Тест на фиксацию комплемента
| Цель | обнаруживает специфический антиген или антитело |
|---|
Тест на фиксацию комплемента — это иммунологический медицинский тест, который можно использовать для обнаружения присутствия либо специфического антитела , либо специфического антигена пациента в сыворотке , в зависимости от того, происходит ли фиксация комплемента . Его широко использовали для диагностики инфекций, особенно микробов, которые нелегко обнаружить культуральными методами, а также при ревматических заболеваниях. Однако в лабораториях клинической диагностики его в значительной степени вытеснили другие серологические методы, такие как ИФА и методы обнаружения патогенов на основе ДНК, особенно ПЦР .
Процесс
[ редактировать ]Система комплемента – это система сывороточных белков, которые реагируют с комплексами антиген-антитело. Если эта реакция происходит на поверхности клетки, это приведет к образованию трансмембранных пор и, следовательно, к разрушению клетки. Основные этапы теста фиксации комплемента следующие: [ 1 ]
- У пациента отделяют сыворотку.
- Пациенты, естественно, имеют разные уровни белков комплемента в сыворотке. Чтобы свести на нет любое влияние, которое это может оказать на тест, белки комплемента в сыворотке пациента должны быть разрушены и заменены известным количеством стандартизированных белков комплемента.
- Сыворотка нагревается таким образом, что все содержащиеся в ней белки комплемента, но ни одно антитело, не разрушаются. (Это возможно, поскольку белки комплемента гораздо более подвержены разрушению под воздействием тепла, чем антитела.)
- К сыворотке добавляют известное количество стандартных белков комплемента. (Эти белки часто получают из сыворотки морских свинок.)
- Интересующий антиген добавляется в сыворотку.
- ( Овечьи эритроциты sRBC) [ 2 ] которые были предварительно связаны с антителами против sRBC, добавляют к сыворотке. Тест считается отрицательным, если в этот момент раствор становится розовым, и положительным в противном случае.
Если сыворотка пациента содержит антитела против интересующего антигена, они связываются с антигеном на этапе 3 с образованием комплексов антиген-антитело. Белки комплемента вступят в реакцию с этими комплексами и истощатся. Таким образом, когда на этапе 4 добавляются комплексы sRBC-антитело, в сыворотке не остается комплемента. Однако если антител против интересующего антигена нет, комплемент не будет истощен и он будет реагировать с комплексами sRBC-антитело, добавленными на этапе 4, лизис sRBC и выливание их содержимого в раствор, тем самым окрашивая раствор в розовый цвет. . [ 1 ]
Тестирование на антиген
[ редактировать ]Хотя обнаружение антител является наиболее распространенным форматом теста, в равной степени возможно проверить наличие антигена. В этом случае в сыворотку пациента добавляют специфические антитела, индуцирующие образование комплексов; добавление комплемента и индикатора sRBC осуществляют, как и раньше. [ нужна ссылка ]
Полуколичественное тестирование
[ редактировать ]Тест можно сделать количественным, установив серию разведений сыворотки пациента и определив самый высокий коэффициент разведения, который все равно даст положительный результат теста на МВ. Этот коэффициент разведения соответствует титру . [ нужна ссылка ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б «Викторина по анимации 4 — Тест на фиксацию комплемента» . сайт highed.mheducation.com .
- ^ К. Ваман Рао (2005). Иммунология: учебник . Alpha Science Int'l Ltd., стр. 112–. ISBN 978-1-84265-255-8 . Проверено 3 декабря 2010 г.
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Комплемент+фиксация+тесты в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)