✖


Jump to content

Массивное параллельное секвенирование

Массивное параллельное секвенирование или массово-параллельное секвенирование — это любой из нескольких высокопроизводительных подходов к секвенированию ДНК, использующих концепцию массово-параллельной обработки; его также называют секвенированием следующего поколения ( NGS ) или секвенированием второго поколения . Некоторые из этих технологий появились в период с 1993 по 1998 год. [1] [2] [3] [4] [5] и коммерчески доступны с 2005 года. В этих технологиях используются миниатюрные и параллельные платформы для секвенирования от 1 миллиона до 43 миллиардов коротких чтений (от 50 до 400 оснований каждое) за один цикл работы прибора.

Многие платформы NGS различаются инженерными конфигурациями и химическим составом секвенирования. Они разделяют техническую парадигму массового параллельного секвенирования с помощью пространственно разделенных, клонально амплифицированных матриц ДНК или отдельных молекул ДНК в проточной ячейке . Этот дизайн сильно отличается от метода секвенирования по Сэнгеру , также известного как капиллярное секвенирование или секвенирование первого поколения, которое основано на электрофоретическом разделении продуктов обрыва цепи, полученных в ходе отдельных реакций секвенирования. [6] Эта методология позволяет проводить секвенирование в большем масштабе. [7]

Платформы НГС

[ редактировать ]

Секвенирование ДНК с использованием коммерчески доступных платформ NGS обычно проводится в следующие этапы. Во-первых, библиотеки секвенирования ДНК создаются путем клональной амплификации с помощью ПЦР in vitro . Во-вторых, ДНК секвенируется путем синтеза , так что последовательность ДНК определяется добавлением нуклеотидов к комплементарной цепи, а не химическим путем обрыва цепи. В-третьих, пространственно разделенные амплифицированные матрицы ДНК секвенируются одновременно в массовом параллельном режиме без необходимости проведения стадии физического разделения. Эти шаги выполняются на большинстве платформ NGS, но каждая использует свою стратегию. [8]

Распараллеливание NGS реакций секвенирования позволяет генерировать от сотен мегабаз до гигабаз считываний нуклеотидных последовательностей за один проход прибора. Это позволило резко увеличить количество доступных данных о последовательностях и фундаментально изменить подходы к секвенированию генома в биомедицинских науках. [9] Новые технологии и инструменты NGS также способствовали значительному снижению стоимости секвенирования, приближающейся к отметке в 1000 долларов за секвенирование генома . [10] [11]

По состоянию на 2014 год платформы массово-параллельного секвенирования коммерчески доступны, и их характеристики обобщены в таблице. Поскольку темпы развития технологий NGS быстро развиваются, технические характеристики и цены меняются.

HiSeq Секвенатор Illumina 2000
Платформы НГС
Платформа Подготовка шаблона Химия Максимальная длина чтения (базы) Время выполнения (дни) Макс. ГБ за запуск
Рош 454 Клональная эмПЦР Пиросеквенирование 400‡ 0.42 0.40-0.60
GS FLX Титан Клональная эмПЦР Пиросеквенирование 400‡ 0.42 0.035
Иллюмина МиСек Клональная мостовая амплификация Двусторонний краситель-терминатор 2x300 0.17-2.7 15
Иллюмина HiSeq Клональная мостовая амплификация Двусторонний краситель-терминатор 2х150 0.3-11 [12] 1000 [13]
Анализатор генома Illumina IIX Клональная мостовая амплификация Двусторонний краситель-терминатор [14] [15] 2х150 2-14 95
Технологии жизни SOLiD4 Клональная эмПЦР Лигирование 8-мерной цепи олигонуклеотида [16] 20-45 4-7 35-50
Life Technologies Ион Протон [17] Клональная эмПЦР Нативные dNTP, обнаружение протонов 200 0.5 100
Полная геномика Сетчатые ДНК-наношарики Нецепное лигирование 9-мерного олигонуклеотида [18] [19] [20] 7х10 11 3000
Гелископ Helicos Biosciences Одиночная молекула Двусторонний краситель-терминатор 35‡ 8 25
Тихоокеанские биологические науки SMRT Одиночная молекула Фосфосвязанные флуоресцентные нуклеотиды 10 000 ( Н50 ); 30 000+ (максимум) [21] 0.08 0.5 [22]


Отмечаются время выполнения и выходная мощность в гигабазе (ГБ) за один цикл для одноконечного секвенирования. Время выполнения и выходные данные примерно удваиваются при выполнении парного секвенирования.‡Средняя длина чтения для платформ Roche 454 и Helicos Biosciences. [23]

Способы подготовки шаблона для NGS

[ редактировать ]

При приготовлении матриц для реакций NGS используются два метода: амплифицированные матрицы, происходящие из отдельных молекул ДНК, и матрицы из одной молекулы ДНК.Для систем визуализации, которые не могут обнаружить отдельные события флуоресценции, требуется амплификация матриц ДНК. Тремя наиболее распространенными методами амплификации являются эмульсионная ПЦР (эмПЦР), метод катящегося круга и твердофазная амплификация. Окончательное распределение шаблонов может быть случайным в пространстве или по сетке.

Эмульсионная ПЦР

[ редактировать ]

В эмульсионной ПЦР методах библиотека ДНК сначала создается путем случайной фрагментации геномной ДНК. Одноцепочечные фрагменты ДНК (матрицы) прикрепляются к поверхности шариков с помощью адаптеров или линкеров, а один шарик прикрепляется к одному фрагменту ДНК из библиотеки ДНК. Поверхность шариков содержит олигонуклеотидные зонды с последовательностями, комплементарными адаптерам, связывающим фрагменты ДНК. Затем гранулы разделяются на капли водно-масляной эмульсии. В водной водно-масляной эмульсии каждая капля, захватывающая одну гранулу, представляет собой микрореактор ПЦР , производящий амплифицированные копии одной матрицы ДНК. [24] [25] [26]

Наношарики с катящимися кругами с сеткой

[ редактировать ]

За амплификацией популяции одиночных молекул ДНК путем амплификации по катящемуся кругу в растворе следует захват на сетке пятен, размер которых меньше размера ДНК, подлежащей иммобилизации. [27] [28] [29] [30]

Генерация колоний ДНК (мостовая амплификация)

[ редактировать ]

Прямые и обратные праймеры ковалентно прикрепляются к предметному стеклу в проточной кювете с высокой плотностью. Соотношение праймеров и матрицы на носителе определяет поверхностную плотность амплифицированных кластеров. Проточная ячейка подвергается воздействию реагентов для полимеразного удлинения, и прайминг происходит, когда свободный/дистальный конец лигированного фрагмента «соединяется» с комплементарным олигонуклеотидом на поверхности. Повторяющаяся денатурация и удлинение приводят к локализованной амплификации фрагментов ДНК в миллионах отдельных мест на поверхности проточной ячейки. Твердофазная амплификация дает 100–200 миллионов пространственно разделенных матричных кластеров, предоставляя свободные концы, с которыми затем гибридизуется универсальный праймер для секвенирования, чтобы инициировать реакцию секвенирования. [24] [25] Эта технология была подана на патент в 1997 году в Женевском институте биомедицинских исследований (GBRI) компании Glaxo-Welcome Паскалем Майером , Эриком Кавашимой и Лораном Фаринелли. [4] [5] и впервые был публично представлен в 1998 году. [31] В 1994 году Крис Адамс и Стив Крон подали патент на аналогичный, но неклональный метод поверхностной амплификации, названный «мостовая амплификация». [3] адаптирован для клональной амплификации в 1997 году Чёрчем и Митрой. [27] [28]

Одномолекулярные шаблоны

[ редактировать ]

Протоколы, требующие амплификации ДНК, часто сложны в реализации и могут привести к ошибкам секвенирования. Приготовление шаблонов одиночных молекул более простое и не требует ПЦР, что может привести к ошибкам в амплифицированных шаблонах. Целевые последовательности, богатые AT и GC, часто демонстрируют систематическую ошибку амплификации, что приводит к их недостаточной представленности в выравниваниях и сборках генома.Шаблоны из одной молекулы обычно иммобилизуют на твердых носителях, используя один из по меньшей мере трех различных подходов. В первом подходе пространственно распределенные отдельные молекулы праймера ковалентно присоединяются к твердой подложке. Матрицу, которую готовят путем случайного фрагментирования исходного материала на небольшие размеры (например, ~200–250 п.о.) и добавления общих адаптеров к концам фрагмента, затем гибридизуют с иммобилизованным праймером. Во втором подходе пространственно распределенные одномолекулярные шаблоны ковалентно прикрепляются к твердой основе путем праймирования и удлинения одноцепочечных одномолекулярных шаблонов из иммобилизованных праймеров. Затем с матрицей гибридизуют общий праймер.В любом подходе ДНК-полимераза может связываться с иммобилизованной примированной конфигурацией матрицы, чтобы инициировать реакцию NGS. Оба вышеуказанных подхода используются Helicos BioSciences. В третьем подходе пространственно распределенные одиночные молекулы полимеразыприкрепляются к твердой подложке, с которой связана загрунтованная молекула матрицы. Этот подход используется Pacific Biosciences. С помощью этого метода можно использовать более крупные молекулы ДНК (до десятков тысяч пар оснований), и, в отличие от первых двух подходов, третий подход может использоваться с методами реального времени, что приводит к потенциально большей длине считывания.

Подходы к секвенированию

[ редактировать ]

Секвенирование путем синтеза

[ редактировать ]

Целью последовательного секвенирования путем синтеза (SBS) является определение последовательности образца ДНК путем обнаружения включения нуклеотида ДНК - полимеразой . Сконструированная полимераза используется для синтеза копии одной цепи ДНК и контролируется включение каждого нуклеотида. Принцип секвенирования путем синтеза был впервые описан в 1993 году. [1] с улучшениями, опубликованными несколько лет спустя. [32] Ключевые части очень схожи для всех вариантов SBS и включают (1) амплификацию ДНК для усиления последующего сигнала и присоединения ДНК, подлежащей секвенированию, к твердой подложке, (2) генерацию одноцепочечной ДНК на твердой подложке, (3) включение нуклеотидов с использованием сконструированной полимеразы и (4) обнаружение включения нуклеотида. Затем повторяются шаги 3-4 и последовательность собирается из сигналов, полученных на шаге 4. Этот принцип секвенирования-синтеза использовался практически для всех массовых инструментов параллельного секвенирования, включая 454 , PacBio , IonTorrent , Illumina и MGI .

Пиросеквенирование

[ редактировать ]

Принцип пиросеквенирования был впервые описан в 1993 году. [1] путем объединения твердой подложки с сконструированной ДНК-полимеразой, лишенной 3-5-экзонуклеазной активности (корректура), и обнаружения люминесценции в реальном времени с использованием светлячка люциферазы . Были представлены все ключевые концепции секвенирования путем синтеза, включая (1) амплификацию ДНК для усиления последующего сигнала и прикрепление ДНК, подлежащей секвенированию (матрице), к твердой подложке, (2) генерацию одноцепочечной ДНК на твердой подложке. (3) включение нуклеотидов с использованием сконструированной полимеразы и (4) обнаружение включенного нуклеотида с помощью светового обнаружения в режиме реального времени. В последующей статье [2] концепция получила дальнейшее развитие, и в 1998 году вышла статья [32] была опубликована, в которой авторы показали, что невключенные нуклеотиды могут быть удалены с помощью четвертого фермента ( апиразы ), что позволяет проводить секвенирование путем синтеза без необходимости отмывания невключенных нуклеотидов.

Секвенирование с помощью обратимой химии терминаторов

[ редактировать ]

В этом подходе используются обратимые связанные с терминатором dNTP в циклическом методе, который включает включение нуклеотидов, флуоресцентную визуализацию и расщепление.Терминатор с флуоресцентной меткой визуализируется по мере добавления каждого dNTP, а затем расщепляется, чтобы обеспечить включение следующего основания.Эти нуклеотиды химически заблокированы, поэтому каждое включение является уникальным событием. За каждым этапом включения оснований следует этап визуализации, затем заблокированная группа химически удаляется, чтобы подготовить каждую цепь к следующему включению ДНК-полимеразой. Эта серия шагов продолжается определенное количество циклов, определяемое пользовательскими настройками прибора. Первоначально 3'-блокирующие группы были задуманы как ферментативные. [33] или химическое обращение [14] [15] Химический метод лег в основу машин Solexa и Illumina.Секвенирование с помощью обратимой химии терминаторов может представлять собой четырехцветный цикл, например, используемый Illumina/Solexa, или одноцветный цикл, например, используемый Helicos BioSciences.Helicos BioSciences использовала «виртуальные терминаторы», которые представляют собой разблокированные терминаторы со вторым аналогом нуклеозида, который действует как ингибитор. Эти терминаторы имеют соответствующие модификации для терминации или ингибирования групп, так что синтез ДНК прекращается после добавления одного основания. [25] [34] [35]

Секвенирование путем лигирования, опосредованное ферментами лигазами

[ редактировать ]

В этом подходе реакция удлинения последовательности осуществляется не полимеразами, а скорее ДНК- лигазой и либо зондами, кодируемыми одним основанием, либо зондами, кодируемыми двумя основаниями. В своей простейшей форме флуоресцентно-меченный зонд гибридизуется с комплементарной ему последовательностью, соседней с загрунтованной матрицей. Затем добавляется ДНК-лигаза, чтобы присоединить меченный красителем зонд к праймеру. Нелигированные зонды смывают, после чего проводят флуоресцентную визуализацию для определения идентичности лигированного зонда.Цикл можно повторить, используя расщепляемые зонды для удаления флуоресцентного красителя и регенерации группы 5'-PO4 для последующих циклов лигирования (цепное лигирование [16] [36] ) или путем удаления и гибридизации нового праймера с матрицей (несцепное лигирование [18] [19] ).

Фосфосвязанные флуоресцентные нуклеотиды или секвенирование в реальном времени

[ редактировать ]

Pacific Biosciences в настоящее время является лидером в этом методе.Метод секвенирования в реальном времени включает визуализацию непрерывного включения меченных красителем нуклеотидов во время синтеза ДНК: одиночных молекул ДНК-полимеразы.прикреплены к нижней поверхности отдельных волноводных детекторов нулевой моды (детекторов Zmw), которые могут получать информацию о последовательности, пока фосфосвязанные нуклеотиды включаются в растущую цепь праймера.Компания Pacific Biosciences использует уникальную ДНК-полимеразу, которая лучше объединяет фосфосвязанные нуклеотиды и позволяет повторно секвенировать замкнутые кольцевые матрицы.В то время как точность однократного чтения составляет 87%, согласованная точность была продемонстрирована на уровне 99,999% при длинах чтения в нескольких килобазах. [37] [38] В 2015 году компания Pacific Biosciences выпустила новый инструмент для секвенирования под названием Sequel System, который увеличивает производительность примерно в 6,5 раз. [39] [40]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Перейти обратно: а б с Найрен, П.; Петтерссон, Б.; Улен, М. (январь 1993 г.). «Твердофазное мини-секвенирование ДНК с помощью ферментативного люминометрического анализа неорганического пирофосфата» . Аналитическая биохимия . 208 (1): 171–175. дои : 10.1006/abio.1993.1024 .
  2. ^ Перейти обратно: а б Ронаги М., Карамохамед С., Петтерссон Б., Улен М., Нюрен П. (ноябрь 1996 г.). «Секвенирование ДНК в реальном времени с использованием обнаружения высвобождения пирофосфата». Аналитическая биохимия . 242 (1): 84–89. дои : 10.1006/abio.1996.0432 . ПМИД   8923969 .
  3. ^ Перейти обратно: а б US 5641658 , Adams CP, Kron SJ, «Способ проведения амплификации нуклеиновой кислоты с двумя праймерами, связанными с одной твердой основой», опубликован 24 июня 1997 г., передан Mosaic Technologies Inc. и Институту биомедицинских исследований Уайтхеда.  
  4. ^ Перейти обратно: а б EP 0972081 , Farinelli L, Kawashima E, Mayer P ), «Метод амплификации нуклеиновых кислот», опубликовано 13 июня 2007 г., передано Solexa Ltd.  
  5. ^ Перейти обратно: а б EP 0975802 , Кавасима Е, Фаринеллит Л, Майер П , «Метод секвенирования нуклеиновых кислот», опубликовано 23 июня 2004 г.  
  6. ^ Фелькердинг К.В., Дамес С.А., Дурчи Дж.Д. (апрель 2009 г.). «Секвенирование нового поколения: от фундаментальных исследований к диагностике» . Клиническая химия . 55 (4): 641–658. дои : 10.1373/clinchem.2008.112789 . ПМИД   19246620 .
  7. ^ Баллард Д., Винклер-Галицкий Дж., Весолы Дж. (июль 2020 г.). «Массовое параллельное секвенирование в криминалистике: преимущества, проблемы, технические особенности и перспективы» . Международный журнал юридической медицины . 134 (4): 1291–1303. дои : 10.1007/s00414-020-02294-0 . ПМЦ   7295846 . ПМИД   32451905 .
  8. ^ Андерсон М.В., Шрийвер I (май 2010 г.). «Секвенирование ДНК нового поколения и будущее геномной медицины» . Гены . 1 (1): 38–69. дои : 10.3390/genes1010038 . ПМЦ   3960862 . ПМИД   24710010 .
  9. ^ Такер Т., Марра М., Фридман Дж. М. (август 2009 г.). «Массовое параллельное секвенирование: следующий большой шаг в генетической медицине» . Американский журнал генетики человека . 85 (2): 142–154. дои : 10.1016/j.ajhg.2009.06.022 . ПМЦ   2725244 . ПМИД   19679224 .
  10. ^ фон Бубнофф А (март 2008 г.). «Секвенирование следующего поколения: гонка началась» . Клетка . 132 (5): 721–723. дои : 10.1016/j.cell.2008.02.028 . ПМИД   18329356 . S2CID   8413828 .
  11. ^ «Выпуск 2008 г.: NHGRI ищет технологии секвенирования ДНК, пригодные для повседневного лабораторного и медицинского использования» . Genome.gov . Проверено 5 августа 2012 г.
  12. ^ «Технические характеристики HiSeq 2500» . Архивировано из оригинала 6 декабря 2014 г. Проверено 6 ноября 2014 г.
  13. ^ «HiSeq v4 уже здесь… и он дает результаты | Edinburgh Genomics» . Архивировано из оригинала 6 ноября 2014 г. Проверено 6 ноября 2014 г.
  14. ^ Перейти обратно: а б Патент США 7790869 , Джу Дж., Ли З., Эдвардс Дж.Р., Итагаки Ю., «Массивный параллельный метод декодирования ДНК и РНК», опубликован 7 сентября 2010 г., передан Попечителям Колумбийского университета в Нью-Йорке.  
  15. ^ Перейти обратно: а б Бентли Д.Р., Баласубраманиан С., Свердлов Х.П., Смит Г.П., Милтон Дж., Браун К.Г. и др. (ноябрь 2008 г.). «Точное секвенирование всего человеческого генома с использованием обратимой химии терминаторов» . Природа . 456 (7218): 53–59. Бибкод : 2008Natur.456...53B . дои : 10.1038/nature07517 . ПМК   2581791 . ПМИД   18987734 .
  16. ^ Перейти обратно: а б МакКернан К.Дж., Пекхэм Х.Э., Коста Г.Л., Маклафлин С.Ф., Фу Ю, Цунг Э.Ф. и др. (сентябрь 2009 г.). «Последовательность и структурные вариации в геноме человека, обнаруженные с помощью короткого массового параллельного секвенирования лигирования с использованием двухосновного кодирования» . Геномные исследования . 19 (9): 1527–1541. дои : 10.1101/гр.091868.109 . ПМЦ   2752135 . ПМИД   19546169 .
  17. ^ «Ионный Торрент» . Архивировано из оригинала 30 декабря 2013 года . Проверено 1 января 2014 г.
  18. ^ Перейти обратно: а б Дрманак Р., Спаркс А.Б., Кэллоу М.Дж., Халперн А.Л., Бернс Н.Л., Кермани Б.Г. и др. (январь 2010 г.). «Секвенирование генома человека с использованием чтения несцепленных оснований на самособирающихся наноматрицах ДНК» . Наука . 327 (5961): 78–81. Бибкод : 2010Sci...327...78D . дои : 10.1126/science.1181498 . ПМИД   19892942 . S2CID   17309571 .
  19. ^ Перейти обратно: а б Шендуре Дж., Поррека Г.Дж., Реппас Н.Б., Лин X, Маккатчеон Дж.П., Розенбаум А.М. и др. (сентябрь 2005 г.). «Точное мультиплексное секвенирование полоний эволюционировавшего бактериального генома» . Наука . 309 (5741): 1728–1732. Бибкод : 2005Sci...309.1728S . дои : 10.1126/science.1117389 . ПМИД   16081699 . S2CID   11405973 .
  20. ^ Петерс Б.А., Кермани Б.Г., Спаркс А.Б., Алферов О., Хонг П., Алексеев А. и др. (июль 2012 г.). «Точное полногеномное секвенирование и гаплотипирование от 10 до 20 клеток человека» . Природа . 487 (7406): 190–195. Бибкод : 2012Natur.487..190P . дои : 10.1038/nature11236 . ПМЦ   3397394 . ПМИД   22785314 .
  21. ^ Inc, Pacific Biosciences, Калифорния (3 октября 2013 г.). «Pacific Biosciences представляет новую химию с большей длиной считывания для обнаружения новых особенностей в последовательности ДНК и углубленных исследований генома крупных организмов» . Информационный центр GlobeNewswire . {{cite web}}: |last= имеет общее имя ( справка )
  22. ^ Недербрагт Л (5 июля 2013 г.). «Сборка бактериального генома de novo: решенная проблема?» .
  23. ^ Фелькердинг К.В., Дамес С., Дурчи Дж.Д. (сентябрь 2010 г.). «Секвенирование нового поколения для принципов клинической диагностики и применение к целевому повторному секвенированию при гипертрофической кардиомиопатии: документ с симпозиума больницы Уильяма Бомонта 2009 года по молекулярной патологии» . Журнал молекулярной диагностики . 12 (5): 539–551. дои : 10.2353/jmoldx.2010.100043 . ПМЦ   2928417 . ПМИД   20805560 .
  24. ^ Перейти обратно: а б Чи-Сенг К., Юн Ле, Юди П., Ки-Сенг С. (апрель 2010 г.). «Технологии секвенирования нового поколения и их применение». Энциклопедия наук о жизни (ELS) . Чичестер: John Wiley & Sons, Ltd.
  25. ^ Перейти обратно: а б с Мецкер М.Л. (январь 2010 г.). «Технологии секвенирования – новое поколение». Обзоры природы. Генетика . 11 (1): 31–46. дои : 10.1038/nrg2626 . ПМИД   19997069 . S2CID   205484500 .
  26. ^ Дрессман Д., Ян Х., Траверсо Г., Кинцлер К.В., Фогельштейн Б. (июль 2003 г.). «Преобразование отдельных молекул ДНК во флуоресцентные магнитные частицы для обнаружения и подсчета генетических вариаций» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 100 (15): 8817–8822. Бибкод : 2003PNAS..100.8817D . дои : 10.1073/pnas.1133470100 . ПМК   166396 . ПМИД   12857956 .
  27. ^ Перейти обратно: а б Патент США 6485944 , Черч ГМ, Митра Р., «Репликационная амплификация массивов нуклеиновых кислот», опубликован 26 ноября 2002 г., передан президенту и членам Гарвардского колледжа.  
  28. ^ Перейти обратно: а б Митра Р.Д., генеральный директор церкви (декабрь 1999 г.). «Локализованная амплификация in situ и контактная репликация многих отдельных молекул ДНК» . Исследования нуклеиновых кислот . 27 (24): 34д–34. дои : 10.1093/нар/27.24.e34 . ПМК   148757 . ПМИД   10572186 .
  29. ^ США 9624538 , Church GM, Porreca GJ, Shendure J, Rosenbaum AM, «Секвенирование ДНК по вращающемуся кругу наносетки», опубликовано 18 апреля 2017 г., передано президенту и стипендиатам Гарвардского колледжа.  
  30. ^ Патент США 8445194 , Дрманак Р., Кэллоу М.Дж., Дрманак С., Хаузер Б.К., Юнг Г., «Массивы одиночных молекул для генетического и химического анализа», опубликовано 21 мая 2013 г., передано Callida Genomics Inc.  
  31. ^ Майер П., Маттон Дж., Адесси С., Туркатти Дж., Мермод Дж. Дж., Кавашима Э. (7–10 октября 1998 г.). Очень крупномасштабный, высокопроизводительный и недорогой метод секвенирования ДНК, основанный на новом процессе автоматического формирования двумерного рисунка ДНК . Пятая Международная конференция по автоматизации картирования и секвенирования ДНК. Сент-Луис, Миссури, США. Презентация ams98 о массовом параллельном секвенировании колонии ДНК
  32. ^ Перейти обратно: а б Ронаги, Мостафа; Улен, Матиас; Нюрен, Пол (17 июля 1998 г.). «Метод секвенирования на основе пирофосфата реального времени» . Наука . 281 (5375): 363–365. дои : 10.1126/science.281.5375.363 . ISSN   0036-8075 . ПМИД   9705713 . S2CID   26331871 .
  33. ^ US 6833246 , Balasubramanian S, «Полинуклеотидное секвенирование», опубликован 21 декабря 2004 г., передан Solexa Ltd.  
  34. ^ «Анализная технология» . Иллюмина. Архивировано из оригинала 26 августа 2012 г. Проверено 5 августа 2012 г.
  35. ^ «Истинное секвенирование одиночных молекул (tSMS™): Helicos BioSciences» . Helicosbio.com. Архивировано из оригинала 11 марта 2012 г. Проверено 5 августа 2012 г.
  36. ^ «Основы двухбазового кодирования и цветового пространства» . Appliedbiosystems.cnpg.com . Проверено 5 августа 2012 г.
  37. ^ Чин К.С., Александр Д.Х., Маркс П., Кламмер А.А., Дрейк Дж., Хайнер С. и др. (июнь 2013 г.). «Негибридные готовые сборки микробного генома на основе давно считанных данных секвенирования SMRT». Природные методы . 10 (6): 563–569. дои : 10.1038/nmeth.2474 . ПМИД   23644548 . S2CID   205421576 .
  38. ^ Моника Хегер (5 марта 2013 г.). «Пользователи PacBio сообщают о прогрессе в длинных чтениях по сборке генома растений и сложных участках генома человека» .
  39. ^ «PacBio представляет высокопроизводительную и недорогую систему секвенирования одиночных молекул» . Октябрь 2015.
  40. ^ «PacBio анонсирует систему секвенирования сиквелов - мир био-ИТ» . www.bio-itworld.com . Архивировано из оригинала 2 октября 2015 г.
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Massive_parallel_sequencing&oldid=1189309581"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 91c1e21774e258c0a584dce0cdeeb356__1702247400
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/91/56/91c1e21774e258c0a584dce0cdeeb356.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Massive parallel sequencing - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)