Радиальная иммунодиффузия

Радиальная иммунодиффузия (РИД), иммунодиффузия Манчини или анализ одиночной радиальной иммунодиффузии - это метод иммунодиффузии, в иммунологии для определения количества или концентрации антигена используемый в образце.

Описание

Подготовка

Раствор, содержащий антитела , добавляют к нагретой среде, такой как агар или агароза, растворенная в забуференном физиологическом растворе . Затем расплавленную среду выливают на предметное стекло микроскопа или в открытый контейнер, например чашку Петри , и дают ему остыть и образовать гель . Затем раствор, содержащий антиген, помещают в лунку, пробитую в гель. Затем предметное стекло или контейнер накрывают, закрывают или помещают в коробку для влажности, чтобы предотвратить испарение. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 4 ]}

Антиген радиально диффундирует в среду, образуя круг преципитина , который отмечает границу между антителом и антигеном. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]} Диаметр комплексы кружка увеличивается со временем по мере того, как антиген диффундирует в среду, реагирует с антителом и образует нерастворимые преципитина . ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 5 ]} Количественное определение антигена осуществляется путем измерения диаметра круга преципитации и сравнения его с диаметрами кругов преципитации, образованных известными количествами или концентрациями антигена. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 6 ]}

Комплексы антиген-антитело малы по размеру и растворимы при избытке антигена. Следовательно, осадки вблизи центра круга обычно менее плотные, чем у внешнего края круга, где антиген менее сконцентрирован. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}

Расширение круга достигает конечной точки и прекращается, когда свободный антиген истощается и когда антиген и антитело достигают эквивалентности. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 5 ]} Однако четкость и плотность внешнего края круга могут продолжать увеличиваться после того, как круг перестанет расширяться. ^{[ 1 ]}

Интерпретация

Для большинства антигенов площадь и квадрат диаметра круга на конце круга прямо пропорциональны исходному количеству антигена и обратно пропорциональны концентрации антитела. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 5 ]} Следовательно, график , на котором сравниваются количества или концентрации антигена в исходных образцах с площадями или квадратами диаметров кругов преципитата на наиболее подходящем линейном графике, обычно будет прямой линией после того, как все круги достигнут своих конечных точек ( метод эквивалентности). ^{[ 1 ]}^{[ 3 ]}^{[ 5 ]}^{[ 6 ]}

Круги, которые создают небольшие количества антигена, достигают своих конечных точек раньше, чем круги, которые создают большие количества. ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 5 ]} Следовательно, если площади или диаметры кругов измеряются в то время, когда некоторые, но не все круги перестали расширяться, такой график будет прямым на участке, лунки которого изначально содержали меньшие количества или концентрации антигена, и будет изогнутым на участке, где лунки содержали большие количества или концентрации. ^{[ 1 ]}^{[ 5 ]}

Пока круги еще расширяются, график, сравнивающий начальные количества или концентрации антигена в логарифмическом масштабе с диаметрами или площадями кругов в линейном масштабе, может представлять собой прямую линию (кинетический метод). ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]}^{[ 4 ]}^{[ 5 ]}^{[ 6 ]}^{[ 9 ]} Однако во время расширения кружки выделения меньше и менее различимы, чем после окончания расширения. ^{[ 1 ]}^{[ 5 ]} Кроме того, температура влияет на скорость расширения, но не влияет на размер круга в его конечной точке. ^{[ 1 ]} Кроме того, диапазон диаметров кругов для одних и тех же начальных количеств или концентраций антигена меньше, а некоторые круги увеличиваются, чем после того, как все круги достигли своих конечных точек. ^{[ 1 ]}^{[ 5 ]}

Количество и концентрация нерастворимых комплексов антиген-антитело на внешнем крае круга со временем увеличиваются. ^{[ 1 ]} Таким образом, четкость и плотность внешнего края круга со временем также увеличиваются. ^{[ 1 ]} В результате измерения размеров кругов и графики, построенные на основе этих измерений, часто оказываются более точными после того, как круги перестали расширяться, чем когда круги все еще увеличиваются. ^{[ 1 ]} По этим причинам часто более желательно проводить измерения после того, как все круги достигли своих конечных точек, чем проводить измерения, пока некоторые или все круги все еще увеличиваются. ^{[ 1 ]}

Измерения больших кругов более точны, чем измерения маленьких. ^{[ 1 ]}^{[ 10 ]} Поэтому часто желательно отрегулировать концентрацию антител и начальные количества антигена, чтобы гарантировать, что кольца преципитации будут большими. ^{[ 1 ]}

Методы радиальной иммунодиффузии

Концентрацию антигена в образце, концентрация которого неизвестна, можно определить, найдя его местоположение на графике, показывающем диаметры кругов преципитации, образованных тремя или более эталонными образцами с известными концентрациями антигена. Два метода часто создают на таких графиках прямые линии. Эти методы создают эти линии на разных типах графиков.

Методы и их графики:

Измерение кругов, пока все они расширяются (кинетический метод): построение графика логарифмов начальных концентраций антигена в зависимости от диаметров кругов преципитации на наиболее подходящем полулогарифмическом графике . ^{[ 4 ]}
Измерительные круги после того, как все достигают своих конечных точек (метод эквивалентности): график, отображающий начальные концентрации антигена в зависимости от квадратов диаметров кругов преципитина на линейном графике наилучшего соответствия . ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}

Примечания

^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж ^к ^л ^м ^н ^тот ^п ^д ^р ^с ^т ^в Берн (1974).
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж Дэвис, Северная Каролина, Хо М (1976). «Глава 2: Количественное определение иммуноглобулинов: радиальная иммунодиффузия» . В Роуз Н., Фридман Х. (ред.). Руководство по клинической иммунологии . Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии . стр. 5–8. ISBN 0-914826-09-3 . LCCN 76017595 . OCLC 1036571523 . Проверено 14 июня 2019 г. - из Интернет-архива .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д Стэнли (2002)
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC/MIP (2002).
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я
Несколько источников:
- Манчини Дж., Карбонара А.О., Хереманс Дж.Ф. (сентябрь 1965 г.). «Иммунохимическое количественное определение антигенов методом однократной радиальной иммунодиффузии» . Иммунохимия . 2 (3). Оксфорд , Англия : Pergamon Press : 235–254. дои : 10.1016/0019-2791(65)90004-2 . ISSN 0019-2791 . LCCN 64009461 . OCLC 53097967 . ПМИД 4956917 . Архивировано из оригинала 17 декабря 2023 г. Получено 17 декабря 2023 г. - через Academia.edu .
- Манчини Дж., Верман Дж. П., Карбонара А. О., Хереманс Дж. Ф. (декабрь 1964 г.). «Однорадиально-диффузионный метод иммунологического количественного определения белков» . В Питерсе, Хьюберт (ред.). Протиды биологических жидкостей: материалы 11-го коллоквиума, Брюгге, Бельгия (1963) . Амстердам , Нидерланды : Elsevier . стр. 370–373. OCLC 25285708 . Проверено 8 июля 2020 г. - через Google Книги .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с Парвез З. (1984). «Обзор иммунологических методов» . Иммуноанализы в тестировании коагуляции . Нью-Йорк: Springer-Verlag . стр. 21–22. дои : 10.1007/978-1-4615-7225-1_5 . ISBN 9781461572251 . LCCN 83020115 . OCLC 851823206 . Архивировано из оригинала 08 июля 2020 г. Проверено 8 июля 2020 г. .
^ Берн (1974) , с. 65, рис. 4; п. 66, текст: «На рисунке 4 квадраты диаметров отложены по линейной ординате, а концентрации — по линейной абсциссе..... здесь линейность проявляется на постепенно увеличивающихся участках кривой, что соответствует прекращению роста. график линеен во всем диапазоне эквивалентности..."
^ Стэнли (2002), с. 174, рис. 12-6.
^ Фэйи Дж.Л., МакКелви Э.М. (1 января 1965 г.). «Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов в чашках с антителами и агаром» (PDF) . Журнал иммунологии . 94 (1). Балтимор, Мэриленд: Williams & Wilkins Co .: 84–90. doi : 10.4049/jimmunol.94.1.84 . ISSN 0022-1767 . LCCN 52052893 . OCLC 802743767 . ПМИД 14253527 . S2CID 33388724 . Архивировано из оригинала 25 февраля 2018 г. Проверено 8 июля 2007 г. .
^ Калфф М.В. (март 1970 г.). «Количественное определение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови методом однократной радиальной иммунодиффузии» . Клиническая биохимия . 3 (1). Эльзевир : 91–104. дои : 10.1016/S0009-9120(70)80011-X . ПМИД 4110625 . Архивировано из оригинала 10 января 2021 г. Получено 10 января 2021 г. - через ScienceDirect . 4. принимали коэффициент вариации определения иммуноглобулина . в одной партии исследуемой сыворотки, многократно определяемый количественно в течение десяти месяцев За меру воспроизводимости метода Этот коэффициент составил для IgG 5,8% 8,5%, для IgA и для IgM 4,4% . Уровни иммуноглобулинов в этой тестируемой сыворотке находились в среднем диапазоне калибровочных линий . Точность . метода возрастает с увеличением высоты калибровочной линии .
^ Берн (1974) , с. 63, рис. 2; п. 63, текст: «На рисунке 2 концентрация представлена в виде логарифмической ординаты, а средний диаметр — в виде линейной оси абсцисс.... сначала график линейный».
^ Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC / MIP (2002) :
«6. Определите концентрацию неизвестной тестируемой сыворотки, нарисовав стандартную кривую — нанося график известных концентраций эталонных сывороток в зависимости от их диаметров диффузии на полулогарифмической бумаге с 2 циклами (см. пример).
7. График данных эталонной сыворотки должен представлять собой ПРЯМУЮ ЛИНИЮ, и концентрация IgG в тестируемой сыворотке может быть точно определена».

Ссылки

Берн Б.Х. (1 января 1974 г.). «Различные методологии и уравнения, используемые при количественном определении иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии - сравнительная оценка известных и коммерческих методов» (PDF) . Клиническая химия . 20 (1). Вашингтон, округ Колумбия: Американская ассоциация клинической химии : 61–69. дои : 10.1093/клинчем/20.1.61 . ISSN 0095-1137 . LCCN 58002529 . OCLC 43430009 . ПМИД 4203461 . Архивировано из оригинала (PDF) 8 августа 2017 г. Проверено 15 ноября 2015 г.
Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC/MIP (2002). «II. Лабораторная работа: Б. Радиальная иммунодиффузия» . Упражнение 3: Антиген-антитело I. Новый Орлеан, Луизиана: Медицинский факультет Университета штата Луизиана : факультет микробиологии, иммунологии и паразитологии. Архивировано из оригинала 4 августа 2004 г. Проверено 14 ноября 2015 г.
Стэнли Дж (2002). «Глава 12: Преципитация: однократная радиальная иммунодиффузия: Лабораторный метод 12-1: Тест радиальной иммунодиффузии» . Основы иммунологии и серологии . Олбани, Нью-Йорк: Отделение Дельмара компании Thomson Learning . стр. 172–174. ISBN 978-0914826255 . LCCN 2002280630 . OCLC 1149023866 . Проверено 15 мая 2017 г. - из Интернет-архива .

Дальнейшее чтение

Манчини Дж. (29 июня 1992 г.). «Классическое издание этой недели: усовершенствование ангелотрона» (PDF) . Текущее содержание . 35 (26): 9. ISSN 0272-1449 . OCLC 6568530 . Архивировано (PDF) из оригинала 7 августа 2017 г. Проверено 7 августа 2017 г. .
Ритцманн SE (июль 1978 г.). «Возвращение к радиальной иммунодиффузии. Часть 1» (PDF) . Лабораторная медицина . 9 (7). Американское общество клинической патологии и издательство Оксфордского университета : 23–33. дои : 10.1093/labmed/9.7.23 . ISSN 1943-7730 . OCLC 614490269 . Архивировано из оригинала (PDF) 29 октября 2017 г. Проверено 29 октября 2017 г.
Ритцманн SE (август 1978 г.). «Возвращение к радиальной иммунодиффузии. Часть 2. Применение и интерпретация анализов RID» (PDF) . Лабораторная медицина . 9 (8). Американское общество клинической патологии и издательство Оксфордского университета : 27–40. дои : 10.1093/labmed/9.8.27 . ISSN 1943-7730 . OCLC 614490269 . Архивировано из оригинала (PDF) 7 августа 2017 г. Проверено 7 августа 2017 г.
Тейлор Р.Н., Фулфорд К.М., Хуонг А.Ю. (июль 1978 г.). «Сравнение кинетических и конечных диффузионных методов количественного определения иммуноглобулинов сыворотки человека» . Журнал клинической микробиологии . 8 (1). Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии : 23–27. doi : 10.1128/jcm.8.1.23-27.1978 . ISSN 0095-1137 . OCLC 909257436 . ПМК 275108 . ПМИД 97309 .

Внешние ссылки

Бхаттачарджи С (29 ноября 2013 г.). «Радиальная иммунодиффузия» (видео) . Биология Сёму . Архивировано из оригинала 21 декабря 2021 г. Проверено 27 июня 2016 г. - через YouTube . Вводное видео по теории и технике радиальной иммунодиффузии (10:21 минут).
Шейх С. (24 сентября 2015 г.). «Радиальная иммунодиффузия (Учебный комплект)» (видео) . Архивировано из оригинала 21 декабря 2021 г. Проверено 13 мая 2017 г. - через YouTube . Вводное видео, демонстрирующее технику радиальной иммунодиффузии (3:43 минуты).
«Радиальная иммунодиффузия (методика Манчини)» (видео) . Фрэнк Лекции . 08.08.2017. Архивировано из оригинала 21 декабря 2021 г. Проверено 31 июля 2020 г. - через YouTube . Вводная лекция/слайд-шоу, иллюстрирующее теорию и технику радиальной иммунодиффузии. (6:56 минут)
«Радиальная иммунодиффузия» . Вашингтон, округ Колумбия: Edvotek, Inc. 2017. Архивировано из оригинала (фотография) 7 августа 2017 г. Проверено 7 августа 2017 г. Фотография кружков преципитата в чашке Петри во время радиальной иммунодиффузии.

[Berne1-1] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж ^к ^л ^м ^н ^тот ^п ^д ^р ^с ^т ^в Берн (1974).

[Rose-2] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж Дэвис, Северная Каролина, Хо М (1976). «Глава 2: Количественное определение иммуноглобулинов: радиальная иммунодиффузия» . В Роуз Н., Фридман Х. (ред.). Руководство по клинической иммунологии . Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии . стр. 5–8. ISBN 0-914826-09-3 . LCCN 76017595 . OCLC 1036571523 . Проверено 14 июня 2019 г. - из Интернет-архива .

[Stanley-3] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д Стэнли (2002)

[LSUMC-4] Перейти обратно: ^а ^б ^с Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC/MIP (2002).

[Mancini-5] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я Несколько источников:
Манчини Дж., Карбонара А.О., Хереманс Дж.Ф. (сентябрь 1965 г.). «Иммунохимическое количественное определение антигенов методом однократной радиальной иммунодиффузии» . Иммунохимия . 2 (3). Оксфорд , Англия : Pergamon Press : 235–254. дои : 10.1016/0019-2791(65)90004-2 . ISSN 0019-2791 . LCCN 64009461 . OCLC 53097967 . ПМИД 4956917 . Архивировано из оригинала 17 декабря 2023 г. Получено 17 декабря 2023 г. - через Academia.edu .

Манчини Дж., Верман Дж. П., Карбонара А. О., Хереманс Дж. Ф. (декабрь 1964 г.). «Однорадиально-диффузионный метод иммунологического количественного определения белков» . В Питерсе, Хьюберт (ред.). Протиды биологических жидкостей: материалы 11-го коллоквиума, Брюгге, Бельгия (1963) . Амстердам , Нидерланды : Elsevier . стр. 370–373. OCLC 25285708 . Проверено 8 июля 2020 г. - через Google Книги .

[6] Манчини Дж., Карбонара А.О., Хереманс Дж.Ф. (сентябрь 1965 г.). «Иммунохимическое количественное определение антигенов методом однократной радиальной иммунодиффузии» . Иммунохимия . 2 (3). Оксфорд , Англия : Pergamon Press : 235–254. дои : 10.1016/0019-2791(65)90004-2 . ISSN 0019-2791 . LCCN 64009461 . OCLC 53097967 . ПМИД 4956917 . Архивировано из оригинала 17 декабря 2023 г. Получено 17 декабря 2023 г. - через Academia.edu .

[7] Манчини Дж., Верман Дж. П., Карбонара А. О., Хереманс Дж. Ф. (декабрь 1964 г.). «Однорадиально-диффузионный метод иммунологического количественного определения белков» . В Питерсе, Хьюберт (ред.). Протиды биологических жидкостей: материалы 11-го коллоквиума, Брюгге, Бельгия (1963) . Амстердам , Нидерланды : Elsevier . стр. 370–373. OCLC 25285708 . Проверено 8 июля 2020 г. - через Google Книги .

[Parvez-6] Перейти обратно: ^а ^б ^с Парвез З. (1984). «Обзор иммунологических методов» . Иммуноанализы в тестировании коагуляции . Нью-Йорк: Springer-Verlag . стр. 21–22. дои : 10.1007/978-1-4615-7225-1_5 . ISBN 9781461572251 . LCCN 83020115 . OCLC 851823206 . Архивировано из оригинала 08 июля 2020 г. Проверено 8 июля 2020 г. .

[7] Берн (1974) , с. 65, рис. 4; п. 66, текст: «На рисунке 4 квадраты диаметров отложены по линейной ординате, а концентрации — по линейной абсциссе..... здесь линейность проявляется на постепенно увеличивающихся участках кривой, что соответствует прекращению роста. график линеен во всем диапазоне эквивалентности..."

[8] Стэнли (2002), с. 174, рис. 12-6.

[pmid14253527-9] Фэйи Дж.Л., МакКелви Э.М. (1 января 1965 г.). «Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов в чашках с антителами и агаром» (PDF) . Журнал иммунологии . 94 (1). Балтимор, Мэриленд: Williams & Wilkins Co .: 84–90. doi : 10.4049/jimmunol.94.1.84 . ISSN 0022-1767 . LCCN 52052893 . OCLC 802743767 . ПМИД 14253527 . S2CID 33388724 . Архивировано из оригинала 25 февраля 2018 г. Проверено 8 июля 2007 г. .

[10] Калфф М.В. (март 1970 г.). «Количественное определение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови методом однократной радиальной иммунодиффузии» . Клиническая биохимия . 3 (1). Эльзевир : 91–104. дои : 10.1016/S0009-9120(70)80011-X . ПМИД 4110625 . Архивировано из оригинала 10 января 2021 г. Получено 10 января 2021 г. - через ScienceDirect . 4. принимали коэффициент вариации определения иммуноглобулина . в одной партии исследуемой сыворотки, многократно определяемый количественно в течение десяти месяцев За меру воспроизводимости метода Этот коэффициент составил для IgG 5,8% 8,5%, для IgA и для IgM 4,4% . Уровни иммуноглобулинов в этой тестируемой сыворотке находились в среднем диапазоне калибровочных линий . Точность . метода возрастает с увеличением высоты калибровочной линии .

[11] Берн (1974) , с. 63, рис. 2; п. 63, текст: «На рисунке 2 концентрация представлена в виде логарифмической ординаты, а средний диаметр — в виде линейной оси абсцисс.... сначала график линейный».

[12] Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC / MIP (2002) :
«6. Определите концентрацию неизвестной тестируемой сыворотки, нарисовав стандартную кривую — нанося график известных концентраций эталонных сывороток в зависимости от их диаметров диффузии на полулогарифмической бумаге с 2 циклами (см. пример).
7. График данных эталонной сыворотки должен представлять собой ПРЯМУЮ ЛИНИЮ, и концентрация IgG в тестируемой сыворотке может быть точно определена».

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

v т и Медицинские тесты, используемые в иммунологии ( CPT 86000–86849)
Иммунопреципитация	Иммунопреципитация хроматина Иммунодиффузия Двойная иммунодиффузия по Оухтерлони Радиальная иммунодиффузия Иммуноэлектрофорез Контриммуноэлектрофорез
Иммуноанализ	Хемилюминесцентный иммуноанализ ИФА ЭЛИСпот Метод иммуноферментного анализа РАСТ-тест Радиоиммуноанализ Радиосвязывающий анализ Иммунофлуоресценция
Агглютинация	Гемагглютинация / Гемагглютинин Тест Кумбса Тест на фиксацию латекса
Другой	Диагностическая иммунология Нефелометрия Тест на фиксацию комплемента Иммуноцитохимия Иммуногистохимия Прямое флуоресцентное антитело Картирование эпитопов Тест на аллергию на коже Патч-тест Общая активность комплемента БАЛЬЗАМ