пГЛО
Справа: бактерии, трансформированные с помощью pGLO, визуализированные в ультрафиолетовом свете.
Справа: бактерии, трансформированные с помощью pGLO, подвергнутые воздействию ампициллина, арабинозы и ультрафиолетового света.
Плазмида pGLO — это сконструированная плазмида, используемая в биотехнологии в качестве вектора для создания генетически модифицированных организмов . Плазмида содержит несколько репортерных генов , в первую очередь зеленый флуоресцентный белок (GFP) и ген устойчивости к ампициллину. GFP был выделен из медузы Aequorea victoria . Поскольку он имеет общий двунаправленный промотор с геном метаболизма арабинозы , ген GFP экспрессируется в присутствии арабинозы, что заставляет трансгенный организм проявлять свою флуоресценцию под УФ-светом . GFP можно индуцировать в бактериях, содержащих плазмиду pGLO, путем выращивания их на чашках с арабинозой. pGLO производится компанией Bio-Rad Laboratories .
Структура
[ редактировать ]pGLO состоит из трех генов, которые соединены вместе с помощью технологии рекомбинантной ДНК. Они заключаются в следующем:
- Bla , который кодирует фермент бета-лактамазу, придающую трансформированным бактериям устойчивость к антибиотикам семейства бета-лактамов (например, семейства пенициллинов ).
- araC , область промотора, которая регулирует экспрессию GFP (в частности, ген GFP будет экспрессироваться только в присутствии арабинозы )
- GFP , зеленый флуоресцентный белок, который дает зеленое свечение, если клетки производят этот тип белка.
Как и большинство других кольцевых плазмид, плазмида pGLO содержит точку начала репликации (ori), которая представляет собой область плазмиды, где будет происходить репликация.Плазмида pGLO прославилась французскими исследователями , которые использовали ее для получения зеленого флуоресцентного кролика по имени Альба .
Другие особенности pGLO, как и большинства других плазмид, включают селектируемый маркер и MCS ( сайт множественного клонирования ), расположенный на конце гена GFP. Плазмида имеет длину 5371 пару оснований . В суперскрученной форме он работает в агарозном геле в диапазоне 4200–4500. [1] [2] [3]
Открытие GFP
[ редактировать ]Ген GFP впервые обнаружил Осаму Симомура. [4] и его команда в 1962 году, изучая медузу Aequorea victoria , под зонтиком которой имеется кольцо синего света . Шимомура и его команда выделили белок экворин из тысяч медуз, пока не собрали достаточное количество для полного анализа белка. Именно благодаря изучению экворина Шимомура обнаружил небольшое количество GFP, который светится зеленым, когда экворин излучает синий свет. Успешно обнаружив, как GFP работает с экворином у медуз, он отложил его для изучения биолюминесценции у других организмов.
В 1994 году Марти Чалфи [4] и его команда смогли успешно создать бактерии и круглых червей, экспрессирующих белок GFP. Вскоре после этого Роджер Цзянь [5] и его команда смогли создать мутант GFP, который может излучать разные цвета, а не только зеленый.
Трое учёных получили Нобелевскую премию по химии за 2008 год. [6] за открытие и разработку зеленого флуоресцентного белка GFP.
Ссылки
[ редактировать ]- ^ «Электрофорез белков GFP Biotechnology Explorer™: расширение набора для бактериальной трансформации pGLO™» (PDF) . Архивировано из оригинала (PDF) 24 февраля 2012 г.
- ^ Эйхбаум К.Г., Айер Р., Раве Д.П., Матье К., Изековиц Р.А. (июнь 1994 г.). «Ограничение чувствительности к гамма-интерферону и базальной экспрессии миелоидного гена Fc гамма R1b человека опосредовано функциональным сайтом PU.1 и консенсусом инициатора транскрипции» . Журнал экспериментальной медицины . 179 (6): 1985–96. дои : 10.1084/jem.179.6.1985 . ПМК 2191524 . ПМИД 8195721 .
- ^ Эйхбаум К., Хини Д., Раве Д., Чунг М., Дэвидсон М., Эпштейн Дж., Изековиц Р.А. (ноябрь 1997 г.). «Промотор маннозного рецептора мышиных макрофагов регулируется факторами транскрипции PU.1 и SP1» . Кровь . 90 (10): 4135–43. дои : 10.1182/blood.V90.10.4135 . ПМИД 9354684 .
- ^ Jump up to: а б Ферри, Джорджина (2018). «Осаму Симомура» . Природа . 563 : 627. дои : 10.1038/d41586-018-07401-1 . S2CID 53775369 – через Гейла в контексте: Наука.
- ^ «История зеленого флуоресцентного белка» . Conncoll.edu .
- ^ «Нобелевская премия по химии 2008» . NobelPrize.org . Проверено 19 октября 2020 г.
 | Эта о генетике статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее . |