Экстракция фенола
Экстракция фенола — это лабораторный метод, при котором нуклеиновых кислот образцы очищаются с помощью раствора фенола . Фенол является распространенным реагентом при экстракции, поскольку его свойства позволяют эффективно экстрагировать нуклеиновые кислоты, особенно потому, что он сильно денатурирует белки, является консервантом нуклеиновых кислот и несмешивается с водой.
Это также может относиться к процессу извлечения и выделения фенолов из сырья, такого как каменноугольная смола . Эти очищенные фенолы используются во многих промышленных и медицинских соединениях, а также в качестве предшественников в некоторых реакциях синтеза .
Феноловая экстракция нуклеиновых кислот
[ редактировать ]
Феноловая экстракция — широко используемый метод очистки образцов нуклеиновых кислот от клеточных лизатов. [ 1 ] Чтобы получить нуклеиновые кислоты , клетку необходимо лизировать и отделить нуклеиновые кислоты от других компонентов клетки.
Фенол — полярное вещество с более высокой плотностью, чем вода (1,07 г/см). 3 [ 2 ] по сравнению с водой 1,00 г/см 3 ). При суспендировании в водно-фенольном растворе денатурированные белки и нежелательные клеточные компоненты растворяются в феноле, а полярные нуклеиновые кислоты растворяются в водной фазе. [ 3 ] Затем раствор можно центрифугировать для разделения фенола и воды на отдельные органическую и водную фазы. Очищенные нуклеиновые кислоты можно осаждать из водной фазы раствора.
Фенол часто используется в сочетании с хлороформом . [ 4 ] Добавление равного объема хлороформа и фенола обеспечивает четкое разделение водной и органической фаз. Хлороформ и фенол смешиваются и создают более плотный раствор, чем один фенол, способствуя разделению органического и водного слоев. Такое добавление хлороформа полезно при удалении водной фазы для получения образца очищенной нуклеиновой кислоты.
pH . раствора необходимо подбирать специально для каждого типа экстракции Для экстракции ДНК pH доводят до 7,0–8,0. Для РНК -специфической экстракции pH доводят до 4,5. При pH 4,5 ионы водорода нейтрализуют отрицательные заряды фосфатных групп , вызывая растворение ДНК в органической фазе, позволяя при этом выделить РНК отдельно в водной фазе.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Кирби, Канзас (1 июля 1957 г.). «Новый метод выделения дезоксирибонуклеиновых кислот: данные о природе связей между дезоксирибонуклеиновой кислотой и белком» . Биохимический журнал . 66 (3): 495–504. дои : 10.1042/bj0660495 . ISSN 0264-6021 . ПМК 1200047 . ПМИД 13459887 .
- ^ «Фенол» . Сигма-Олдрич . Проверено 9 июля 2022 г.
- ^ Освальд, Ник (18 октября 2021 г.) [12 февраля 2008 г.]. «Основы: как работает фенольная экстракция ДНК» . Размер укуса Биография . Проверено 9 июля 2022 г.
- ^ Чан, П; Чан, Д; К, К; Ю, М; Чунг, Дж; Ченг, А. (май 2001 г.). «Оценка методов экстракции из тканей, залитых парафином, для ПЦР-амплификации человеческой и вирусной ДНК» . Журнал клинической патологии . 54 (5): 401–403. дои : 10.1136/jcp.54.5.401 . ISSN 0021-9746 . ПМЦ 1731425 . ПМИД 11328843 .