Девять
NeuN (Fox-3, Rbfox3 или гексарибонуклеотидсвязывающий белок-3) , белок, который является гомологом белкового продукта гена, определяющего пол у Caenorhabditis elegans нейронов , представляет собой ядерный антиген , который обычно используется в качестве биомаркера для нейронов. .
История
[ редактировать ]NeuN был впервые описан в 1992 году Малленом и др., которые создали серию моноклональных антител к мышиным антигенам с первоначальной целью найти видоспецифичные иммунологические маркеры мышей для использования в экспериментах по трансплантации. [1] В итоге они выделили линию гибридомы , которая продуцировала моноклональное антитело под названием mAb A60, которое, как оказалось, связывало антиген, экспрессируемый только в ядрах нейронов и в меньшей степени в цитоплазме нейрональных клеток, и которое, по-видимому, действовало на всех позвоночных. Поэтому этот антиген был известен как NeuN, что означает «нейрональные ядра», хотя то, с чем связывалось антитело A60, было неизвестно в течение следующих 17 лет. В конце концов Ким и др. использовали протеомные методы, чтобы показать, что NeuN соответствует белку, известному как Fox-3, также известному как Rbfox3, гомологу Fox-1 у млекопитающих, белку, первоначально выявленному в результате генетических исследований определения пола у нематодного червя Caenorhabditis elegans , см. ниже. [2]
Структура
[ редактировать ]Вестерн-блоттинг показывает, что мАт А60 связывается с двумя полосами с кажущейся молекулярной массой ~46 кДа и ~48 кДа на SDS-PAGE . Эти две полосы образуются из одного гена Fox-3 путем альтернативного сплайсинга . Фактически существует четыре белковых продукта гена Fox-3 в результате присутствия или отсутствия двух аминокислотных последовательностей, кодируемых двумя экзонами. [3] Включение или отсутствие 47 аминокислот из экзона 12 приводит к появлению полос ~46 кДа и ~48 кДа, видимых на гелях SDS-PAGE, тогда как включение или отсутствие 14 аминокислот из экзона 15 приводит к образованию двух форм, которые слишком похожи по размеру молекулы, чтобы можно обнаружить на типичных гелях SDS-PAGE. Интересно, что белок, кодируемый экзоном 15, добавляет последовательность ядерной локализации C-концевого типа PY , что, по-видимому, объясняет, почему белок NeuN/Fox-3 может быть как ядерным, так и, в некоторых типах клеток, также цитоплазматическим . Все формы экспрессируются только в нейронах, поэтому антитело mAb A60 и другие подобные антитела к NeuN/Fox-3 стали очень широко использоваться в качестве надежных маркеров нейронов.
Использование в качестве нейронального биомаркера
[ редактировать ]Антитела NeuN широко используются для маркировки нейронов, несмотря на некоторые недостатки, и поиск в Pubmed в июне 2024 года с использованием ключевого слова «NeuN» дал более 5000 результатов. [4] Некоторые типы нейрональных клеток не распознаются антителами NeuN, например, клетки Пуркинье , звездчатые клетки и клетки Гольджи мозжечка, обонятельные митральные клетки , фоторецепторы спинного мозга сетчатки и гамма-мотонейроны . Однако подавляющее большинство нейронов являются строго NeuN-положительными, и иммунореактивность NeuN широко используется для идентификации нейронов в тканевых культурах, в срезах и для измерения соотношения нейрон/глия в областях мозга. [5] Иммунореактивность NeuN становится очевидной по мере взросления нейронов, обычно после того, как у них снижается экспрессия даблкортина , маркера, наблюдаемого на самых ранних стадиях развития нейронов.
Феминизирующий локус на X-гомологе
[ редактировать ]Fox-3 является одним из трех гомологов белка Fox-1 у млекопитающих, первоначально обнаруженного как белковый продукт гена, участвующего в определении пола у нематодного червя C. elegans . [6] «Фокс» — это аббревиатура от «Феминизирующий локус на X». Геном млекопитающих содержит три гена, гомологичных C. elegans Fox-1 (также известные как RBFOX1, A2BP, A2BP1 и HRNBP1), Fox-2 (также известные как RBFOX2, RBM9, RTA и HRNBP2) и Fox-3 (также известные как RBFOX3 и HRNBP3). Названия HGNC для трех белков — RBFOX1, RBFOX2 и RBFOX3 соответственно. Каждый из белков Fox имеет размер около 46 кДа и каждый включает центральный высококонсервативный мотив распознавания RRM или РНК из ~70 аминокислот . Домены RRM являются одними из наиболее распространенных в геноме человека и встречаются во многих белках, связывающих РНК . Три белка Fox млекопитающих участвуют в регуляции сплайсинга мРНК и связывают специфические последовательности РНК. [7] Альтернативное название этих трех белков - белки, связывающие гексарибонуклеотиды 1, 2 и 3 (HRNBP1, 2 и 3), поскольку все три связывают гексарибонуклеотид UGCAUG, причем это связывание участвует в регуляции сплайсинга мРНК.
Ссылки
[ редактировать ]По состоянию на 15 июня 2011 г. эта статья полностью или частично взята из материалов EnCor Biotechnology Inc. Владелец авторских прав лицензировал контент таким образом, чтобы его можно было повторно использовать в соответствии с CC BY-SA 3.0 и GFDL . Все соответствующие условия должны быть соблюдены. Исходный текст был «Моноклональные антитела к Fox3/NeuN».
- ^ Маллен, Р.Дж.; Бак, ЧР; Смит, AM (1992). «NeuN, нейронально-специфичный ядерный белок у позвоночных». Разработка . 116 (1): 201–11. дои : 10.1242/dev.116.1.201 . ПМИД 1483388 .
- ^ Ким, К.К.; Адельштейн, Р.С.; Кавамото, С (2009). «Идентификация ядер нейронов (NeuN) как Fox-3, нового члена семейства генов факторов сплайсинга Fox-1» . Журнал биологической химии . 284 (45): 31052–61. дои : 10.1074/jbc.M109.052969 . ПМК 2781505 . ПМИД 19713214 .
- ^ Дредж, БК; Дженсен, КБ (2011). «Ядерные и цитоплазматические изоформы NeuN/Rbfox3 по-разному регулируют альтернативный сплайсинг и бессмысленный распад Rbfox2» . ПЛОС ОДИН . 6 (6): e21585. Бибкод : 2011PLoSO...621585D . дои : 10.1371/journal.pone.0021585 . ПМК 3126832 . ПМИД 21747913 .
- ^ «НейН – ПабМед – NCBI» .
- ^ Эркулано-Хаузель, С; Лент, Р. (2005). «Изотропный фракционатор: простой и быстрый метод количественного определения общего числа клеток и нейронов в мозге» . Журнал неврологии . 25 (10): 2518–21. doi : 10.1523/JNEUROSCI.4526-04.2005 . ПМК 6725175 . ПМИД 15758160 .
- ^ Ходжкин, Дж; Зеллан, доктор медицинских наук; Альбертсон, Д.Г. (1994). «Идентификация кандидатного первичного локуса определения пола, fox-1, на Х-хромосоме Caenorhabditis elegans». Разработка . 120 (12): 3681–9. дои : 10.1242/dev.120.12.3681 . ПМИД 7821230 .
- ^ Андервуд Дж.Г., Бутц П.Л., Догерти Дж.Д., Стоилов П., Блэк Д.Л. (2005). «Гомологи белка Fox-1 C. elegans являются регуляторами сплайсинга нейронов у млекопитающих» . Мол. Клетка. Биол . 25 (22): 10005–10016. дои : 10.1128/MCB.25.22.10005-10016.2005 . ПМК 1280273 . ПМИД 16260614 .