✖


Jump to content

Экворин

Экворин 1
экворина Ленточная диаграмма из PDB 1ej3 с простетической группой целентеразина синего цвета
Идентификаторы
Организм Медуза
Символ Н/Д
ЮниПрот P07164
Другие данные
Номер ЕС 1.13.12.5
Искать
StructuresSwiss-model
DomainsInterPro

Экворин представляет собой активируемый кальцием фотопротеин , выделенный из гидрозойного растения Aequorea victoria . [1] Его биолюминесценция была изучена за десятилетия до того, как белок был выделен из животного Осаму Шимомура в 1962 году. [2] У животных этот белок вместе с зеленым флуоресцентным белком производит зеленый свет путем резонансной передачи энергии , тогда как экворин сам по себе генерирует синий свет.

Обсуждения «ДНК медузы», которая может создавать «светящиеся» животные, часто относятся к трансгенным животным , которые экспрессируют зеленый флуоресцентный белок, а не экворин, хотя оба изначально происходят от одного и того же животного.

Апоэкворин, белковая часть аэкворина, входит в состав пищевой добавки Преваген. США Федеральная торговая комиссия (FTC) обвинила производителя в ложной рекламе заявлений об улучшении памяти.

Открытие

[ редактировать ]

Работа над экворином началась с Э. Ньютона Харви в 1921 году. [3] Хотя Харви не смог продемонстрировать классическую реакцию люцифераза - люциферин , он показал, что вода может производить свет из высушенных фотоцитов и что свет может производиться даже в отсутствие кислорода. Позже, в 1961 году, Осаму Симомура начал работу над биолюминесценцией Aequorea . Это включало утомительный сбор десятков тысяч медуз в доках Фрайдей-Харбор, штат Вашингтон . [1] Было установлено, что свет можно получить из экстрактов морской воды, а точнее, кальция . [2] Также было отмечено, что во время экстракции животное излучает зеленый свет благодаря наличию зеленого флуоресцентного белка , который меняет родной синий свет экворина на зеленый. [4]

Основное внимание в его работах уделялось биолюминесценции. [5] Шимомура и двое других, Мартин Чалфи и Роджер Циен , были удостоены Нобелевской премии в 2008 году за работу над зелеными флуоресцентными белками .

Структура

[ редактировать ]

Экворин представляет собой голопротеин , состоящий из двух отдельных единиц: апопротеина , называемого апоэкворином , который имеет приблизительную молекулярную массу 21 кДа , и простетической группы целентеразина , люциферина. [6] То есть апоэкворин — это фермент, вырабатываемый в фотоцитах животного, а целентеразин — это субстрат, окисление которого катализирует фермент. Когда целентеразин связан, его называют экворином. Примечательно, что белок содержит три мотива руки EF , которые функционируют как сайты связывания для Ca. 2+ ионы. [7] Белок является членом суперсемейства кальцийсвязывающих белков, насчитывающего около 66 подсемейств. [8]

Кристаллическая структура показала, что экворин связывает целентеразин и кислород в форме пероксида целентеразин -2-гидропероксида. [9] Сайт связывания первых двух атомов кальция имеет в 20 раз большее сродство к кальцию, чем третий сайт. [10] Однако ранее утверждалось, что только две EF-руки связывают кальций. [11] были подвергнуты сомнению, когда более поздние структуры показали, что все три сайта действительно могут связывать кальций. [12] Таким образом, исследования титрования показывают, что все три сайта связывания кальция активны, но для запуска ферментативной реакции необходимы только два иона. [13]

Другие исследования показали наличие внутренней цистеиновой связи , поддерживающей структуру экворина. [14] Это также объяснило необходимость использования тиолового реагента, такого как бета-меркаптоэтанол, для регенерации белка, поскольку такие реагенты ослабляют сульфгидрильные связи между остатками цистеина , ускоряя регенерацию экворина.

Химическая характеристика экворина указывает на то, что белок в некоторой степени устойчив к суровым воздействиям. Экворин термостойкий. [15] При выдерживании при 95°C в течение 2 минут белок потерял только 25% активности. Денатуранты, такие как 6-М мочевина или 4-М гидрохлорид гуанидина, не разрушали белок.

Генетика

[ редактировать ]

Экворин предположительно закодирован в геноме Aequorea. По меньшей мере четыре копии гена были извлечены в виде кДНК . из животного [16] [17] Поскольку геном не секвенирован, неясно, могут ли варианты кДНК отвечать за все изоформы белка. [18]

Механизм действия

[ редактировать ]

Ранние исследования биолюминесценции Aequorea, проведенные Э. Ньютоном Харви, отметили, что биолюминесценция проявляется в виде кольца вокруг колокола и возникает даже в отсутствие воздуха. [19] Это было примечательно, поскольку для большинства реакций биолюминесценции требуется кислород , и это привело к идее, что животные каким-то образом запасают кислород. [20] Позже было обнаружено, что апопротеин может стабильно связывать целентеразин-2-гидропероксид, и для регенерации до этой активной формы экворина необходим кислород. [21] Однако в присутствии ионов кальция белок претерпевает конформационные изменения и превращает свою простетическую группу, целентеразин-2-гидропероксид, в возбужденный целентерамид и CO 2 . [22] Когда возбужденный целентерамид релаксирует в основное состояние, синий свет ( длина волны излучается 465 нм). До того, как целентерамид будет заменен, весь белок все еще флуоресцирует синим цветом. [23] [24] из-за связи между биолюминесценцией и флуоресценцией это свойство в конечном итоге сыграло важную роль в открытии люциферина целентеразина . [25]

Приложения

[ редактировать ]

Поскольку излучаемый свет можно легко обнаружить с помощью люминометра , экворин стал полезным инструментом в молекулярной биологии для измерения внутриклеточного кальция. 2+ уровни. [26] Ранняя успешная очистка экворина привела к первым экспериментам по введению белка в ткани живых животных с целью визуализации физиологического высвобождения кальция в мышечных волокнах ракушки. [27] С тех пор белок широко использовался во многих модельных биологических системах , включая рыбок данио , [28] крысы , мыши и культивируемые клетки . [29] [30] [31] [32]

аэкворина, Культивируемые клетки, экспрессирующие ген могут эффективно синтезировать апоэкворин; однако рекомбинантная экспрессия дает только апопротеин . Поэтому необходимо добавить целентеразин в культуральную среду клеток, чтобы получить функциональный белок и, таким образом, использовать его синее световое излучение для измерения Ca. 2+ концентрация. Целентеразин является гидрофобной молекулой и поэтому легко проникает через клеточные стенки растений и грибов , а также через плазматическую мембрану высших эукариот, что делает экворин пригодным в качестве Ca 2+ репортер в растениях, грибах и клетках млекопитающих. [33] [34]

Экворин имеет ряд преимуществ перед другими кальциевыми препаратами. 2+ индикаторы. Поскольку белок имеет большие размеры, он имеет низкую скорость утечки из клеток по сравнению с липофильными красителями, такими как DiI . В нем отсутствуют явления внутриклеточной компартментализации или секвестрации, как это часто наблюдается для красителей, чувствительных к напряжению , и он не нарушает функции клеток или развитие эмбриона. Более того, свет, излучаемый при окислении целентеразина, не зависит от какого-либо оптического возбуждения, поэтому устраняются проблемы автофлуоресценции. [35] Основным ограничением экворина является то, что простетическая группа целентеразина необратимо расходуется на производство света и требует постоянного добавления целентеразина в среду. Такие проблемы привели к разработке других генетически кодируемых датчиков кальция, включая кальмодулина на основе датчик камелеон , [36] разработанный Роджером Циеном , и тропонина датчик на основе TN-XXL , разработанный Оливером Грисбеком. [37]

[ редактировать ]

Апоэкворин входит в состав препарата «Преваген», который продается компанией Quincy Bioscience как добавка для улучшения памяти. США В 2017 году Федеральная торговая комиссия (FTC) обвинила производителя в ложной рекламе о том, что продукт улучшает память, обеспечивает когнитивные преимущества и «клинически доказано» свою эффективность. [38] По мнению Федеральной торговой комиссии, «маркетологи Prevagen охотились на страхах пожилых потребителей, испытывающих возрастную потерю памяти ». Куинси заявил, что будет оспаривать обвинения. [39] [40] [41]

До подачи иска клиническое исследование, проведенное исследователями, нанятыми Quincy Bioscience, «не выявило никаких общих преимуществ по сравнению с плацебо для его основных конечных результатов, включая память и познание», в то время как в рекламе компании ошибочно цитировались несколько оспариваемых анализов подгрупп , которые показали небольшие улучшения. [42] [43]

Иск ( Спат и др. против Quincy Bioscience Holding Company, Inc. и др. , дело № 18-cv-12416, штат Нью-Джерси) был отклонен в окружном суде, но апелляция направлена ​​на отмену иска. было оформлено увольнение. Иск был объединен с другим иском против Quincy Pharmaceuticals, Vanderwerff v. Quincy Bioscience (дело № 17-cv-784, D. NJ), которое было основным иском. [44]

21 февраля 2019 года Апелляционный суд США второго округа постановил, что Федеральная торговая комиссия и штат Нью-Йорк могут подать иск против Quincy Bioscience за ее утверждения о том, что Prevagen может улучшить память. Приказ был вынесен менее чем через две недели после того, как стороны представили дело в коллегии из трех судей округа, где юристы компании признали, что они «не оспаривают тот факт, что если вы посмотрите на всех 211 человек, завершивших исследование, не будет обнаружено статистически значимых результатов». разница". Суд решительно отверг обвинения юристов компании в том, что Федеральная торговая комиссия преследовала свои действия по политическим мотивам. [45] [46]

23 марта 2020 года федеральный мировой судья Окружного суда США Южного округа Флориды представил отчет и рекомендации, подтверждающие общенациональный коллективный иск для класса потребителей, которые приобрели Prevagen в течение предыдущих четырех лет. [47] Суд по делу был назначен на октябрь 2020 года. [47] [48]

По состоянию на 21 сентября 2020 г. Компания Quincy Bioscience согласилась урегулировать претензии о том, что она искажала информацию о своих продуктах Prevagen как о поддерживающих здоровье мозга и помогающих при потере памяти. По условиям соглашения, соответствующие критериям покупатели, подавшие заявку до 26 октября 2020 года на покупки, совершенные в период с 2007 года по 31 июля 2020 года, могут получить возмещение в размере до 70 долларов США. [49]

Доктор Харриет Холл , пишущая для Science-Based Medicine , отметила, что спонсируемое Куинси исследование (известное как «Исследование памяти Мэдисона») было отрицательным, но компания использовала p-хакинг для получения благоприятных результатов. Она написала, что все упомянутые ими исследования безопасности проводились на крысах, а их утверждение о том, что апоэкворин проникает через гематоэнцефалический барьер , основано исключительно на исследованиях на собаках. [50] Американская ассоциация фармацевтов предупреждает, что апоэкворин «вряд ли будет всасываться в значительной степени; вместо этого он распадается на аминокислоты». [51]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Перейти обратно: а б Шимомура О (1995). «Краткая история экворина». Биол. Бык . 189 (1). Биологический бюллетень: 1–5. дои : 10.2307/1542194 . JSTOR   1542194 . PMID   7654844 .
  2. ^ Перейти обратно: а б Шимомура О, Джонсон Ф.Х., Сайга Ю. (1962). «Извлечение, очистка и свойства экворина, биолюминесцентного белка из светящегося гидромедузана Aequorea». J Cell Comp Физиол . 59 (3): 223–39. дои : 10.1002/jcp.1030590302 . ПМИД   13911999 .
  3. ^ Харви Э.Н. (1921). «Исследования биолюминесценции. XIII. Люминесценция кишечнополостных» . Биологический бюллетень . 41 (5): 280–287. дои : 10.2307/1536528 . JSTOR   1536528 . S2CID   10826363 .
  4. ^ Морин Дж.Г., Гастингс Дж.В. (1971). «Перенос энергии в биолюминесцентной системе». Дж. Селл. Физиол . 77 (3): 313–318. дои : 10.1002/jcp.1040770305 . ПМИД   4397528 . S2CID   42494355 .
  5. ^ Шимомура О (2005). «Открытие экворина и зеленого флуоресцентного белка». Дж Микроск . 217 (Часть 1): 1–15. дои : 10.1111/j.0022-2720.2005.01441.x . ПМИД   15655058 . S2CID   36316988 .
  6. ^ Шимомура О, Джонсон Ф.Х. (1978). «Перекисный целентеразин, активная группа фотопротеина экворина» . ПНАС США . 75 (3): 2611–2615. Бибкод : 1978PNAS...75.2611S . дои : 10.1073/pnas.75.6.2611 . ПМЦ   392612 . ПМИД   275832 .
  7. ^ Шарбонно Х., Уолш К.А., Макканн Р.О., Прендергаст Ф.Г., Кормье М.Дж., Ванаман Т.К. (1985). «Аминокислотная последовательность кальций-зависимого фотопротеина экворина». Биохимия . 24 (24): 6762–6771. дои : 10.1021/bi00345a006 . ПМИД   2866797 .
  8. ^ Чжоу Ю, Ян В., Кирбергер М., Ли Х.В., Аяласомаяджула Г., Ян Дж.Дж. (2006). «Прогнозирование кальцийсвязывающих белков EF-руки и анализ бактериальных белков EF-руки». Белки . 65 (3): 643–655. дои : 10.1002/прот.21139 . ПМИД   16981205 . S2CID   8904181 .
  9. ^ Руководитель JF, Иноуе С., Тераниши К., Шимомура О (2000). «Кристаллическая структура фотобелка экворина с разрешением 2,3 Å». Природа . 405 (6784): 372–376. Бибкод : 2000Natur.405..372H . дои : 10.1038/35012659 . ПМИД   10830969 . S2CID   4425033 .
  10. ^ Шимомура О (1995). «Люминесценция экворина вызывается связыванием двух ионов кальция». Биохим. Биофиз. Рез. Коммун . 211 (2): 359–363. дои : 10.1006/bbrc.1995.1821 . ПМИД   7794244 .
  11. ^ Шимомура О (1995). «Люминесценция экворина вызывается связыванием двух ионов кальция». Связь с биохимическими и биофизическими исследованиями . 211 (2): 359–363. дои : 10.1006/bbrc.1995.1821 . ПМИД   7794244 .
  12. ^ Дэн Л., Высоцкий Е.С., Маркова С.В., Лю З.Дж., Ли Дж., Роуз Дж., Ван BC (2005). «Все три Ca2+-связывающие петли фотопротеинов связывают ионы кальция: кристаллические структуры нагруженных кальцием апо-экворина и апо-обелина» . Белковая наука . 14 (3): 663–675. дои : 10.1110/ps.041142905 . ПМК   2279293 . ПМИД   15689515 .
  13. ^ Шимомура О, Иноуе С (1996). «Титрование рекомбинантного экворина хлоридом кальция» . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун . 221 (1): 77–81. дои : 10.1006/bbrc.1996.0548 . ПМИД   8660347 .
  14. ^ Омия Ю., Куроно С., Охаси М., Фаган Т.Ф., Цудзи Ф.И. (1993). «Масс-спектрометрические доказательства наличия дисульфидной связи в регенерации экворина» . ФЭБС Летт . 332 (3): 226–228. дои : 10.1016/0014-5793(93)80637-а . ПМИД   8405461 .
  15. ^ Иноуе С (2004). «Синий флуоресцентный белок из чувствительного к кальцию фотопротеина экворина представляет собой термостойкий фермент, катализирующий окисление целентеразина» . ФЭБС Летт . 577 (1–2): 105–110. дои : 10.1016/j.febslet.2004.09.078 . ПМИД   15527769 .
  16. ^ Прашер Д., Макканн Р.О., Кормье М.Дж. (1985). «Клонирование и экспрессия кДНК, кодирующей экворин, биолюминесцентный кальцийсвязывающий белок». Биохим. Биофиз. Рез. Коммун . 126 (3): 1259–68. дои : 10.1016/0006-291X(85)90321-3 . ПМИД   2579647 .
  17. ^ Иноуе С., Ногучи М., Сакаки Ю., Такаги Ю., Мията Т., Иванага С., Мията Т., Цудзи Ф.И. (1985). «Клонирование и анализ последовательности кДНК люминесцентного белка экворина» . Учеб. Натл. акад. наук. США . 82 (10): 3154–58. Бибкод : 1985PNAS...82.3154I . дои : 10.1073/pnas.82.10.3154 . ПМЦ   397733 . ПМИД   3858813 .
  18. ^ Масуда Х, Такенака Ю, Шикамото Ю, Кагава М, Мизуно Х, Цудзи Ф.И. (2003). «Хроматография изоформ рекомбинантного апоаекворина и способ получения экворина». Экспр. белка Пуриф . 31 (2): 181–187. дои : 10.1016/s1046-5928(03)00186-4 . ПМИД   14550635 .
  19. ^ Харви Э.Н. (1926). «Кислород и люминесценция с описанием методов удаления кислорода из клеток и жидкостей» . Биологический бюллетень . 51 (2): 89–97. дои : 10.2307/1536540 . JSTOR   1536540 .
  20. ^ Харви Э.Н. (1952). Биолюминесценция . Академическая пресса.
  21. ^ Шимомура О, Джонсон Ф.Х. (1975). «Регенерация фотобелка экворина». Природа . 256 (5514): 236–238. Бибкод : 1975Natur.256..236S . дои : 10.1038/256236a0 . ПМИД   239351 . S2CID   4176627 .
  22. ^ Шимомура О, Джонсон Ф.Х., Морис Х (1974). «Механизм люминесцентной внутримолекулярной реакции экворина». Биохимия . 13 (16): 3278–3286. дои : 10.1021/bi00713a016 . ПМИД   4152180 .
  23. ^ Шимомура О, Джонсон Ф.Х. (1970). «Связывание кальция, квантовый выход и излучающая молекула в биолюминесценции экворина». Природа . 227 (5265): 1356–1357. Бибкод : 1970Natur.227.1356S . дои : 10.1038/2271356a0 . ПМИД   4393938 . S2CID   4284185 .
  24. ^ Иноуе С., Сасаки С. (2006). «Синий флуоресцентный белок из чувствительного к кальцию фотопротеина экворина: каталитические свойства окисления целентеразина как оксигеназы» . ФЭБС Летт . 580 (8): 1977–1982. дои : 10.1016/j.febslet.2006.02.065 . ПМИД   16545379 .
  25. ^ Шимомура О, Джонсон Ф.Х. (1975). «Химическая природа систем биолюминесценции кишечнополостных» . Труды Национальной академии наук . 72 (4): 1546–1549. Бибкод : 1975PNAS...72.1546S . дои : 10.1073/pnas.72.4.1546 . ПМЦ   432574 . ПМИД   236561 .
  26. ^ Шимомура О, Иноуе С, Мусики Б, Киши Ю (1990). «Рекомбинантный экворин и рекомбинантные полусинтетические экворины. Клеточные индикаторы ионов Са2+» . Биохим. Дж . 270 (2): 309–312. дои : 10.1042/bj2700309 . ПМЦ   1131721 . ПМИД   2400391 .
  27. ^ Риджуэй Э.Б., Эшли CC (1967). «Переходные процессы кальция в отдельных мышечных волокнах». Биохим. Биофиз. Рез. Коммун . 29 (2): 229–234. дои : 10.1016/0006-291x(67)90592-x . ПМИД   4383681 .
  28. ^ Ченг С.И., Уэбб С.Е., Мэн А., Миллер А.Л. (2006). «Транзиторная экспрессия апоаекворина у эмбрионов рыбок данио: расширение способности отображать переходные процессы кальция на более поздних стадиях развития» . Межд. Дж. Дев. Биол . 50 (6): 561–569. дои : 10.1387/ijdb.062151cc . ПМИД   16741871 .
  29. ^ Ремболд СМ, Кендалл Дж. М., Кэмпбелл А. К. (январь 1997 г.). «Измерение изменений саркоплазматического ретикулума [Ca2+] в хвостовой артерии крысы с помощью целевого апоэкворина, доставляемого аденовирусным вектором». Клеточный кальций . 21 (1): 69–79. дои : 10.1016/s0143-4160(97)90098-1 . ПМИД   9056079 .
  30. ^ Ямано К., Мори К., Накано Р., Кусуноки М., Иноуэ М., Сато М. (2007). «Идентификация функциональной экспрессии рецептора аденозина А3 в поджелудочной железе с использованием трансгенных мышей, экспрессирующих апоаекворин медузы». Трансгенный Рез . 16 (4): 429–435. дои : 10.1007/s11248-007-9084-0 . ПМИД   17387626 . S2CID   19339429 .
  31. ^ Шеу Ю.А., Крика Л.Дж., Притчетт Д.Б. (1993). «Измерение внутриклеточного кальция с использованием биолюминесцентного экворина, экспрессируемого в клетках человека» . Анальный. Биохим . 209 (2): 343–347. дои : 10.1006/abio.1993.1132 . ПМИД   8470808 .
  32. ^ Митхефер А, Мазар С (2002). «Измерение внутриклеточного кальция с помощью экворина 2+ сигнатуры в растительных клетках» . Биол. Proced. Online . 4 : 105–118. doi : 10.1251/bpo40 . PMC   145563. 12734562. PMID   оригинала Архивировано из 28 июля 2005 г.
  33. ^ Блинкс-младший, Вир В.Г., Хесс П., Прендергаст Ф.Г. (1982). «Измерение Са 2+ концентрации в живых клетках» . Prog Biophys Mol Biol . 40 (1–2): 1–114. doi : 10.1016/0079-6107(82)90011-6 . PMID   6758036 .
  34. ^ Монтеро М., Брини М., Марсо Р., Альварес Дж., Ситиа Р., Поццан Т., Риццуто Р. (1995). «Мониторинг динамических изменений в Free Ca 2+ концентрация в эндоплазматическом ретикулуме интактных клеток» . EMBO J. 14 ( 22): 5467–5475. doi : 10.1002/ . PMC   394660. j.1460-2075.1995.tb00233.x PMID   8521803 .
  35. ^ Кендалл Дж.М., Бадминтон Миннесота, Сала-Ньюби ГБ, Кэмпбелл А.К., Ремболд К.М. (1996). «Рекомбинантный апоаекворин, действующий как псевдолюцифераза, сообщает о микромолярных изменениях в эндоплазматическом ретикулуме, свободном от кальция. 2+ интактных клеток» . Biochem J. 318 ( 2): 383–387. : 10.1042 /bj3180383 . PMC   1217633. . PMID   8809023 doi
  36. ^ Мияваки А., Ллопис Дж., Хайм Р., Маккаффери Дж.М., Адамс Дж.А., Икура М., Цьен Р.Ю. (1997). «Флуоресцентные индикаторы Ca 2+ на основе зеленых флуоресцентных белков и кальмодулина» . Nature . 388 : 882–887. Bibcode : 1997Natur.388..882M . doi : 10.1038/42264 . PMID   9278050. (6645 ) S2CID   13745050 .
  37. ^ Хайм Н., Грисбек О (2004). «Генетически закодированные индикаторы динамики клеточного кальция на основе тропонина С и зеленого флуоресцентного белка» . J Биол Хим . 279 (14): 14280–14286. дои : 10.1074/jbc.M312751200 . ПМИД   14742421 .
  38. ^ Гамильтон, Марта М. (11 сентября 2021 г.). «Улучшает ли добавка Преваген память? Этот вопрос задается в судебном деле» . Вашингтон Пост . Проверено 11 сентября 2021 г.
  39. ^ Фокс М (9 января 2017 г.). «Преваген, добавка для улучшения памяти медуз – это обман, утверждает Федеральная торговая комиссия» . Новости Эн-Би-Си . Проверено 9 января 2017 г.
  40. ^ Ли Д.К. (9 января 2017 г.). «В своем иске Шнайдерман назвал Prevagen «явным мошенничеством»» . Нью-Йорк Пост . Проверено 9 января 2017 г.
  41. ^ «Заявления Prevagen о подозрительной памяти подверглись критике со стороны федеральных регулирующих органов» . Правда в рекламе . 9 января 2017 года . Проверено 9 января 2017 г.
  42. ^ Школа общественного здравоохранения Калифорнийского университета в Беркли, Здоровье после 50 лет , «Забудьте о белке медузы», зима, 2017–18, стр. 6
  43. ^ «Преваген: как может эта добавка для памяти провалить одно испытание и при этом рекламироваться как эффективная?» . Центр науки в интересах общества . 20 ноября 2017 года . Проверено 20 сентября 2018 г.
  44. ^ «Добавка Prevagen от Quincy Bioscience, октябрь 2018 г.» , Правда в рекламе , октябрь 2018 г. Проверено 14 ноября 2018 г.
  45. ↑ FTC против Quincy Bioscience Holding Company , Апелляционный суд США второго округа, дело 17-3745, документ 257, 21 февраля 2019 г. Проверено 26 марта 2019 г.
  46. ^ «Преваген идет наперекосяк» , «Правда в рекламе» , 22 февраля 2019 г. Проверено 26 марта 2019 г.
  47. ^ Перейти обратно: а б Мора, Майкл А. (24 марта 2020 г.). «Федеральный мировой судья рекомендует подтвердить общенациональный групповой иск Prevagen во Флориде» . Ежедневный обзор бизнеса . Law.com . Проверено 24 марта 2020 г.
  48. ^ «Отчет и рекомендации по ходатайству истца о сертификации класса» . Гугл Документы . Окружной суд США, Южный округ Флориды, отделение Майами. 19 марта 2020 г. Проверено 24 октября 2020 г.
  49. ^ «Соглашение по коллективному иску о добавке Prevagen для здоровья мозга» . Действия высшего класса . 21 сентября 2020 г.
  50. ^ Холл, Харриет (4 декабря 2018 г.). «Ридерз Дайджест продвигает Преваген» . Научная медицина . Архивировано из оригинала 5 декабря 2018 года . Проверено 5 декабря 2018 г.
  51. ^ Хьюм, Энн. «Апоаэкворин для улучшения памяти?» . Фармацевт.com. Архивировано из оригинала 5 декабря 2018 года . Проверено 5 декабря 2018 г.
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Aequorin&oldid=1227862702"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 6a9f46f8ba25762fcf89fd44a40ac215__1717816020
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/6a/15/6a9f46f8ba25762fcf89fd44a40ac215.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Aequorin - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)