых метастазах, что указывает на системный эффект лечения. На основании этих результатов они уже планируют перейти ко II фазе клинических исследований. В настоящее время проводится несколько клинических исследований электропереноса генов. [31] где контролируется безопасность, переносимость и эффективность иммунизации ДНК-вакциной, которую вводят электрическими импульсами.

Хотя метод не системный, а строго локальный, он по-прежнему остается наиболее эффективной невирусной стратегией доставки генов.

Н-ШИНА [ править ]

Недавняя методика, называемая нетермической необратимой электропорацией (N-TIRE), доказала свою эффективность в лечении многих различных типов опухолей и других нежелательных тканей. Эта процедура выполняется с использованием небольших электродов (диаметром около 1 мм), размещаемых внутри или вокруг целевой ткани, для подачи коротких повторяющихся импульсов электричества с заданным напряжением и частотой. Эти всплески электричества увеличивают трансмембранный потенциал покоя (ТМП), в результате чего в плазматической мембране образуются нанопоры. Когда электричество, приложенное к ткани, превышает порог электрического поля целевой ткани, клетки становятся постоянно проницаемыми из-за образования нанопор. В результате клетки не могут восстановить повреждения и погибают из-за потери гомеостаза. [32] N-TIRE уникален среди других методов абляции опухолей тем, что не вызывает термического повреждения тканей вокруг него.

электропорация Обратимая ​ ​

Напротив, обратимая электропорация происходит, когда электричество, подаваемое с помощью электродов, находится ниже порога электрического поля целевой ткани. Поскольку подаваемое электричество ниже порога клетки, оно позволяет клеткам восстановить свой фосфолипидный бислой и продолжить нормальные клеточные функции. Обратимая электропорация обычно выполняется с помощью методов лечения, которые включают введение лекарства или гена (или другой молекулы, которая обычно не проницаема для клеточной мембраны) в клетку. Не все ткани имеют одинаковый порог электрического поля; поэтому перед началом лечения необходимо провести тщательные расчеты, чтобы обеспечить безопасность и эффективность. [33]

Одним из основных преимуществ использования N-TIRE является то, что, если все сделано правильно и в соответствии с тщательными расчетами, оно воздействует только на целевую ткань. Белки, внеклеточный матрикс и критические структуры, такие как кровеносные сосуды и нервы, не затрагиваются и остаются здоровыми в результате этого лечения. Это позволяет ускорить выздоровление и способствует более быстрой замене мертвых опухолевых клеток здоровыми клетками. [34]

Прежде чем делать процедуру, ученые должны тщательно рассчитать, что именно необходимо сделать, и лечить каждого пациента в индивидуальном порядке. Для этого обычно используются технологии визуализации, такие как компьютерная томография и МРТ, для создания трехмерного изображения опухоли. На основе этой информации они могут приблизительно оценить объем опухоли и принять решение о наилучшем способе действий, включая место введения электродов, угол их введения, необходимое напряжение и многое другое, используя программные технологии. Часто для установки электродов во время процедуры используется компьютерная томография, особенно когда электроды используются для лечения опухолей головного мозга. [35]

Вся процедура очень быстрая, обычно занимает около пяти минут. Вероятность успеха этих процедур высока. [16] и очень перспективен для будущего лечения людей. Одним из недостатков использования N-TIRE является то, что электричество, подаваемое от электродов, может стимулировать сокращение мышечных клеток, что в зависимости от ситуации может иметь смертельные последствия. Поэтому при выполнении процедуры необходимо использовать паралитическое средство. Паралитические агенты, использованные в таких исследованиях, оказались успешными. [ нужна ссылка ] ; однако при использовании анестетиков всегда существует некоторый риск, хотя и небольшой.

H-FIRE [ править ]

Был разработан более поздний метод, названный высокочастотной необратимой электропорацией (H-FIRE). В этом методе используются электроды для подачи биполярных всплесков электричества на высокой частоте, в отличие от униполярных всплесков электричества на низкой частоте. Этот тип процедуры имеет такой же успех абляции опухоли, как и N-TIRE. Однако у него есть одно явное преимущество: H-FIRE не вызывает сокращения мышц у пациента, и поэтому нет необходимости в паралитическом агенте. [36] Более того, было продемонстрировано, что H-FIRE обеспечивает более предсказуемую абляцию из-за меньшей разницы в электрических свойствах тканей на более высоких частотах. [37]

лекарств Доставка и генов

Электропорацию также можно использовать для доставки лекарств или генов в клетку путем применения коротких и интенсивных электрических импульсов, которые временно проницаемы для клеточной мембраны, тем самым обеспечивая транспорт молекул, которые иначе не транспортировались бы через клеточную мембрану. Эта процедура называется электрохимиотерапией , когда транспортируемые молекулы представляют собой химиотерапевтические агенты, или электропереносом гена , когда транспортируемой молекулой является ДНК. Ученые из Каролинского института и Оксфордского университета используют электропорацию экзосом для доставки миРНК, антисмысловых олигонуклеотидов, химиотерапевтических агентов и белков специально к нейронам после их системного введения (в кровь). Поскольку эти экзосомы способны преодолевать гематоэнцефалический барьер , этот протокол может решить проблему плохой доставки лекарств в центральную нервную систему и потенциально лечить болезнь Альцгеймера , болезнь Паркинсона и рак мозга , среди других состояний. [38]

Бактериальная трансформация, как правило, является самым простым способом получения большого количества определенного белка, необходимого для биотехнологических целей или в медицине. Поскольку электроперенос гена является очень простым, быстрым и высокоэффективным методом, он впервые стал очень удобной заменой других процедур трансформации. [39]

Недавние исследования показали, что ударные волны можно использовать для предварительной обработки клеточной мембраны перед электропорацией. [40] [41] Эта синергетическая стратегия показала снижение требований к внешнему напряжению и создание более крупных пор. Кроме того, применение ударных волн позволяет воздействовать на желаемый участок мембраны. Эта процедура позволяет контролировать размер пор.

Физический механизм [ править ]

Схематическое поперечное сечение, показывающее теоретическое расположение липидов в гидрофобной поре (вверху) и гидрофильной поре (внизу).
Дополнительная информация: Механика липидного бислоя.

Электропорация позволяет ввести в клетку большие высокозаряженные молекулы, такие как ДНК , которые никогда не будут пассивно диффундировать через гидрофобное бислойное ядро. [2] Это явление указывает на то, что механизм заключается в создании заполненных водой дырок нанометрового размера в мембране. [42] Электропоры были оптически отображены в моделях липидных бислоев, таких как бислои интерфейса капель. [43] и гигантские однослойные везикулы, [44] в то время как добавление белков цитоскелета, таких как актиновые сети, к гигантским однослойным везикулам, по-видимому, предотвращает образование видимых электропор. [45] Также появились экспериментальные доказательства участия актиновых сетей в регуляции проницаемости клеточных мембран. [46] Хотя электропорация и пробой диэлектрика происходят в результате применения электрического поля, механизмы их действия принципиально различны. При пробое диэлектрика материал барьера ионизируется, создавая проводящий путь. Таким образом, материальные изменения имеют химическую природу. Напротив, во время электропорации молекулы липидов не изменяются химически, а просто меняют положение, открывая пору, которая действует как проводящий путь через бислой, поскольку он заполнен водой.

Электропорация — это динамическое явление, которое зависит от локального трансмембранного напряжения в каждой точке клеточной мембраны. Принято считать, что для заданной длительности и формы импульса существует определенный порог трансмембранного напряжения проявления явления электропорации (от 0,5 В до 1 В). Это приводит к определению порога величины электрического поля для электропорации (Eth ) . То есть электропорации подвергаются только клетки внутри областей, где E≥Eth . Если второй порог (E ir ) достигнут или превышен, электропорация поставит под угрозу жизнеспособность клеток, т.е. необратимая электропорация (IRE). [47]

Электропорация — это многоэтапный процесс, состоящий из нескольких отдельных этапов. [48] [49] Сначала необходимо подать короткий электрический импульс. Типичные параметры составляют 300–400 мВ в течение < 1 мс через мембрану (обратите внимание: напряжения, используемые в клеточных экспериментах, обычно намного выше, поскольку они прикладываются на больших расстояниях к объемному раствору, поэтому результирующее поле на реальной мембране составляет всего лишь небольшая часть приложенного смещения). При приложении этого потенциала мембрана заряжается как конденсатор за счет миграции ионов из окружающего раствора. Как только критическое поле достигается, происходит быстрая локализованная перестройка морфологии липидов. Полученная структура считается «предварительной порой», поскольку она не является электропроводной, но быстро приводит к образованию проводящей поры. [50] Доказательством существования таких предпор является главным образом «мерцание» пор, что предполагает переход между проводящим и изолирующим состояниями. [51] Было высказано предположение, что эти препоры представляют собой небольшие (~3 Å) гидрофобные дефекты. Если эта теория верна, то переход в проводящее состояние можно объяснить перестройкой на краю поры, при которой липидные головки сгибаются, образуя гидрофильный интерфейс. Наконец, эти проводящие поры могут либо зажить, закрывая бислой, либо расшириться, в конечном итоге разрывая его. Итоговая судьба зависит от того, был ли превышен критический размер дефекта. [52] что, в свою очередь, зависит от приложенного поля, локального механического напряжения и энергии края бислоя.

Генная электропорация ​ ​

Подача на клетку электрических импульсов достаточной силы вызывает увеличение трансмембранной разности потенциалов, что провоцирует дестабилизацию мембраны. Проницаемость клеточной мембраны увеличивается, и в противном случае в клетку проникают непроницаемые молекулы. [53] [54] Хотя механизмы электропереноса генов еще не до конца изучены, было показано, что внедрение ДНК происходит только в часть мембраны, обращенную к катоду, и что для успешной трансфекции необходимо несколько этапов: электрофоретическая миграция ДНК в сторону клетки, ДНК вставка в мембрану, транслокация через мембрану, миграция ДНК к ядру, перенос ДНК через ядерную оболочку и, наконец, экспрессия генов. [55] Существует ряд факторов, которые могут влиять на эффективность электропереноса генов, таких как: температура, параметры электрических импульсов, концентрация ДНК, используемый буфер для электропорации, размер клеток и способность клеток экспрессировать трансфицированные гены. [56] При электропереносе генов in vivo решающее значение также имеют диффузия ДНК через внеклеточный матрикс, свойства ткани и общая проводимость ткани. [57]

История [ править ]

В 1960-е годы было известно, что при приложении внешнего электрического поля можно создать большой мембранный потенциал на двух полюсах клетки. В 1970-х годах было обнаружено, что когда мембранный потенциал достигает критического уровня, мембрана разрушается и может восстанавливаться. [58] К 1980-м годам это отверстие использовалось для введения в клетки различных материалов/молекул. [59]

Ссылки [ править ]

  1. ^ Муралидхаран А., Букани Ч.П. (декабрь 2023 г.). «Электротрансфер для доставки нуклеиновых кислот и белков» . Тенденции в биотехнологии . дои : 10.1016/j.tibtech.2023.11.009 . ПМИД   38102019 .
  2. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с Нойманн Э., Шефер-Риддер М., Ван Ю., Хофшнайдер П.Х. (1982). «Перенос генов в клетки лиомы мышей путем электропорации в сильных электрических полях» . Журнал ЭМБО . 1 (7): 841–845. дои : 10.1002/j.1460-2075.1982.tb01257.x . ПМЦ   553119 . ПМИД   6329708 .
  3. ^ Джимбо И., Сасаки Д., Охья Т., Ли С., Ли В., Араб Хассани Ф. и др. (сентябрь 2021 г.). «Органическая транзисторная матрица для многоточечной внутриклеточной регистрации потенциала действия» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 118 (39): e2022300118. Бибкод : 2021PNAS..11822300J . дои : 10.1073/pnas.2022300118 . ПМЦ   8488610 . ПМИД   34544852 . S2CID   237584521 .
  4. ^ Чанг, округ Колумбия (15 сентября 2006 г.). «Электропорация и электросварка». В Мейерс Р.А. (ред.). Энциклопедия молекулярно-клеточной биологии и молекулярной медицины . Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. дои : 10.1002/3527600906.mcb.200300026 . ISBN  9783527600908 .
  5. ^ Лю Дж., Чанг В., Пан Л., Лю Икс, Су Л., Чжан В. и др. (декабрь 2018 г.). «Улучшенный метод получения высокоэффективной трансформации Escherichia coli как с помощью плазмид, так и с более крупными фрагментами ДНК» . Индийский журнал микробиологии . 58 (4): 448–456. дои : 10.1007/s12088-018-0743-z . ПМК   6141401 . ПМИД   30262955 .
  6. ^ Шугар И.П., Нейман Э. (май 1984 г.). «Стохастическая модель пор мембраны, индуцированных электрическим полем. Электропорация» . Биофизическая химия . 19 (3): 211–225. дои : 10.1016/0301-4622(84)87003-9 . ПМИД   6722274 .
  7. ^ Энн Трафтон (2 февраля 2016 г.). «Сжатие клеток улучшает визуализацию белков» . Пресс-служба Массачусетского технологического института.
  8. ^ Гальего-Перес Д., Пал Д., Гатак С., Малкоч В., Игита-Кастро Н., Гньявали С. и др. (октябрь 2017 г.). «Местная нанотрансфекция тканей способствует невирусному перепрограммированию и спасению стромы» . Природные нанотехнологии . 12 (10): 974–979. Бибкод : 2017НатНа..12..974Г . дои : 10.1038/nnano.2017.134 . ПМК   5814120 . ПМИД   28785092 .
  9. ^ Муралидхаран А., Пеш Г.Р., Хуббе Х., Ремс Л., Нури-Гушки М., Букани П.Е. (октябрь 2022 г.). «Массив микроловушек на чипе для локализованной электропорации и электрогенной трансфекции» . Биоэлектрохимия . 147 : 108197. doi : 10.1016/j.bioelechem.2022.108197 . ПМИД   35810498 .
  10. ^ МакКленаган, Нью-Хэмпшир (май 2007 г.). «Физиологическая регуляция бета-клеток поджелудочной железы: функциональные идеи для понимания и терапии диабета» . Экспериментальная физиология . 92 (3): 481–96. doi : 10.1113/expphysicalol.2006.034835 . ПМИД   17272356 . S2CID   22548866 .
  11. ^ Янаи Г., Хаяши Т., Чжи К., Ян К.С., Ширузу Ю., Симабукуро Т. и др. (2013). «Электрофузия мезенхимальных стволовых клеток и островковых клеток для терапии диабета: модель крысы» . ПЛОС ОДИН . 8 (5): e64499. Бибкод : 2013PLoSO...864499Y . дои : 10.1371/journal.pone.0064499 . ПМЦ   3665804 . ПМИД   23724055 .
  12. ^ МакКласки Дж.Т., Хамид М., Го-Парке Х., МакКленаган Н.Х., Гомис Р., Флэтт П.Р. (июнь 2011 г.). «Разработка и функциональная характеристика линий бета-клеток поджелудочной железы человека, высвобождающих инсулин, полученных методом электрослияния» . Журнал биологической химии . 286 (25): 21982–92. дои : 10.1074/jbc.M111.226795 . ПМК   3121343 . ПМИД   21515691 .
  13. ^ Сретаван Д.В., Чанг В., Хоукс Э., Келлер С., Клиот М. (октябрь 2005 г.). «Микромасштабная хирургия на одиночных аксонах». Нейрохирургия . 57 (4): 635–46, обсуждение 635–46. doi : 10.1227/01.NEU.0000175545.57795.ac . ПМИД   16239875 . S2CID   196411777 .
  14. ^ Такакура К., Кадзихара М., Ито З., Окуса Т., Гонг Дж., Койдо С. (март 2015 г.). «Слитые дендритно-опухолевые клетки в иммунотерапии рака». Медицина открытий . 19 (104): 169–74. ПМИД   25828520 .
  15. ^ Тронтель К., Реберсек М., Кандусер М., Сербек В.К., Спрохар М., Миклавчич Д. (ноябрь 2008 г.). «Оптимизация электрослияния объемных клеток in vitro для получения клеток гетерогибридомы человека и мыши». Биоэлектрохимия . 74 (1): 124–9. doi : 10.1016/j.bioelechem.2008.06.003 . ПМИД   18667367 .
  16. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Поттер Х (май 2003 г.). «Глава 9: Трансфекция методом электропорации». Современные протоколы молекулярной биологии . стр. Раздел 9.3. дои : 10.1002/0471142727.mb0903s62 . ISBN  978-0471142720 . ПМЦ   2975437 . ПМИД   18265334 .
  17. ^ Сайто Т. (2010). «Эмбриональная электропорация in vivo у мышей» . Руководство по методам выращивания мышей, Часть B: Молекулярная генетика мышей . Методы энзимологии. Том. 477 (2-е изд.). Эльзевир. стр. 37–50. дои : 10.1016/s0076-6879(10)77003-8 . ISBN  978-0-12-384880-2 . ПМИД   20699135 . Проверено 19 сентября 2022 г.
  18. ^ Титомиров А.В., Сухарев С., Кистанова Е (январь 1991 г.). «Электропорация in vivo и стабильная трансформация клеток кожи новорожденных мышей плазмидной ДНК» . Biochimica et Biophysical Acta (BBA) – Структура и экспрессия генов . 1088 (1): 131–4. дои : 10.1016/0167-4781(91)90162-F . ПМИД   1703441 .
  19. ^ Хеллер Л.К., Коппола Д. (октябрь 2002 г.). «Электрически опосредованная доставка векторной плазмидной ДНК вызывает противоопухолевый эффект» . Генная терапия . 9 (19): 1321–5. дои : 10.1038/sj.gt.3301802 . ПМИД   12224015 .
  20. ^ Чуанг IC, Джао CM, Ян CH, Чанг HC, Ван CW, Лу CY и др. (2004). «Внутримышечная электропорация с геном проопиомеланокортина при адъювантном артрите у крыс» . Исследования и терапия артрита . 6 (1): R7–R14. дои : 10.1186/ar1014 . ПМК   400409 . ПМИД   14979933 .
  21. ^ Вилкин Дж.Т., Кеннел П.Ф., Патурно-Жуас М., Шапделейн П., Буассель Н., Делаер П. и др. (июль 2001 г.). «Электроперенос обнаженной ДНК в скелетных мышцах животных моделей мышечных дистрофий». Генная терапия . 8 (14): 1097–107. дои : 10.1038/sj.gt.3301484 . ПМИД   11526457 . S2CID   1081582 .
  22. ^ Аль-Сакере Б., Андре Ф., Бернат С., Конно Э., Ополон П., Давалос Р.В. и др. (ноябрь 2007 г.). «Аблация опухоли с необратимой электропорацией» . ПЛОС ОДИН . 2 (11): е1135. Бибкод : 2007PLoSO...2.1135A . дои : 10.1371/journal.pone.0001135 . ПМК   2065844 . ПМИД   17989772 .
  23. ^ Биб С.Дж., Фокс П.М., Рек Л.Дж., Уиллис Э.Л., Шенбах К.Х. (август 2003 г.). «Наносекундные импульсные электрические поля высокой интенсивности вызывают апоптоз в клетках человека» . Журнал ФАСЭБ . 17 (11): 1493–5. doi : 10.1096/fj.02-0859fje . ПМИД   12824299 . S2CID   13189517 .
  24. ^ Мир Л.М., Белеградек М., Доменж С., Орловски С., Поддевин Б., Белеградек Дж. и др. (1991). «[Электрохимиотерапия, новое противоопухолевое лечение: первое клиническое исследование]». Доклады Академии наук, серия III (на французском языке). 313 (13): 613–8. ПМИД   1723647 .
  25. ^ Маршалл Э. (декабрь 1999 г.). «Смерть от генной терапии требует пересмотра аденовирусного вектора». Наука . 286 (5448): 2244–5. дои : 10.1126/science.286.5448.2244 . ПМИД   10636774 . S2CID   46362535 .
  26. ^ Табаджа С., Юнис А., Хусейн А.А., Тайген Т.Л., Накагава Х., Салиба В.И. и др. (сентябрь 2023 г.). «Катетерная электропорация: новый метод катетерной абляции сердечных аритмий». JACC. Клиническая электрофизиология . 9 (9): 2008–2023. дои : 10.1016/j.jacep.2023.03.014 . ПМИД   37354168 .
  27. ^ Сара Янг (12 февраля 2007 г.). «Новая медицинская техника пробивает дыры в клетках и может лечить опухоли» . Проверено 13 декабря 2007 г.
  28. ^ «Потенциальное благо для больных раком поджелудочной железы» . Хирургия Джонса Хопкинса: Новости хирургического отделения Джонса Хопкинса . 23 июня 2014 г. Архивировано из оригинала 23 марта 2019 г. Проверено 9 июля 2014 г.
  29. ^ Дауд А.И., ДеКонти Р.К., Эндрюс С., Урбас П., Райкер А.И., Сондак В.К. и др. (декабрь 2008 г.). «Фаза I исследования электропорации плазмиды интерлейкина-12 у пациентов с метастатической меланомой» . Журнал клинической онкологии . 26 (36): 5896–903. дои : 10.1200/JCO.2007.15.6794 . ПМЦ   2645111 . ПМИД   19029422 .
  30. ^ Ча Э, Дауд А (ноябрь 2012 г.). «Электропорация плазмиды IL-12 при меланоме» . Человеческие вакцины и иммунотерапия . 8 (11): 1734–8. дои : 10.4161/hv.22573 . ПМК   3601150 . ПМИД   23151447 .
  31. ^ «Найдено 2 исследования: электроперенос гена» . ClinicalTrials.gov . Национальная медицинская библиотека . Проверено 19 сентября 2022 г.
  32. ^ Гарсия П.А., Россмейсл Дж.Х., Давалос Р.В. (2011). «Изменения электропроводности при необратимом лечении рака мозга электропорацией». 2011 Ежегодная международная конференция Общества инженерии в медицине и биологии IEEE . Том. 2011. стр. 739–42. дои : 10.1109/IEMBS.2011.6090168 . ISBN  978-1-4577-1589-1 . ПМИД   22254416 . S2CID   4953213 .
  33. ^ Гарсия П.А., Нил Р.Э., Россмейсл Дж.Х., Давалос Р.В. (2010). «Нетермическая необратимая электропорация при глубоких внутричерепных нарушениях». 2010 Ежегодная международная конференция IEEE Engineering in Medicine и Biology . Том. 2010. стр. 2743–6. дои : 10.1109/IEMBS.2010.5626371 . ISBN  978-1-4244-4123-5 . ПМИД   21095962 . S2CID   9589956 .
  34. ^ Гарсия П.А., Россмейсл Дж.Х., Нил Р.Э., Эллис Т.Л., Олсон Дж.Д., Энао-Герреро Н. и др. (июль 2010 г.). «Внутричерепная нетермическая необратимая электропорация: анализ in vivo». Журнал мембранной биологии . 236 (1): 127–36. CiteSeerX   10.1.1.679.527 . дои : 10.1007/s00232-010-9284-z . ПМИД   20668843 . S2CID   10958480 .
  35. ^ Нил Р.Э., Гарсия П.А., Россмейсл Дж.Х., Давалос Р.В. (2010). «Исследование с использованием необратимой электропорации для лечения больших опухолей неправильной формы у собак». 2010 Ежегодная международная конференция IEEE Engineering in Medicine и Biology . Том. 2010. стр. 2747–50. дои : 10.1109/IEMBS.2010.5626372 . ISBN  978-1-4244-4123-5 . ПМИД   21095963 . S2CID   24348785 .
  36. ^ Arena CB, Сано МБ, Россмейсл Дж. Х., Колдуэлл Дж. Л., Гарсия П. А., Райландер М. Н. и др. (ноябрь 2011 г.). «Высокочастотная необратимая электропорация (H-FIRE) для нетермической абляции без сокращения мышц» . Биомедицинская инженерия онлайн . 10 :102. дои : 10.1186/1475-925X-10-102 . ПМК   3258292 . ПМИД   22104372 .
  37. ^ Бхонсле СП, Арена CB, Суини, округ Колумбия, Давалос Р.В. (27 августа 2015 г.). «Смягчение изменений импеданса вследствие электропорационной терапии с использованием всплесков высокочастотных биполярных импульсов» . Биомедицинская инженерия онлайн . 13 (Дополнение 3): S3. дои : 10.1186/1475-925X-14-S3-S3 . ПМЦ   4565149 . ПМИД   26355870 .
  38. ^ Эль-Андалусси С., Ли Ю., Лакхал-Литтлтон С., Ли Дж., Сеоу Ю., Гардинер С. и др. (декабрь 2012 г.). «Экзосомо-опосредованная доставка миРНК in vitro и in vivo». Протоколы природы . 7 (12): 2112–26. дои : 10.1038/nprot.2012.131 . ПМИД   23154783 . S2CID   34413410 .
  39. ^ Кэлвин Н.М., Ханавальт ПК (июнь 1988 г.). «Высокоэффективная трансформация бактериальных клеток методом электропорации» . Журнал бактериологии . 170 (6): 2796–801. дои : 10.1128/jb.170.6.2796-2801.1988 . ПМК   211205 . ПМИД   3286620 .
  40. ^ Ху Цюй, Хоссейн С., Джоши Р.П. (25 июня 2018 г.). «Анализ стратегии двойной ударной волны и ультракоротких электрических импульсов для электроманипуляции мембранными нанопорами» . Журнал физики D: Прикладная физика . 51 (28): 285403. Бибкод : 2018JPhD...51B5403H . дои : 10.1088/1361-6463/aaca7a . ISSN   0022-3727 . S2CID   125134522 .
  41. ^ Хоссейн С., Абдельгавад А. (2 января 2020 г.). «Анализ проницаемости мембран вследствие синергетического эффекта контролируемой ударной волны и приложения электрического поля». Электромагнитная биология и медицина . 39 (1): 20–29. дои : 10.1080/15368378.2019.1706553 . ПМИД   31868023 . S2CID   209446699 .
  42. ^ Чанг, округ Колумбия, Риз Т.С. (июль 1990 г.). «Изменения в структуре мембраны, вызванные электропорацией, выявленные с помощью электронной микроскопии быстрого замораживания» . Биофизический журнал . 58 (1): 1–12. Бибкод : 1990BpJ....58....1C . дои : 10.1016/S0006-3495(90)82348-1 . ПМК   1280935 . ПМИД   2383626 .
  43. ^ Сенгел Дж. Т., Уоллес М. И. (май 2016 г.). «Изображение динамики отдельных электропор» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 113 (19): 5281–5286. Бибкод : 2016PNAS..113.5281S . дои : 10.1073/pnas.1517437113 . ПМЦ   4868429 . ПМИД   27114528 .
  44. ^ Сачдев С., Муралидхаран А., Чоудхари Д.К., Перье Д.Л., Ремс Л., Крейцер М.Т. и др. (декабрь 2019 г.). «Транслокация ДНК в гигантские однослойные везикулы во время электропорации не зависит от размера ДНК» . Мягкая материя . 15 (45): 9187–9194. Бибкод : 2019SMat...15.9187S . дои : 10.1039/C9SM01274E . hdl : 1887/85963 . ПМИД   31595286 .
  45. ^ Перье Д.Л., Вахид А., Катхави В., Стам Л., Ремс Л., Мулла Ю. и др. (май 2019 г.). «Ответ актиновой сети в везикулах на электрические импульсы» . Научные отчеты . 9 (1): 8151. Бибкод : 2019НатСР...9.8151П . дои : 10.1038/s41598-019-44613-5 . ПМК   6544639 . ПМИД   31148577 .
  46. ^ Муралидхаран А., Ремс Л., Крейцер М.Т., Букани П.Е. (январь 2021 г.). «Актиновые сети регулируют проницаемость клеточных мембран во время электропорации» . Biochimica et Biophysical Acta (BBA) – Биомембраны . 1863 (1): 183468. doi : 10.1016/j.bbamem.2020.183468 . ПМИД   32882211 .
  47. ^ Иворра А., Рубинский Б. «Гели с заданной проводимостью, используемые при электропорации тканей. Заявка USPTO №: 20080214986 — Класс: 604 21 (USPTO)» . Архивировано из оригинала 22 октября 2014 г. Проверено 21 ноября 2008 г.
  48. ^ Хо С.Ю., Миттал Г.С. (1996). «Электропорация клеточных мембран: обзор». Критические обзоры по биотехнологии . 16 (4): 349–62. дои : 10.3109/07388559609147426 . ПМИД   8989868 .
  49. ^ Скудери М., Дермол-Черне Дж., Амарал С., Муралидхаран А., Букани П.Е., Ремс Л. (2022). «Необходимо пересмотреть модели электропорации и связанного с ней трансмембранного молекулярного транспорта» . Биоэлектрохимия . 147 : 108216. doi : 10.1016/j.bioelechem.2022.108216 . ПМИД   35932533 .
  50. ^ Беккер С.М., Кузнецов А.В. (октябрь 2007 г.). «Локальное повышение температуры влияет на развитие пор электропорации in vivo: численная модель фазового перехода липидов рогового слоя». Журнал биомеханической инженерии . 129 (5): 712–21. дои : 10.1115/1.2768380 . ПМИД   17887897 .
  51. ^ Меликов К.С., Фролов В.А., Щербаков А, Самсонов А.В., Чизмаджев Ю.А., Черномордик Л.В. (апрель 2001 г.). «Индуцированные напряжением непроводящие предпоры и метастабильные одиночные поры в немодифицированном плоском липидном бислое» . Биофизический журнал . 80 (4): 1829–36. Бибкод : 2001BpJ....80.1829M . дои : 10.1016/S0006-3495(01)76153-X . ПМК   1301372 . ПМИД   11259296 .
  52. ^ Джоши Р.П., Шенбах К.Х. (июль 2000 г.). «Динамика электропорации в биологических клетках, подвергнутых воздействию сверхбыстрых электрических импульсов: исследование численного моделирования» . Физический обзор E . 62 (1 часть Б): 1025–33. Бибкод : 2000PhRvE..62.1025J . дои : 10.1103/PhysRevE.62.1025 . ПМИД   11088559 .
  53. ^ Котник Т., Миклавчич Д. (август 2000 г.). «Аналитическое описание трансмембранного напряжения, индуцированного электрическими полями на сфероидальных клетках» . Биофизический журнал . 79 (2): 670–679. Бибкод : 2000BpJ....79..670K . дои : 10.1016/S0006-3495(00)76325-9 . ПМК   1300967 . ПМИД   10920001 .
  54. ^ Суини, округ Колумбия, Уивер Дж. К., Давалос Р. В. (январь 2018 г.). «Характеристика проницаемости клеточных мембран in vitro, часть I: транспортное поведение, индуцированное одноимпульсными электрическими полями» . Технологии в исследовании и лечении рака . 17 : 1533033818792491. дои : 10.1177/1533033818792491 . ПМК   6154305 . ПМИД   30236040 .
  55. ^ Саткаускас С., Бюро М.Ф., Пук М., Махфуди А., Шерман Д., Миклавчич Д. и др. (февраль 2002 г.). «Механизмы электропереноса ДНК in vivo: соответствующий вклад электропроницаемости клеток и электрофореза ДНК» . Молекулярная терапия . 5 (2): 133–40. дои : 10.1006/mthe.2002.0526 . ПМИД   11829520 .
  56. ^ Гейл Дж. (апрель 2003 г.). «Электропорация: теория и методы, перспективы доставки лекарств, генная терапия и исследования». Acta Physiologica Scandinavica . 177 (4): 437–47. дои : 10.1046/j.1365-201X.2003.01093.x . ПМИД   12648161 . S2CID   16742681 .
  57. ^ Миклавчич Д., Беравс К., Семров Д., Чемазар М., Демсар Ф., Серса Г. (май 1998 г.). «Важность распределения электрического поля для эффективной электропорации тканей in vivo» . Биофизический журнал . 74 (5): 2152–8. Бибкод : 1998BpJ....74.2152M . дои : 10.1016/S0006-3495(98)77924-X . ПМК   1299558 . ПМИД   9591642 .
  58. ^ Чанг, округ Колумбия (1992). Руководство по электропорации и электрослиянию . Сан-Диего: Академическая пресса. ISBN  978-0-12-168041-1 . OCLC   817706277 .
  59. ^ Нойманн Э., Шефер-Риддер М., Ван Ю., Хофшнайдер П.Х. (1982). «Перенос генов в клетки лиомы мышей путем электропорации в сильных электрических полях» . Журнал ЭМБО . 1 (7): 841–5. дои : 10.1002/j.1460-2075.1982.tb01257.x . ПМЦ   553119 . ПМИД   6329708 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Electroporation&oldid=1227051481"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 394d7d7f26ffebb753f9f6efd4506e5e__1717403160
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/39/5e/394d7d7f26ffebb753f9f6efd4506e5e.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Electroporation - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)