Изопропил β- D -1-тиогалактопиранозид
| |
| Имена | |
|---|---|
| Название ИЮПАК
Пропан-2-ил 1-тио-β- D -галактопиранозид
| |
| Систематическое название ИЮПАК
( 2R ,3R , 4S , 5R , 6S ) -2-(Гидроксиметил)-6-[(пропан-2-ил)сульфанил]оксан-3,4,5-триол | |
| Идентификаторы | |
3D model ( JSmol )
|
|
| ХимическийПаук | |
| Информационная карта ECHA | 100.006.094 |
| МеШ | Изопропил+Тиогалактозид |
ПабХим CID
|
|
| НЕКОТОРЫЙ | |
Панель управления CompTox ( EPA )
|
|
| Характеристики | |
| С 9 Н 18 О 5 С | |
| Молярная масса | 238.30 g·mol −1 |
Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа).
| |
Изопропил β- d -1-тиогалактопиранозид ( ИПТГ ) представляет собой реагент молекулярной биологии . Это соединение является молекулярным имитатором аллолактозы , лактозы метаболита , который запускает транскрипцию оперона lac , и поэтому используется для индукции экспрессии белка, когда ген находится под контролем оператора lac .
Механизм действия
[ редактировать ]Подобно аллолактозе, IPTG связывается с lac-репрессором и высвобождает тетрамерный репрессор из lac-оператора аллостерическим способом , тем самым обеспечивая транскрипцию генов в lac-опероне, таких как ген, кодирующий бета-галактозидазу , фермент гидролазы, катализирующий гидролиз β-галактозидов до моносахаридов. Но в отличие от аллолактозы атом серы ( S ) создает химическую связь, которая не гидролизуется клеткой, предотвращая метаболизм или разрушение индуктора клеткой . Поэтому его концентрация остается постоянной в течение эксперимента.
Поглощение ИПТГ E. coli может быть независимым от действия пермеазы лактозы , поскольку задействованы и другие пути транспорта. [ 1 ] При низкой концентрации IPTG проникает в клетки через пермеазу лактозы, но при высоких концентрациях (обычно используемых для индукции белка) IPTG может проникать в клетки независимо от пермеазы лактозы. [ 2 ]
Использование в лаборатории
[ редактировать ]При хранении в виде порошка при температуре 4 °C или ниже IPTG стабилен в течение 5 лет. Он значительно менее стабилен в растворе; Сигма рекомендует хранить не более месяца при комнатной температуре. [ 3 ] ИПТГ является эффективным индуктором экспрессии белка в диапазоне концентраций от 100 мкмоль/л до 3,0 ммоль/л . Обычно стерильный, отфильтрованный раствор ИПТГ с концентрацией 1 моль/л добавляют в соотношении 1:1000 к экспоненциально растущей бактериальной культуре, чтобы получить конечную концентрацию 1 ммоль/л. Используемая концентрация зависит от необходимой силы индукции, а также генотипа используемых клеток или плазмиды. Если я д Если присутствует мутант, который сверхпродуцирует lac-репрессор, то может потребоваться более высокая концентрация IPTG. [ 4 ]
В сине-белом экране IPTG используется вместе с X-gal . Сине-белый экран позволяет идентифицировать в экспериментах по клонированию колонии, трансформированные рекомбинантной плазмидой, а не нерекомбинантной. [ нужна ссылка ] [ 5 ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Хансен Л.Х., Кнудсен С., Соренсен С.Дж. (июнь 1998 г.). «Влияние гена lacY на индукцию индуцируемых IPTG промоторов, изученных на Escherichia coli и Pseudomonas fluorescens » . Курс. Микробиол . 36 (6): 341–7. дои : 10.1007/s002849900320 . ПМИД 9608745 . S2CID 22257399 . Архивировано из оригинала 18 октября 2000 г.
- ^ Марбах А., Беттенброк К. (2012). «Индукция lac-оперона в Escherichia coli: систематическое сравнение индукции IPTG и TMG и влияния трансацетилазы LacA». Журнал биотехнологии . 157 (1): 82–8. дои : 10.1016/j.jbiotec.2011.10.009 . ПМИД 22079752 .
- ^ https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Product_Information_Sheet/i5502pis.pdf [ мертвая ссылка ]
- ^ Компетентные клетки BL21(DE3), Компетентные клетки BL21(DE3)pLysS и Руководство по эксплуатации компетентных клеток BL21 (редакция № 066004e). Ла-Хойя, Калифорния: Стратаген. 2006. с. 7.
- ^ https://www.agilent.com/Library/usermanuals/Public/200521.pdf . [ только URL-адрес PDF ]