пара -Нитрофенилфосфат
| |||
| Имена | |||
|---|---|---|---|
| Предпочтительное название ИЮПАК 4-нитрофенилдигидрофосфат | |||
| Другие имена пАЭС | |||
| Идентификаторы | |||
3D model ( JSmol ) | |||
| КЭБ | |||
| ХЭМБЛ | |||
| ХимическийПаук | |||
| Информационная карта ECHA | 100.005.777 | ||
ПабХим CID | |||
| НЕКОТОРЫЙ | |||
Панель управления CompTox ( EPA ) | |||
| Характеристики | |||
| C6H6NOC6H6NO6P P | |||
| Молярная масса | 219.09 | ||
| Родственные соединения | |||
Родственные соединения | Параоксон | ||
Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа). | |||
пара -Нитрофенилфосфат ( pNPP ) представляет собой небелковый хромогенный субстрат для щелочных и кислых фосфатаз, используемый в ИФА и обычных спектрофотометрических анализах. [1] Фосфатазы катализируют гидролиз pNPP, высвобождая неорганический фосфат и сопряженное основание пара -нитрофенола (pNP). Полученный фенолят имеет желтый цвет с максимальным поглощением при 405 нм. [2] Это свойство можно использовать для определения активности различных фосфатаз, включая щелочную фосфатазу (АР) и протеинтирозинфосфатазу (ПТФ). [3]
PNPP классифицируется как хромогенный субстрат из-за его способности превращаться из бесцветного соединения в окрашенное посредством биологического механизма дефосфорилирования. [4] PNPP используется из-за его низкой стоимости и возможности измерения скорости реакции в широком диапазоне концентраций субстрата, поскольку концентрация субстрата не является ограничивающим фактором в реакции. Ограничением PNPP является то, что это небольшая молекула и, возможно, не полностью отражает условия и структуры, встречающиеся физиологически. [5]
Анализ PNPP включает смешивание образца со смесью, содержащей PNPP, и предоставление реакции протекать в течение заранее определенного периода времени. После этого процесс останавливают добавлением стоп-раствора, часто изготовленного из сильнодействующей щелочи, такой как гидроксид натрия. [6]
Вещество чувствительно к свету, поэтому его следует хранить в защищенном от света месте. Это также важно после добавления субстрата в смесь и перед чтением. −20 °C – оптимальная температура хранения. [7]
Чтобы получить точные и достоверные результаты, параметры анализа необходимо тщательно регулировать, поскольку реакция чувствительна к таким факторам, как pH, температура и различное количество ингибиторов или стимуляторов. [8]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Лоренц, Ульрика (07 мая 2017 г.). «Анализ протеин-тирозинфосфатазы» . Современные протоколы в иммунологии . 91 (1): 11.7.1–12. дои : 10.1002/0471142735.im1107s93 . ISBN 978-0471142737 . ПМК 3097125 . ПМИД 21462163 .
- ^ Макинтош, К. (1993). В Д.Г. Харди (ред.). Фосфорилирование белков: практический подход . 221. Нью-Йорк: IRL Press.
- ^ Мацусима, Аяко; Иноуэ, Ёринао; Сибата, Кадзуо (1975). «Производная абсорбционная спектрофотометрия нативных белков» . Аналитическая биохимия . 65 (1–2): 362–368. дои : 10.1016/0003-2697(75)90520-5 . ISSN 0003-2697 . ПМИД 1169006 .
- ^ Национальный центр биотехнологической информации (2023). Краткое описание соединений PubChem для CID 4686862, п-нитрофенилфосфат. Получено 14 мая 2023 г. с https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/p-Nitroфенил-фосфат .
- ^ Меркан, Фатих; Беннетт, Антон М. (июль 2010 г.). «Анализ протеинтирозинфосфатаз и субстратов» . Современные протоколы молекулярной биологии . 91 (1). дои : 10.1002/0471142727.mb1816s91 . ISSN 1934-3639 . ПМЦ 4351734 .
- ^ Ли, Тонг; Чжун, Вэнь; Цзин, Чуаньюн; Ли, Сюгуан; Чжан, Тонг; Цзян, Чуаньцзя; Чен, Вэй (21 июля 2020 г.). «Усиленный гидролиз п-нитрофенилфосфата наночастицами (гидрокси) оксида железа: роль открытых граней» . Экологические науки и технологии . 54 (14): 8658–8667. дои : 10.1021/acs.est.9b07473 . ISSN 0013-936X .
- ^ Биолаборатории, Новая Англия. «п-Нитрофенилфосфат (ПНФФ) – НЭБ» . www.NEB.com . Проверено 29 октября 2017 г.
- ^ Терефе, Н.С.; Арими, Дж. М.; ВанЛой, А.; Хендрикс, М. (1 октября 2004 г.). «Кинетика катализируемого щелочной фосфатазой гидролиза динатрий-п-нитрофенилфосфата: влияние углеводных добавок, низкой температуры и замораживания» . Биотехнологический прогресс . 20 (5): 1467–1478. дои : 10.1021/bp0498894 . ISSN 8756-7938 .